热敏灸对弱视患儿泪液中VEGF及C-Fos、CREB蛋白表达水平的影响

韩秀敏 李廷 李德辉

据相关数据统计，弱视儿童发病率为3%左右[1]。其致病机制较为复杂，且尚未完全清楚。炎性因子是细胞中较为重要的生物大分子活性蛋白，可调控多种疾病的病理过程，研究报道，炎性因子在眼部疾病的发病过程中也有着重要意义[2,3]。目前治疗儿童弱视常采用西医治疗，但是达不到理想效果。热敏灸是临床上常用的中医治疗方法，在消化系统及骨科疾病中广泛应用，通过燃着的艾材所产生的艾热作用对穴位作用来发挥治疗的作用，具有生肌去腐、化瘀消肿、活血止痛的功效，可促进局部组织新陈代谢，加快血液循环[4,5]。本研究探讨热敏灸对弱视患儿泪液中VEGF及C-Fos、CREB蛋白表达水平的影响。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2016年11月至2018年10月青岛市妇女儿童医院眼科收治的92例弱视儿童作为研究对象，按照治疗方式不同分观察组和对照组，每组46例。观察组：男22例，女24例；年龄5～8岁，平均年龄(5.14±1.23)岁。对照组：男23例，女23例；年龄4～7岁，平均年龄(5.16±1.01)岁。2组一般资料比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

1.2 纳入与排除标准 纳入标准：(1)患儿经相关检查确诊为弱视，且符合西医诊断标准[5]；(2)神经发育完善者；(3)患者以及家属签署知情同意书。排除标准：(1)眼部发生器质性病变者；(2)有手术史。

1.3 治疗方法 对照组：采取传统西医治疗，给予患儿光栅、红光闪烁、后像及光刷，1次/d，30 min/次，持续治疗10 d。观察组：传统西医治疗+热敏灸。采取双侧风池穴热敏灸治疗，风池穴区附近热敏探查，回旋灸施行于距离皮肤3 cm左右。热敏风池穴施灸需每位患儿家属掌握，可进行相关培训，1次/d，20～40 min/次，持续治疗20 d。

1.4 观察指标 分析缝隙连接蛋白(Cx)45、43及30蛋白水平、蛋白激酶A(PKA)、CREB、脑源性神经生长因子( BNDF)、降钙素基因相关肽(CGRP)、C-Fos、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、白介素(IL1-β、IL-6和IL-9)、血管内皮生长因子(VEGF)、转化生长因子β(TGF-β)。Elab Sciences公司提供CGRP试剂盒；Abcam公司提供Cx45试剂盒；R&D公司提供PKA试剂盒；Sigma公司提供TGF-β试剂盒；Abcam公司提供CREB和BNDF试剂盒；南京建成生物工程研究所提供iNOS试剂盒；罗氏公司提供VEGF试剂盒；武汉博士德生物工程有限公司提供C-Fos和白细胞介素试剂盒；Cx43：试剂盒由R&D公司提供；Cx30：试剂盒由Omega公司提供。检测所有蛋白，采取酶联免疫吸附法，β-actin蛋白水平作为参照。

1.5 疗效标准 临床疗效[6]可分为治愈、有效和无效。治愈：矫正视力≥0.9；无效：矫正视力退步、不变后提高1行；有效：矫正视力提高≥2行。

2 结果

2.1 2组患儿临床疗效比较 观察组治愈率41.30%和有效率58.70%明显高于对照组的21.74%和47.83%，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 2组患儿临床疗效比较 n=46，例(%)

2.2 2组患儿治疗前后PKA、BNDF和CREB蛋白水平比较 2组治疗前PKA、CREB和BNDF蛋白水平差异无统计学意义(P>0.05)；治疗后观察组PKA、CREB水平下降程度高于对照组，BNDF水平上升程度高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

组别PKA/β-actin治疗前治疗后CREB/β-actin治疗前治疗后BNDF/β-actin治疗前治疗后对照组0.50±0.920.42±0.09*0.28±0.080.34±0.09*0.49±0.070.42±0.08*观察组0.50±0.930.38±0.07*#0.28±0.070.40±0.08*#0.49±0.090.38±0.04*#t值<0.0012.379<0.0013.380<0.0013.033P值1.0000.0201.000<0.0011.0000.003

注：与治疗前比较，*P<0.05；与对照组比较，#P<0.05

2.3 2组患儿治疗前后C-Fos、iNOS和CGRP水平比较 2组治疗前C-Fos、iNOS和CGRP水平差异无统计学意义(P>0.05)；治疗后观察组C-Fos、iNOS和CGRP水平下降程度高于对照组(P<0.05)。见表3。

组别CGRP/β-actin 治疗前治疗后C-Fos/β-actin 治疗前治疗后iNOS/β-actin 治疗前治疗后对照组0.42±0.080.37±0.10*0.37±0.070.32±0.06*0.40±0.070.32±0.06*观察组0.42±0.070.29±0.06*#0.37±0.080.28±0.04*#0.40±0.090.28±0.06*#t值<0.0014.653<0.0013.762<0.0013.197P值1.000<0.0011.0000.0031.0000.002

注：与治疗前比较，*P<0.05；与对照组比较，#P<0.05

2.4 2组患儿治疗前后VEGF和TGF-β水平比较 治疗前2组VEGF和TGF-β水平比较差异无统计学意义(P>0.05)；治疗后2组VEGF和TGF-β水平明显低于治疗前，且对照组VEGF和TGF-β水平下降程度低于观察组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表4。

组别TGF-β/β-actin治疗前治疗后VEGF/β-actin治疗前治疗后对照组0.46±0.060.41±0.05*0.50±0.070.43±0.06*观察组0.46±0.070.37±0.04*#0.50±0.080.38±0.06*#t值<0.0014.237<0.0013.997P值1.000<0.0011.000<0.001

注：与治疗前比较，*P<0.05；与对照组比较，#P<0.05

2.5 2组患儿治疗前后IL1-β、IL-9和IL-6比较 2组治疗前IL1-β、IL-9和IL-6比较差异无统计学意义(P>0.05)；治疗后对照组白介素水平下降程度低于观察组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表5。

组别IL-9/β-actin 治疗前治疗后IL-6/β-actin治疗前治疗后IL1-β/β-actin治疗前治疗后对照组0.40±0.040.35±0.06*0.52±0.090.47±0.08*0.48±0.060.41±0.07*观察组0.40±0.080.31±0.03*#0.52±0.100.41±0.08*#0.48±0.080.36±0.05*#t值<0.0014.0444.0443.597<0.0013.942P值1.000<0.001<0.0010.0011.000<0.001

注：与治疗前比较，*P<0.05；与对照组比较，#P<0.05

2.6 2组患儿治疗前后Cx45、Cx43及 Cx30蛋白比较 治疗前2组Cx45、Cx43及 Cx30蛋白比较无差异(P>0.05)；治疗后2组Cx45、Cx43及 Cx30蛋白明显高于治疗前，且对照组Cx45、Cx43及 Cx30蛋白水平上升程度低于观察组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表6。

组别Cx45/β-actin 治疗前治疗后Cx43/β-actin治疗前治疗后Cx30/β-actin治疗前治疗后对照组0.35±0.070.39±0.09*0.30±0.060.38±0.06*0.43±0.050.48±0.09*观察组0.35±0.100.47±0.08*#0.30±0.070.42±0.07*#0.43±0.080.53±0.10*#t值<0.0014.506<0.0012.943<0.0012.521P值1.000<0.0011.0000.0041.0000.014

注：与治疗前比较，*P<0.05；与对照组比较，#P<0.05

3 讨论

弱视作为影响患儿视功能的一种疾病，其发病与单眼斜视、屈光参差和高度屈光不正等有关。一般弱视儿童单眼或双眼最佳矫正视力比相应年龄正常儿童低[7]。资料显示，弱视患儿可出现异常视觉传导系统功能，可能与视网膜神经节细胞到视力中枢的过程受阻有关[8，9]。

热敏灸针对弱视儿童发病机制，借助温热性刺激和经络腧穴治疗。属足少阳胆经风池穴为常用腧穴，可用来治疗眼疾。风池穴针灸可使眼部血液循环明显改善，大脑皮层兴奋性明显改变，视觉细胞兴奋刺激，可滋养视网膜和视神经，视觉细胞和视路抑制消除，视路改善和激活，传导视觉细胞，眼球发育、视觉和屈光正常化，视力提高，双眼单视功能恢复[10]。本研究弱视儿童采用热敏灸联合西医治疗，结果显示观察组治愈率41.30%和有效率58.70%明显高于对照组的治愈率21.74%和有效率47.83%。说明热敏灸治疗弱视儿童具有较好治疗效果。

视觉可塑性重要作用主要在于神经营养因子和N-甲基-D-天冬氨酸受体。CREB可能参与了视觉可塑性过程，原因在于信号传导通路的下游靶分子CREB在神经元生存和分化中起关键调节作用[11]。有研究报道，分布于全身各个组织器官的缝隙连接蛋白可协调细胞间代谢和功能，缝隙连接蛋白可表达于视网膜各层[12]。视皮质神经元发育可塑性的程度可被视皮质神经元兴奋标志C-Fos蛋白表达水平反映。本研究结果中，热敏灸治疗后BNDF水平明显上升，且PKA、CREB、CGRP、C-Fos、iNOS、VEGF、TGF-β、IL1-β、IL-6和IL-9水平下降程度高于对照组，BNDF、Cx45、Cx43及 Cx30蛋白水平上升程度高于对照组。提示弱视儿童采用热敏灸具有明显治疗效果，其可能与C-Fos和CREB 蛋白被调控表达有关。

常见炎性因子白细胞介素为药物干预治疗的重要参考标志物，其表达水平在一定程度上可反映眼部疾病严重程度[13]。本研究结果中，热敏灸组治疗后IL1-β、IL-6和IL-9明显低于治疗前，且IL1-β、IL-6和IL-9水平下降程度高于西医治疗组。提示热敏灸治疗弱视儿童与白介素IL1-β、IL-6和IL-9蛋白水平被调控有关。多种眼部疾病发病的重要原因在于VEGF，研究发现，病理性近视脉络膜血管新生的病理过程有VEGF蛋白表达异常参与其中[13]。糖尿病性视网膜病变患者行抗VEGF 注射治疗联合玻璃体切割术可明显促进视网膜的恢复[14]。本研究结果中，观察组治疗后VEGF水平明显低于治疗前，且VEGF水平下降程度高于对照组。热敏灸治疗弱视儿童与VEGF 蛋白水平被调控表达有关。本研究结果中，观察组治疗后iNOS水平明显下降，且iNOS水平下降程度高于对照组。表明热敏灸治疗弱视儿童与热敏灸治疗弱视儿童与VEGF 蛋白水平被调控表达有关蛋白水平被调控表达有关。

综上所述，热敏灸治疗弱视儿童具有较好治疗效果，可能与VEGF及C-Fos、CREB蛋白表达水平被调控有关。