miRNA-145联合CEA、PTN诊断NSCLC的价值

李曼，翟成凯，张祥杰

（新乡市第一人民医院呼吸与危重症医学科，河南 新乡 453000）

临床上非小细胞肺癌（NSCLC）的发生，能够显著影响到肺癌患者的临床结局,导致肺癌患者远期生存时间的缩短[1,2]。临床上对于NSCLC 的早期诊断, 能够在NSCLC 的早期手术治疗或者临床预后随访方面发挥作用。肿瘤调控蛋白的改变，能够在NSCLC 的发生发展过程中发挥一定的作用。其中微小RNA-145（miR-145）能够通过影响到癌细胞的转录激活程度，加剧癌细胞的核DNA 分裂的风险，最终促进肺癌的发生[3]；癌胚抗原（CEA）是非特异性的肿瘤标志物,在癌细胞异常分裂或者癌细胞膜破碎的过程中，CEA 的表达浓度可明显上升[4]；人多效蛋白（PTN）是癌细胞分化调控因子，其能够通过影响到肿瘤细胞定向分化过程,干扰到肿瘤细胞的凋亡过程,导致肿瘤细胞分化成熟的异常[5]。为了揭示miRNA-145 联合CEA、PTN 诊断肺癌的临床价值，从而为临床上NSCLC 的诊疗提供参考，本次研究选取我院经病理学检查确诊的67 例NSCLC 患者, 探讨了 miRNA-145、CEA、PTN 的表达情况及诊断学价值。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取 2016 年 3 月-2018 年 6 月我院经病理学检查确诊的 67 例NSCLC 患者为NSCLC 组、60 例健康体检对象作为对照组。NSCLC组，男 39 例、女 28 例,年龄 35~76 岁,平均 57.3±9.0岁,TNM 分期：Ⅰ期 13 例、Ⅱ期 22 例、Ⅲ期 25 例、Ⅳ期 6 例；肿瘤组织学分级：G1 级 15 例、G2 级 32例、G3 级 20 例；淋巴结转移 36 例；病理学类型：鳞癌 14 例、腺癌 53 例。对照组，男 31 例、女 29 例，年龄 37～75 岁,平均 55.3±12.0 岁。两组研究对象的年龄、性别比较,差异不具有统计学意义（P＞0.05）。入选标准：⑴NSCLC 的诊断标准参考中华医学会制定的标准[6]；⑵患者经CT、MRI 检查及纤支镜活检或术后病理学检查证实;⑶对照组为无肺部病变的志愿者；⑷本研究符合《赫尔透辛基宣言》相关医学伦理规定，对研究对象的各项资料保密。排除标准：⑴具有放化疗、免疫学治疗史；⑵类风关、强直性脊柱炎等免疫学疾病患者;⑶甲状腺功能障碍患者；⑷合并其他系统的重大疾病。

1.2 CEA、PTN 指标检测 采用一次性静脉血采集器进行肘部静脉血采集,采集5ml 静脉血后自然放置，取上清液体进行检测。采用贝克曼库尔特公司UniCel DxI 800 免疫发光仪器进行CEA、PTN 的检测，配套试剂盒购自北京九强生物公司。

1.3 miRNA-145 检测方法 采用组织研磨的方法进行组织细胞中RNA 的提取，在无酶的操作条件下加入焦炭酸二乙酯，测量RNA 浓度后，逆转录成cRNA 后进行基因扩增，采用primer 5 软件进行检测基因的合成和引物设计，采用GADPH 作为内参,miRNA-145 引物 5’CAAGGACCAACTACAACC 3’：下游 5’TGCCTCTTCTTTAATTG3’,经历 45 个循环后进行曲线溶解，每个孔设置3 个复孔，取平均值，Bio-Rad iQ5 实时荧光定量PCR 仪购自美国伯乐公司。

1.4 统计学方法 本研究收集的所有数据均在SPSS21.0 中进行统计分析,年龄、血清miRNA-145、CEA、PTN 水平采用进行统计描述,数据比较分析应用t 检验；两组间性别构成比比较采用χ2检验；P 值＜0.05 说明差异具有统计学显著性。

2 结果

2.1 NSCLC 组和对照组血清的miRNA-145、CEA、PTN 水平比较 经检验，NSCLC 患者的血清的miRNA-145、CEA、PTN 水平均高于对照组，差异具有统计学意义（P＜0.05）；见表1。

表1 NSCLC 组和对照组血清的miRNA-145、CEA、PTN 水平比较（）

组别 n NSCLC 组对照组t 值P 值67 60 miRNA-145（2-△△ct） CEA（ng/ml）1.38±0.44 0.51±0.17 14.380 0.000 16.90±7.40 1.77±0.78 15.753 0.000 PTN（pg/ml）176.48±59.71 75.03±30.17 11.870 0.000

2.2 血清 miRNA-145、CEA、PTN 水平检测诊断NSCLC 患者的价值 经ROC 曲线分析，血清miRNA-145、CEA、PTN 水平诊断 NSCLC 患者的价值见表2、图1；其中血清 miRNA-145、CEA、PTN 水平联合应用时, 诊断NSCLC 的灵敏度为96.91%、特异度为80.44%、漏诊率为3.09%、误诊率为19.5 6%、ROC 曲线下的面积 AUC 值为 0.924；见表2、图1。

图1 血清 miRNA-145、CEA、PTN 水平检测诊断NSCLC 的ROC 曲线图

3 讨论

临床上长期的肺泡上皮细胞的损伤修复过程，能够在异常突变的癌细胞蓄积的基础上,加剧局部微小肿瘤病灶的形成速度[7]。在长期吸烟、特殊工作环境或者长期精神压力较大的群体中,肺癌特别是 NSCLC 的发病率可持续上升[8]。NSCLC 多数患者临床诊断时已处于疾病的中晚期,而失去手术机会, 而通过对于NSCLC 的早期诊断，能够为NSCLC 创造手术条件，进而改善肺癌患者的临床结局。影像学检查能够在NSCLC 的诊断过程中发挥作用，但对于微小病灶或者肿瘤特征不典型的病灶，胸部CT 等影像学检查诊断的灵敏度较低。血清中肿瘤蛋白, 能够在NSCLC 的发生早期即可出现显著的波动,因此其临床血清学水平的检测能够为疾病的诊断提供参考。血清中CA125 能够在NSCLC 的诊断中发挥参考作用, 但依靠CA125 诊断NSCLC 的假阳性率较高，其诊断的漏诊率水平可超过18%以上[9]。本次研究通过对于NSCLC 患者血清中 miRNA-145 联合 CEA、PTN 的分析,能够在揭示NSCLC 发生机理的同时，为临床上NSCLC的早期诊断提供参考因子。

表2 血清miRNA-145、CEA、PTN 水平检测诊断NSCLC 患者的价值

miRNA-145 是微小RNA 家族成员，其能够在癌基因的转录调控,癌细胞上游转录启动子的激活方面发挥作用。miRNA-145 对于肿瘤细胞内肿瘤蛋白结构的修饰作用,能够影响到癌细胞核周边染色体的分裂速度, 最终促进恶性肿瘤细胞的发生[10]；CEA 是癌胚抗原家族成员, 主要表达与消化系统及妇科恶性肿瘤中, 在癌细胞异常凋亡的过程中，部分细胞骨架结构的破碎，能够显著促进癌细胞内CEA 的释放；PTN 作为多效调控因子，其能够在癌细胞的多向分化成熟的过程中发挥作用，影响到癌细胞的定向分化成熟过程[11]。多数研究者揭露了CEA 在肺癌患者中的表达情况，认为在肺癌患者血清中CEA 的表达有助于肺癌的诊断及预后评估[12,13]，但对于 miRNA-145、PTN 的分析较少。

本次研究发现, 在NSCLC 患者血清中，miRNA-145、CEA、PTN 蛋白的表达水平均明显上升，高于健康对照组群体，统计学差异显著，表明miRNA-145、CEA、PTN 的高表达均能够影响到肺癌的病情进展过程。miRNA-145 的高表达对于肺癌细胞的异常分裂的影响,主要在于其能够影响到癌细胞转录开放阅读区的翻译速度,提高肿瘤蛋白的转录和翻译速度；CEA 的表达上升主要考虑由于癌细胞的持续性增殖过程中,部分癌细胞的异常凋亡有关；PTN 的上升对于肺癌的影响，在于其能够调控癌细胞膜内侧信号转导通路,加剧癌细胞的持续DNA 复制过程。另外有研究者也发现，在肺癌患者血清中，miRNA-145 的表达水平可随着肺癌患者治疗转归的恶化而明显上升,在肺癌患者复发转移率较高或者病死率较高的群体中，miRNA-145 的表达水平可明显上升[14-16]。本次研究还重点探讨了miRNA-145、CEA、PTN 的诊断学价值，发现在肺癌患者中,采用 miRNA-145、CEA、PTN 单独诊断肺癌的灵敏度或者特异度均具有一定的局限, 虽然miRNA-145 诊断肺癌的灵敏度或者特异度较为理想,但CEA、PTN 单独诊断肺癌的灵敏度较低，不足50%，灵敏度的下降能够影响到早期不典型肺癌的检出率。而通过联合 miRNA-145、CEA、PTN 指标进行诊断,可以显著提高肺癌的整体诊断灵敏度和特异度水平，降低肺癌诊断的漏诊率和误诊率。但其联合诊断仍然存在漏诊和误诊的可能,诊断的误诊率仍然接近20%。提示临床上对于肺癌的高危人群，必要时可以通过联合影像学检查，进而提高肺癌的诊断效能。

综上所述, 在 NSCLC 患者血清中，miRNA-145、CEA、PTN 的表达明显上升，同时 miRNA-145联合CEA、PTN 诊断NSCLC 可在一定程度上弥补单项指标的不足,在保证诊断特异度的情况下提高灵敏度。