细胞因子在川崎病中的临床意义

胡具雄 卢一斌 马效东 肖辉 汪伟

川崎病是一种全身血管炎为主的病变综合征，其临床表现包括发热、淋巴结肿大、手足硬性水肿、皮疹等，累及心脏者易引发心肌炎、心包炎、心律失常等，严重危害患者的健康[1-2]。该病多发于5岁以下婴幼儿，成年人或3个月以下小儿极为少见[3]。近年来随着医疗技术的快速发展，临床上对川崎病的发病机制也逐渐清晰：可能以病毒、细菌为超抗原介导，引起机体免疫功能紊乱，激活免疫活化细胞并产生大量细胞因子，发生细胞因子风暴反应，造成内皮细胞及其他细胞损伤，最终引发免疫性血管炎[4-5]。据此，笔者检测了川崎病患儿血清中的细胞因子，并与普通发热患儿及体检儿童进行了对照，以进一步探讨细胞因子在川崎病中的临床意义，现将结果报道如下。

1 对象和方法

1.1 对象 选取2017年6月至2018年12月杭州市余杭区第三人民医院收治的50例川崎病患儿为川崎病组，纳入标准：（1）符合诸福棠实用儿科学第8版[6]；（2）未接受免疫治疗；（3）年龄＜10岁；（4）患儿及家属知情，并签署知情同意书。排除标准：（1）患有麻疹、败血症、特发性关节炎；（2）合并其他自身免疫系统疾病。其中男32例，女18例；年龄8个月～8岁，平均（3.26±1.33）岁。选取同院同期收治的50例普通发热、淋巴结肿大的非川崎病感染发热患儿为感染发热组，其中男30例，女20例；年龄6个月～9岁，平均（3.36±1.57）岁。同期健康体检的50例儿童为健康对照组，其中男31例，女19例；年龄6个月～8岁，平均（3.57±1.32）岁。3组儿童性别、年龄比较，差异均无统计学意义（均P＞0.05）。本研究经杭州市余杭区第三人民医院伦理委员会审查通过。

1.2 方法 清晨采集3组儿童空腹静脉血5ml，置于肝素抗凝管中，放在-70℃冰箱保存待测。其中川崎病患儿又在急性期（发病第1～11天）、亚急性期（发病第11～21天）及恢复期（发病第21～60天）各采集1次。

1.2.1 外周血T淋巴细胞亚群检测 采用流式细胞术。取抗凝血100μl，分别加入单克隆抗体FITC CD4、PE CD8及ProcP CD3各20μl，避光处理，磷酸缓冲盐溶液洗涤2次；弃上清液，加入1%多聚甲醛，在流式细胞仪上完成样品 T 淋巴细胞亚群（CD3+、CD4+、CD4+/CD8+）检测。

1.2.2 血清炎症细胞因子及其他指标检测 白细胞介素 6（IL-6）、肿瘤坏死因子 α（TNF-α）、干扰素 γ（IFN-γ）、巨噬细胞迁移抑制因子（MIF）检测采用酶联免疫吸附法，血清C反应蛋白（CRP）检测采用免疫比浊法，红细胞沉降率（ESR）检测采用经典魏氏法。使用北方邦定泰克生物技术公司生产的试剂盒检测血清IL-6、TNF-α、IFN-γ、MIF水平，操作严格按照说明书进行。使用美国贝克曼AU2700型全自动生化分析仪测定CRP、ESR水平。

1.3 统计学处理 采用SPSS 23.0统计软件。计量资料用±s表示，多组间比较采用单因素方差分析，两两比较采用Dunnett-t检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 3组对象外周血T淋巴细胞亚群比较 川崎病组CD4+、CD4+/CD8+水平明显高于感染发热组、健康对照组，而CD3+水平低于感染发热组、健康对照组，差异均有统计学意义（均P＜0.05），见表1。

表1 3组对象外周血T淋巴细胞亚群比较

2.2 川崎病患儿不同病期T淋巴细胞亚群变化 川崎病患儿急性期CD4+、CD4+/CD8+水平明显高于亚急性期和恢复期，CD3+水平明显低于亚急性期和恢复期，差异均有统计学意义（均P＜0.05）；亚急性期CD4+、CD4+/CD8+水平明显高于恢复期，CD3+水平明显低于恢复期，差异均有统计学意义（均P＜0.05），见表2。

表2 川崎病患儿不同病期T淋巴细胞亚群变化

2.3 3组儿童血清炎症细胞因子及其他指标比较 川崎病组 IL-6、TNF-α、IFN-γ、MIF、CRP、ESR 水平明显高于感染发热组、健康对照组，感染发热组IL-6、IFN-γ、MIF、CRP、ESR水平明显高于健康对照组，差异均有统计学意义（均P＜0.05），见表3。

2.4 川崎病患儿不同病期血清炎症细胞因子及其他指标变化 川崎病患儿急性期IL-6、TNF-α、IFN-γ、MIF、CRP、ESR水平明显高于亚急性期和恢复期，而亚急性期又明显高于恢复期，差异均有统计学意义（均P＜0.05），见表4。

3 讨论

近年来，我国川崎病发病率呈不断上升趋势。川崎病会导致患儿冠状动脉损害发生率明显增加，是引发后天性心脏病的主要因素之一。但目前尚未明确川崎病的发病机制，也无特异性检测手段[7-8]。

T淋巴细胞作为机体免疫功能系统的重要组成部分，是反映机体免疫功能及状态的重要指标，当T淋巴细胞亚群数量及状态发生变化或异常时，说明机体免疫功能可能发生紊乱并出现病理变化[9-10]。本研究结果显示，川崎病组T淋巴细胞亚群（CD4+、CD4+/CD8+）水平明显高于健康对照组、感染发热组，且急性期上述指标均高于亚急性期和恢复期，亚急性期又明显高于恢复期。郑丽君等[10]研究表明，川崎病患儿外周血CD4+、CD4+/CD8+水平呈明显升高而CD3+呈下降的趋势，其免疫抑制功能出现紊乱，免疫耐受失衡，CD4+T淋巴细胞出现亢奋，并参与川崎病的发病过程。Rowley等[11]研究也证实，川崎病急性期患儿外周血T淋巴细胞处于功能异常状态，疾病的发生、发展与细胞免疫功能异常密切相关，表现为CD4+CD25+调节性T细胞细胞数异常。可见，川崎病患儿T淋巴细胞调节失衡会造成免疫系统紊乱，且病情越严重则表现得更明显，急性期T淋巴细胞亚群CD4+、CD4+/CD8+水平明显升高，使机体免疫系统处于激活状态，极易引发血管炎、免疫功能损伤及冠状动脉损伤。

表3 3组儿童血清炎症细胞因子及其他指标比较

表4 川崎病患儿不同病期血清炎症细胞因子及其他指标变化

炎症细胞因子能进一步引发免疫反应增强。在川崎病患儿急性期，T淋巴细胞异常活跃，免疫功能处于被激活状态，能激活B淋巴细胞产生大量炎症细胞因子；而细胞因子风暴可进一步引发下游分子的过度表达，使得机体产生系列反应，对免疫应答及冠状动脉极为不利[12-13]。本研究结果发现，川崎病组IL-6、TNF-α、IFN-γ、CRP、ESR、MIF 水平均明显高于感染发热组、健康对照组，且急性期上述指标均明显高于亚急性期和恢复期，亚急性期又明显高于恢复期。这提示IL-6、TNF-α、IFN-γ、CRP、ESR、MIF参与川崎病的病情发展。IL-6是炎症细胞因子，能刺激免疫应答导致炎症反应，其过度表达能促使辅助性T细胞17/调节性T细胞失衡，加快免疫功能系统紊乱，使川崎病患儿产生免疫球蛋白耐药及系列血管炎反应[14]。研究表明，CRP、ESR与川崎病患儿炎症程度呈正相关，被用于川崎病急性期的评估；美国心脏协会也推荐CRP、ESR作为川崎病诊断与评估的实验室指标，以及不完全川崎病的参考诊断指标[15-16]。Rasouli等[17]研究表明，川崎病患儿急性期血清炎症因子水平呈上升趋势，经阿司匹林、静脉免疫球蛋白治疗后，T淋巴细胞亚群及炎症细胞因子水平均明显下降。IL-6、TNF-α、IFN-γ、CRP、ESR、MIF 参与川崎病的发生、发展，可作为川崎病病情评估的重要指标。

综上所述，川崎病患儿存在T淋巴细胞亚群失衡与炎症反应，临床表现为CD4+、CD4+/CD8+、IL-6、TNF-α、IFN-γ、MIF、CRP、ESR水平升高，且随病情进展而不断上升。炎症细胞因子结合T淋巴细胞亚群检测，能辅助评估川崎病的病情进展及治疗效果。