背部推拿手法对亚急性衰老并免疫功能低下家兔血清免疫细胞与免疫球蛋白的影响研究❋

王之虹，杨寄禹，刘明军，卓 越，杨寄渝，于明超，尚 坤，张 欣

(长春中医药大学，长春 130117)

宋代医学著作《圣济总录》中记载推拿按摩可以“斡旋气机，周流营卫、宣摇百关、疏通凝滞”，能够使人“耳目聪明，身体轻强，老者复壮，壮者复治”[1]。项目组据此提出“推拿手法能够改善机体免疫功能”的说法，以亚急性衰老并免疫功能低下的家兔模型为研究对象，以背部推拿手法为干预手段，通过观察家兔体质量、血清免疫细胞与免疫球蛋白的变化情况加以验证，获得满意结论。

1 材料

1.1 实验动物

纯种新西兰大耳家兔36只(长春中医药大学实验动物中心提供，动物许可证号SCXK(吉)2016-0004)，兔龄4个月，体质量(1950±210)g。采用随机数字表法将家兔分为空白组、模型组、药物组、推拿组4组。其中空白组、模型组家兔各6只，药物组、推拿组家兔各12只。所有家兔分笼饲养，饲养房间光线充足、通风良好，温度保持在18～25 ℃左右，相对湿度保持在50%～70%左右。本实验已通过长春中医药大学实验动物伦理委员会审查。

1.2 实验药品

环磷酰胺注射液(江苏恒瑞医药股份有限公司，国药准字H32020857)；免疫球蛋白M(Immunoglobulin M，IgM)、免疫球蛋白G(Immunoglobulin G，IgG)、酶联免疫试剂盒(上海酶联生物科技有限公司，货号ML027242、ML027243)；补体3(Complement 3，C3)、补体4(Complement 4，C4)酶联免疫试剂盒(上海酶联生物科技有限公司，货号ML027351、ML027854)；免疫细胞分化簇3(cluster of differentiation，CD3+)、辅助性T细胞(cluster of differentiation 4，CD4+)、细胞毒性T细胞(cluster of differentiation 8，CD8+)、自然杀伤细胞(atural killer cell，NK)酶联免疫试剂盒(美国贝克曼库尔特商贸中国有限公司，货号ML773220、ML762221、ML774302、ML778201)。

1.3 实验仪器

推拿手法测定仪(上海益联医学发展有限公司，TAP-Ⅱ型)；血细胞检测仪(i-STAT300型，美国雅培公司)；低速离心机(TL80-1型，江苏天力医疗器械有限公司)；酶标仪(SM600型，上海永创医疗器械有限公司)；体液免疫检测仪(DXI 800型，美国贝克曼公司)。

2 方法

2.1 动物模型的制备

采用环磷酰胺腹腔注射的方法造模。以60 mg/(kg.d)的标准计算每日注射量，连续开展腹腔注射4次，隔日注射1次。空白组注射等量生理盐水。造模结束后，动物出现精神状态差、饮食少、脱毛、眼屎、鼻腔分泌物增多、体质量下降等现象，表明造模成功。

2.2 动物模型的处理

空白组动物每天抓取1次，不做其他处理。模型组、推拿组、药物组动物每天抓取1次，隔日给予腹腔注射造模。造模结束第2天，推拿组动物开始推拿干预，药物组动物开始口饲药物。推拿和服药时家兔不固定以避免惊吓。

2.3 干预方法

2.3.1 背部推拿手法干预 推拿部位：实验动物背部足太阳膀胱经循行路线，肺俞穴至肾俞穴间部分[2]。

操作方法：直推法：术者一手扶持家兔，另一手拇食指分别置于家兔脊柱两侧，从头至尾的方向进行推法操作。操作时手指指腹紧贴局部皮肤，推进速度适中，手法力度经推拿手法测试仪测定约为0.5 kg，时间约3 min；按揉法：术者一手扶持家兔，另一手拇指置于脊柱一侧，指腹着力，从头至尾的方向进行按揉法操作，重点按揉肺俞穴、心俞穴、肝俞穴、脾俞穴、肾俞穴。操作时指腹紧贴局部皮肤，顺时针方向，揉动速度适中，手法力度经推拿手法测试仪测定约为0.5 kg，时间约5 min；捏脊法：助手固定家兔，术者以双手拇食指指腹部提捏家兔脊柱两侧皮毛及皮下组织，从尾至头的方向进行捏脊法操作。操作时移动速度适中，提捏力度经推拿手法测试仪测定约为0.5 kg，反复操作10次。背部推拿手法干预每天1次，每次约10 min左右，连续干预21 d。

2.3.2 药物干预 干预药物黄芪精口服液(扬子江药业集团有限公司生产，国药准字Z32021206)。干预方法：口饲剂量为30 g/kg·d，连续口饲21 d。

2.4 观察指标及方法

2.4.1 观察指标 观察不同组别实验动物干预前后体质量差值，观察不同组别实验动物血清免疫细胞CD3+、CD4+、CD8+、NK含量，观察不同组别实验动物的外周血IgM、IgG含量。

2.4.2 检测方法 分别于干预前后称取实验动物体质量。干预结束后第2天麻醉实验动物，耳缘静脉取血，一部分血液抗凝、离心，取血清以酶联免疫吸附法测定血清CD3+、CD4+、CD8+、NK含量。另一部分血液抗凝，采用免疫检测仪检测 IgM、IgG含量。

3 结果

3.1 不同组别实验动物干预前后体质量差值

表1示，推拿组和药物组家兔在干预前后的体质量差值均高于模型组，差异有统计学意义(P<0.05)。

表1 不同组别实验动物干预前后体质量差值影响比较

注：与空白组比较：▲P<0.05，▲▲P<0.01；与模型组比较：★P<0.05

3.2 不同组别实验动物血清免疫细胞含量

表2示，推拿组与药物组家兔在干预后的血清免疫细胞CD3+、CD4+、NK的含量均高于模型组，CD8+的含量均低于模型组，其中CD3+、NK、CD8+含量差异有统计学意义(P<0.05，P<0.01)。

表2 不同组别实验动物血清免疫细胞含量比较

注：与空白组比较：▲P<0.05，▲▲P<0.01；与模型组比较：★P<0.05，★★P<0.01

3.3 实验动物干预前后外周血IgM、IgG含量比较

表3示，推拿组与药物组家兔在干预后的外周血IgM、IgG含量均高于模型组，差异有统计学意义(P<0.01)。

表3 不同组别实验动物外周血IgM、IgG含量比较

注：与空白组比较：▲▲P<0.01；与模型组比较：★P<0.05，★★P<0.01

4 讨论

背部推拿手法是项目组结合临床工作经验与经典医籍发掘成果总结提炼形成，通过在机体背部足太阳膀胱经循行部位开展推法、按揉法、捏脊法等推拿手法操作，达到疏通经络、行气活血、调和营卫、固表卫外等目的，从而发挥调节机体免疫功能的作用[3]。从中医理论讲，足太阳膀胱经“主人体一身之表”，具有密肌固表的功效；其循行路线上分布的肝俞、心俞、脾俞、肺俞、肾俞等背俞穴也具有调节五脏功能、平衡机体阴阳的作用。同时，足太阳膀胱经在十二经脉中分布最长最广，是人体的“藩篱”。太阳为诸阳之首，在三阳经中阳气最盛，阳气充足，人体抵抗外邪的能力就强，换言之机体免疫功能增强[4]。

通过本研究的结果可见，背部推拿手法增加了免疫抑制家兔干预前后体质量差值，表明有效改善了其身体状态，侧面证实背部推拿手法对免疫功能的调节作用。同时，背部推拿手法能够有效增加免疫抑制家兔CD3+、CD4+、NK含量，降低CD8+含量，增加外周血IgM、IgG含量，直接证实背部推拿手法对免疫功能的调节作用。

血清免疫细胞是机体发生免疫应答的重要基础之一，其中CD3+细胞是成熟淋巴细胞，也是细胞免疫中最主要的活性细胞，是构成T细胞抗原受体的膜抗原，参与免疫信号向细胞内的传达；CD4+细胞是辅助性T细胞，主要作用是增强吞噬细胞介导的抗感染作用，调节其他T细胞免疫应答，促进B细胞分泌抗体以增强体液免疫应答[5]；CD8+细胞在特异性免疫反应中起识别和呈递抗原的重要作用，主要针对细胞毒效应，发挥细胞毒性T细胞功能；NK细胞是机体重要免疫细胞，是天然免疫和特异性体液免疫中的效应细胞，可合成和分泌多种细胞因子，发挥免疫强化和造血作用以及直接杀伤靶细胞，在调节机体免疫功能方面具有重要作用[6]。免疫球蛋白是存在于机体体液中的一类糖蛋白，由B细胞收到抗原刺激后分化生成，是介导机体体液免疫的主要效应分子。IgM是机体首次发生免疫应答时所产生的抗体，在机体免疫系统中占有重要的免疫防御地位；IgG在体液内含量很高，广泛分布，在机体再次免疫应答中发挥重要作用，是主要的抗体之一[7]。本研究药物组采用的药物黄芪具有健脾益气、升阳举陷、益卫固表等功效，自古便有“补药之长”说法[8]。本研究结果显示，背部推拿手法对免疫抑制家兔免疫细胞CD3+、CD4+、NK和免疫球蛋白IgM的提升作用，略高于口饲黄芪精口服液，体现了良好的改善免疫功能作用。同时，背部推拿手法操作简便、安全、舒适、无毒副作用，更凸显了临床推广的优势。

综合以上研究可见，背部推拿手法能够改善和调节机体免疫功能，其可能的作用机制是通过调节机体的细胞免疫和体液免疫功能来实现。本研究结论将为推拿疗法的作用机制研究开辟新的思路与方法，也为推拿疗法应用于养生保健和养老康复等大健康产业奠定实验室基础。