联合检测CK19、MC、TPO及CD56在甲状腺乳头状癌病理诊断中的意义

张 哲，商建峰，王 伟，陈 东

甲状腺乳头状癌是最常见的甲状腺上皮恶性肿瘤，大多数乳头状癌具有典型的细胞核改变，其中核增大和核外形不规则的相对特异性高[1]；但乳头状癌特征性核改变在其他甲状腺病变中也可见。因此，寻找相关特异性标志物，建立可靠、可行的检测手段，对甲状腺乳头状癌的诊断具有重要的临床价值。

1 材料与方法

1.1 材料收集我院2010年1月～2015年12月行甲状腺手术切除的病理标本1 092例，其中669例甲状腺乳头状癌，男性182例，年龄25～64岁，平均43.32岁；女性487例，年龄26～80岁，平均46.73岁，男女比为1 ∶2.68。另收集423例甲状腺良性病变(增生结节132例、良性乳头状增生117例及甲状腺腺瘤174例)作为对照分析。

1.2 方法所有病例均经10%中性福尔马林固定，石蜡包埋，免疫组化Power Vision法染色，一抗CK19、MC、TPO和CD56单克隆抗体均购自北京中杉金桥公司，仪器应用Lecia全自动免疫组化仪染色。

1.3 结果判断CK19、TPO阳性均定位于细胞质，MC、CD56阳性均定位于细胞膜。参考Beesley的评分方法[2]，按细胞染色强度计分：无阳性着色为0分、淡黄色为1分、棕黄色为2分、棕褐色为3分；按阳性细胞所占百分比计分：无阳性细胞为0分、<25%为1分、25%～50%为2分、>50%为3分。将两项得分结果相乘：0分为(-)，1～2分为(+)，3～4分为()，5～6分为()，其中“+～”为阳性。

1.4 统计学分析采用SPSS 17.0软件进行统计学分析，率的比较采用χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 甲状腺乳头状癌中CK19、MC、TPO、CD56的表达甲状腺乳头状癌中CK19、MC、TPO、CD56的阳性率分别为100%、98.95%、18.98%和43.20%；甲状腺良性病变中CK19、MC、TPO、CD56的阳性率分别为67.14%、13.24%、100%、100%，差异有统计学意义(P<0.01,表1、2)。甲状腺乳头状癌的肿瘤细胞中CK19呈胞质阳性(图1)，MC肿瘤细胞的腔缘呈阳性(图2)。CD56和TPO在甲状腺乳头状癌的肿瘤细胞中多呈阴性(图3、4)。

2.2 分子标志物的敏感度、特异度及准确度根据统计学计算CK19、MC、TPO及CD56的敏感度、特异度及准确度，其敏感度依次为：CK19、MC、TPO、CD56，特异度依次为：TPO、CD56、MC、CK19，准确度依次为：MC、TPO、CK19、CD56(表3)。

3 讨论

甲状腺乳头状癌是最常见的甲状腺上皮恶性肿瘤，如果肿瘤具有特异性核改变时，可直接做出诊断，然而有时肿瘤仅在局灶出现某些不确定的核改变，行常规形态学检查难以做出诊断；在一些良性病变中常见的乳头状增生病变，虽然无典型特征性细胞核改变，但出现核增大、淡染等不典型形态或乳头状结构不明显，细胞呈空泡状、偶见核沟时，与乳头状癌难以鉴别；当出现甲状腺微小乳头状癌，尤其是镜下发现的甲状腺微小乳头状癌位于硬化性间质内，其细胞形态不典型，也会带来诊断困难。

表1 甲状腺乳头状癌中CK19、MC、TPO、CD56的表达

表2 甲状腺良性病变中CK19、MC、TPO及CD56的表达

图1 甲状腺乳头状癌中CK19呈胞质阳性，Power Vision法 图2 甲状腺乳头状癌中MC呈肿瘤细胞腔缘阳性，Power Vision法 图3 甲状腺乳头状癌中CD56呈阴性(阳性为非癌组织)，Power Vison法 图4 甲状腺乳头状癌中TPO呈阴性(阳性为非癌组织)，Power Vison法

表3 四种抗体敏感度、特异度及准确度比较

目前，普遍认为CK19、Galectin-3、E-cadherin、HBME-1、ret/PTC等免疫组化标记阳性对诊断甲状腺乳头状癌意义较大。CK19主要标记各单层上皮，用于腺癌的诊断。多数文献报道CK19在甲状腺乳头状癌中呈细胞质弥漫阳性，而在正常甲状腺组织、结节性甲状腺肿、甲状腺腺瘤中呈阴性或灶阳性，CK19是鉴别甲状腺乳头状癌的有效标志物[3-4]。亦有研究发现其表达偏低[5]，认为CK19在甲状腺乳头状癌诊断中价值有限。本组669例甲状腺乳头状癌中CK19均呈弥漫强阳性，其敏感度为100.0%，但该抗体特异度较低，仅为32.86%，在良性病变中，除少数病例阴性外，大部分呈阳性，但其阳性强弱不等，可在增生结节、良性乳头及腺瘤中均呈不同程度阳性，说明CK19对甲状腺乳头状癌无特异性，其弥漫强阳性仅提示该患者有甲状腺乳头状癌的可能。

MC是间皮表面微绒毛的抗原成分，主要用于恶性间皮瘤的诊断，近年应用于甲状腺肿瘤的鉴别诊断。文献报道MC在甲状腺乳头状癌中的阳性率为90%以上[6-7]。罗巧明等[8]报道MC的敏感度、特异度及准确度分别为100.0%、90.5%、95.2%，认为MC在甲状腺微小乳头状癌的诊断中敏感度高，而特异性较差。本组中MC的敏感度、特异度及准确度分别为98.95%、86.52%及94.14%，说明该抗体在甲状腺乳头状癌的诊断中其作用要优于CK19，特异度明显高于CK19。本实验MC阳性主要集中于增生结节和良性乳头中，除此外MC上皮阳性出现于桥本甲状腺炎，提示在具有桥本甲状腺炎病变中诊断甲状腺乳头状癌要谨慎，在细胞不典型时需结合其他指标综合判断。

CD56是神经细胞黏附分子，主要用于视网膜母细胞瘤、髓母细胞瘤、星形细胞瘤、神经母细胞瘤等肿瘤和NK细胞的分析，其在甲状腺肿瘤诊断中的应用报道不一。陈英等[9]认为CD56是诊断甲状腺乳头状癌有意义的抗体，特别是在鉴别滤泡型甲状腺乳头状癌和其他滤泡性肿瘤中具有重要意义。Scarpino等[10]报道61例甲状腺乳头状癌中有18例CD56呈阴性，43例甲状腺乳头状癌中CD56阳性，但肿瘤细胞阳性率<5%，且CD56阳性肿瘤细胞位于肿瘤浸润的边缘，提示CD56失表达可能与肿瘤侵袭能力强有关。杨俊杰等[11]报道61例甲状腺乳头状癌中仅1例CD56散在表达。本组CD56在甲状腺乳头状癌中敏感度较低，仅为56.80%，部分病例阳性细胞约100%，与良性病变相似，但是其特异度高，在良性病变中均呈强阳性，提示CD56失表达可有助于提高甲状腺乳头状癌诊断的准确性。

TPO属于糖基化血红素蛋白，存在于甲状腺滤泡细胞游离面，是与甲状腺激素合成相关的酶，在T3T4合成中起重要的催化作用。位嘉等[4]应用免疫组化法检测甲状腺乳头状癌及良性乳头状病变中TPO的表达，其阳性率分别为11.9%、98.4%，其敏感度、特异度和准确度分别为88.05%、98.36%、90.91%。罗巧明等[8]报道TPO特异度及准确度更好。本组TPO的敏感度、特异度和准确度分别为81.02%、100.0%、88.37%。TPO在良性病变中均为强阳性，染色均匀一致，而在甲状腺乳头状癌中主要为弱阳性，表达部位和强弱不等，呈斑驳状。因此，TPO是一种特异性强的标志物。

综上所述，所有抗体均有可能出现假阳性或假阴性，单项指标应用存在局限性。甲状腺乳头状癌中CK19和MC为阳性抗体，CD56和TPO为阴性抗体，在实际工作中可将几种指标联合应用、相互补充，并结合组织形态学特征进一步提高甲状腺乳头状癌诊断的准确性。