采用柱前衍生反相超高效液相色谱法分析土壤中的精胺

吴艳萍 冯蓓珺 汪 京

（实朴检测技术（上海）股份有限公司 上海 201108）

1 前言

精胺（CAS号:71-44-3）是含有2个氨基和2个亚氨基的多胺类物质，在生物体内由腐胺（丁二胺）和S-腺苷蛋氨酸经多种酶催化后生成，是一种生物胺。在纺织工业中，常用于洗涤羊毛和丝绸。精胺在高浓度（1 mM）时，对神经有保护作用，在低浓度时，具有神经毒性。

目前，精胺的检测方法有3种，高效液相色谱质谱法[1，2]（HPLC/MS）灵敏度高，但价格昂贵；气相色谱法[3]（GC），需要进行烦琐的衍生步骤；离子色谱法[4，5]（IC）具有前处理简单、快捷、灵敏度高的特点，在生物胺的检测分析上也有应用，但由于生物胺为有机弱碱，灵敏度低，并不适用。大多数研究是对食品、水质、药品等基质中的精胺进行检测，对环境中土壤样品的研究较少。本文选择高效液相色谱法（HPLC）测定土壤中精胺，用纯水提取，9-芴甲基氯甲酸酯（FMOC）衍生，C18柱分离，二极管阵列检测器（DAD）检测。此方法简单，高效，准确度高，检出限低。

2 材料与方法

2.1 标准品及试剂

精胺标准品:100 mg（德国 Sigma公司）；乙腈（CH3CN）（液相色谱级，美国 Thermofisher公司）；FMOC（98%）（AR，上海安谱科学仪器有限公司）；去离子水（美国Millipore 公司）；磷酸二氢钾（KH2PO4）、十水合四硼酸钠（B4Na2O7·10H2O）（AR，国药集团）；其他未注明的试剂均为分析纯。

2.2 仪器设备

超高效液相色谱仪（UPLC）:型号1290 infinity II（美国Agilent公司）；检测器:光纤型二极管阵列检测器（DAD），含3D采集功能；样品有机过滤膜:0.45μm。

2.3 标准工作溶液配制及样品前处理

标准工作溶液配制:称取精胺适量，用甲醇（CH3OH）配制成储备液，并用流动相稀释配制成不同浓度的标准工作溶液，所得最终工作溶液浓度为0.1、0.5、1.0、5.0、10.0mg/L。按样品衍生步骤进行衍生，衍生后的标准溶液置于4℃冰箱内冷藏保存，有效期不超过7天。

样品前处理:准确称取湿润的新鲜土壤样品10.0 g，置于50 mL离心管中，加入40 mL纯水，剧烈震荡1 min；超声30 min；剧烈震荡1 min。随后，以3000r/min的速度离心5min，从离心管中移取约5mL上清液过0.45 μm滤头后至另一个50 mL离心管中。从过滤后的样品中各取1 mL至另一个50 mL的离心管中，加入 1 mL 四硼酸钠（B4Na2O7），2 mL FMOC，置于40℃水浴锅中衍生1 h。冷却，过0.22 μm水相滤膜，上机测试。

2.4 液相色谱条件

液相色谱条件详见表1。

表1 液相色谱条件

3 结果与讨论

3.1标准曲线与检出限

取所配制衍生的系列标准工作溶液，按“2.4”色谱条件测定，以所得峰面积Y（单位:mAU·Sec）与浓度X（单位:μg/mL）进行线性回归分析，线性方程为Y=52.57674X+3.44204，相关系数 r=0.999 79，线性范围为 0.1～10 μg/mL，以信噪比 S/N=3计，该方法的检出限为0.1 mg/kg。

3.2 回收率与精密度实验

取空白土壤样品（每份10.0 g），添加1 000 μg/mL标准溶液 25 μL，按照“2.4”条件进行测定，计算得回收率均值为117.0%。同一样品分别测定6次，计算其相对标准偏差（RSD）为 3.01%（n=6）。

3.3 样品定性与定量分析

通过保留时间进行定性，结合DAD扫描光谱图进行峰纯度分析对比，对某区域的18份土壤样品进行了定性与定量分析，结果均未检出。其中，通过样品加标，排除了假阳性结果，详见图1、图2。

图1 精胺色谱图

图2 土壤样品分析谱图

4 结论

本文采用纯水超声提取，FMOC衍生，进行加标回收实验，提取效果较好；采用C18柱进行分离，能有效避开样品基质干扰；采用DAD检测，能准确找到目标化合物，并排除假阳性结果。因此，该法快速方便准确，能有效达到土壤中精胺分析检测的要求。