宫颈细胞DNA倍体分析在宫颈癌前筛查中的应用价值

闫怡　陈丽　陈建伟

[摘要] 目的 探讨宫颈细胞DNA倍体分析在宫颈癌前筛查中的应用价值。 方法 选取2017年4月～2019年6月在我院进行宫颈癌前筛查的473例已婚妇女，均行宫颈细胞学检查、HPV检测、宫颈细胞DNA倍体分析及宫颈活检组织病理检测。分析宫颈细胞DNA倍体分析在宫颈癌前筛查中的诊断价值。 结果 473例入选者中，TCT≥ASCUS者94例，HPV（+）者102例，宫颈细胞DNA倍体分析结果阳性者85例，宫颈活检组织病理检测阳性者91例。宫颈细胞DNA倍体分析的符合率、敏感度及特异性均高于宫颈细胞学检测、HPV检测（P<0.05）。宫颈细胞学检测的符合率、敏感度及特异性均高于HPV检测（P<0.05）。宫颈细胞学与HPV双阴性者宫颈细胞DNA倍体分析的符合率为99.67%，宫颈细胞学TCT≥ASCUS但HPV阴性者宫颈细胞DNA倍体分析的符合率为96.23%，差异无统计学意义（P>0.05）。对正常宫颈者和低度癌前病变者随访3个月，宫颈细胞DNA倍体分析的符合率高于宫颈细胞学检测、HPV检测（P<0.05）。宫颈细胞学检测的符合率高于HPV检测（P<0.05）。 结论 宫颈细胞DNA倍体分析在宫颈癌前筛查中与宫颈组织活检具有较高的符合率，能在现有宮颈癌筛查方式的基础上尽可能地提高准确率，减少漏诊率，且敏感度及特异性均较高。

[关键词] 宫颈细胞DNA倍体分析;宫颈癌前筛查;宫颈细胞学检查;应用价值

[中图分类号] R737.33          [文献标识码] B          [文章编号] 1673-9701（2020）11-0065-04

Application value of DNA ploidy analysis on cervical cells in cervical precancerous screening

YAN Yi1   CHEN Li1   CHEN Jianwei2

1.Department of Gynecology， Jiangjin District Central Hospital of Chongqing City， Chongqing   402260， China;2.Department of Pediatrics， Jiangjin District Central Hospital of Chongqing City， Chongqing   402260， China

[Abstract] Objective To investigate the application value of DNA ploidy analysis on cervical cells in cervical precancerous screening. Methods A total of 473 married women who were given cervical precancerous screening in our hospital from April 2017 to June 2019 were selected for cervical cytology， HPV testing， DNA ploidy analysis of cervical cells， and histopathological examination of cervical biopsy. The diagnostic value of cervical cell DNA ploidy analysis in cervical precancerous screening was analyzed. Results Among the 473 enrolled cases， 94 cases were TCT≥ASCUS， 102 cases were HPV（+）， 85 cases were positive for cervical cell DNA ploidy analysis， and 91 cases were positive for pathological examination of cervical biopsy. The coincidence rate， sensitivity， and specificity of cervical cell DNA ploidy analysis were higher than those in cervical cytology and HPV test （P<0.05）. The coincidence rate， sensitivity and specificity of cervical cytology were higher than those of HPV test（P<0.05）. The coincidence rate of cervical cytology and DNA ploidy analysis of cervical cells in HPV double negative patients was 99.67%. The coincidence rate of DNA ploidy analysis in cervical cytology with TCT≥ASCUS but HPV negative was 96.23%， and the difference was not statistically significant （P>0.05）. Patients with normal cervix and low precancerous lesions were followed up for 3 months. The coincidence rate of cervical cell DNA ploidy analysis was higher than that of cervical cytology and HPV test（P<0.05）. The coincidence rate of cervical cytology was higher than that of HPV test （P<0.05）. Conclusion The DNA ploidy analysis on cervical cells has a high coincidence rate with cervical biopsy in cervical precancerous screening， which can improve the accuracy rate and reduce the rate of missed diagnosis as much as possible based on the existing cervical cancer screening methods， and the sensitivity and specificity are high.

[Key words] DNA ploidy analysis on cervical cells; Cervical precancerous screening; Cervical cytology; Application value

宫颈癌是常见的妇科恶性肿瘤，高发年龄为50～55岁，宫颈癌前筛查能够早期发现宫颈癌和癌前病变，对于宫颈癌的二级预防意义重大[1-2]。相关指南推荐宫颈细胞学检查为首选，但受到基层医院病理质量等条件限制，存在漏诊率[3-4]。宫颈细胞学+HPV分流可减少漏诊率，但费用较高，且对于HPV（-）但存在宫颈病变者的漏诊风险增加。目前，国际上有将细胞DNA倍体分析用于宫颈癌的诊断，也用于判别宫颈癌恶性程度及宫颈疾病的发展状态，但用于宫颈癌前筛查的相关研究较少，且宫颈癌前筛查未推荐细胞DNA倍体分析作为首选。研究显示，DNA倍体异常细胞数量的变化与宫颈病变的程度有密切关系，细胞DNA倍体分析可能在节约经济的前提下，降低宫颈癌前病变的漏诊率，弥补目前筛查方式的不足[5-6]。本研究旨在进一步探讨宫颈细胞DNA倍体分析在宫颈癌前筛查中的应用价值，现报道如下。

1 对象与方法

1.1 研究对象

选取2017年4月～2019年6月在我院进行宫颈癌前筛查的473例已婚妇女作为研究对象，年龄29～60岁，平均（42.35±3.61）岁。纳入标准：①自愿行宫颈细胞学检查、HPV检测、宫颈细胞DNA倍体分析及宫颈活检组织病理检测的已婚女性;②知情同意本研究并签署知情同意书者。排除标准：①妊娠期女性;②合并精神系统类疾病者;③不愿意参加本研究者。

1.2 方法

所有患者均行宫颈细胞学检查、HPV检测、宫颈细胞DNA倍体分析及宫颈活检组织病理检测，具体方法如下。

1.2.1 宫颈细胞学检查  采用薄层液基细胞学技术（TCT）进行检查，采集标本前24 h内禁止性生活、阴道检查、阴道灌洗及用药，取标本的用具必须无菌、干燥;先将子宫颈表面分泌物拭净，将细胞刷置于子宫颈管内，达子宫颈外口上方10 mm左右，在子宫颈管内旋转数圈后取出，旋转细胞刷将附着于小刷子上的标本洗脱于保存液中，将保存液瓶放入全自动细胞制备仪通过混匀、过滤转移，然后均匀地贴附于玻片上，将玻片进行固定和染色，最后在显微镜下进行观察和诊断。以TCT≥ASCUS为阳性诊断标准。

1.2.2 HPV检测  采用PCR检测HPV-DNA，采集标本前注意事项及取样方法同TCT，然后采用HPV核酸定量检测试剂盒（美国罗氏分子诊断公司）进行检测，检测结果中出现任何一个亚型阳性即作为HPV阳性。

1.2.3 宫颈细胞DNA倍体分析  采集标本前注意事项及取样方法同TCT，将保存液以1500 r/min离心5 min，弃上清，将细胞悬液滴片、染色，经MotiSavant全自动细胞图像分析系统（麦克奥迪医疗诊断系统有限公司生产）进行宫颈细胞DNA倍体分析。其判断标准采用DNA指数（DI），DI>2.5即为阳性。

1.2.4 宫颈活检组织病理检测  所有入选者均进行阴道镜检查，并对可疑部位进行活检，病理结果以宫颈上皮内瘤变低级别病变（CIN Ⅰ）及以上为阳性标准。

1.3 观察指标

①分析宫颈细胞DNA倍体分析、宫颈细胞学、HPV检测与宫颈活检组织病理的符合率、敏感度及特异性。②观察宫颈细胞学及HPV双阴性或细胞学不能明确意义的非典型鳞状细胞（ASCUS）但HPV阴性患者中，宫颈细胞DNA倍体分析与阴道镜下宫颈组织活检的符合率。③对正常宫颈及低度癌前病变者进行随访3个月，并再次进行宫颈细胞学、HPV检测及宫颈细胞DNA倍体分析，比较宫颈细胞DNA倍体分析与宫颈细胞学、HPV检测的符合率。其中符合率=（真阳性+真阴性）例数/总例数×100%，敏感度=真阳性例数/（真阳性例数+假阴性例数）×100%，特异性=真阴性例数/（真阴性例数+假阳性例数）×100%

1.4 统计学方法

采用SPSS25.0统计学软件处理数据，计量资料以均数±标准差（x±s）表示，采用t检验;计数资料以率（%）表示，采用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 宫颈细胞学检测、HPV检测、宫颈细胞DNA倍体分析及宫颈活检组织病理检测结果分析

473例入选者中，TCT≥ASCUS者94例，HPV（+）者102例，宫颈细胞DNA倍體分析结果阳性者85例，宫颈活检组织病理检测阳性者91例。见表1。

2.2宫颈细胞学检测、HPV检测、宫颈细胞DNA倍体分析与宫颈活检组织病理符合率、敏感度及特异性的比较

宫颈细胞DNA倍体分析的符合率、敏感度及特异性均高于宫颈细胞学检测、HPV检测，差异有统计学意义（P<0.05）。宫颈细胞学检测的符合率、敏感度及特异性均高于HPV检测，差异有统计学意义（P<0.05）。见表2。

2.3 宫颈细胞学与HPV双阴性及宫颈细胞学TCT≥ASCUS但HPV阴性患者宫颈细胞DNA倍体分析和阴道镜下宫颈组织活检符合率的比较

473例入选者中，宫颈细胞学与HPV双阴性者308例，TCT≥ASCUS但HPV阴性者53例。宫颈细胞学与HPV双阴性者宫颈细胞DNA倍体分析的符合率为99.67%（307/308），宫颈细胞学TCT≥ASCUS但HPV阴性者宫颈细胞DNA倍体分析的符合率为96.23%（51/53），两者比较差异无统计学意义（P>0.05）。见表3。

2.4 正常宫颈及低度癌前病变患者3个月后宫颈细胞DNA倍体分析及与宫颈细胞学、HPV检测符合率的比较

473例入选者中，对382例正常宫颈者及91例低度癌前病变者进行为期3个月的随访，宫颈细胞学检测的符合率为94.93%（449/473），HPV检测的符合率为80.97%（383/473），宫颈细胞DNA倍体分析的符合率为98.94%（468/473）。宫颈细胞DNA倍体分析的符合率高于宫颈细胞学检测、HPV检测，差异有统计学意义（P<0.05）。宫颈细胞学检测的符合率高于HPV检测，差异有统计学意义（P<0.05）。见表4。

3 讨论

宫颈癌是最常见的女性恶性肿瘤，占发展中国家女性恶性肿瘤的第一位，我国每年新增宫颈癌病例约13.5万，占全球发病数量的1/3，近年来其发病有年轻化的趋势[7-8]。宫颈癌是目前唯一确定病因的癌症——高危HPV的持续感染，慢性感染、性传播疾病、吸烟等为协同因素[9-10]。宫颈癌早期癌变局限于皮肤或黏膜内，还未通过皮肤或黏膜下面的基底膜侵犯到周围组织，如果发现早、治疗及时，则可治愈[11-12]。宫颈癌早期无明显症状和体征，常因子宫颈外观正常易漏诊或误诊，因此，早期进行宫颈癌前筛查非常重要。

宫颈癌前筛查的根本目的是降低宫颈癌的发病率和死亡率，最佳的筛选方案应该是能够鉴别出可能发展为浸润癌的宫颈癌前体，避免过度治疗[13]。目前，临床中常用的筛查方法包括宫颈细胞学检测、HPV检测及宫颈组织活检，宫颈细胞学检测是宫颈癌前筛查的常用方法，但是假阴性较高[14];HPV检测的敏感度较高，但是特异性较低[15];宫颈组织活检为宫颈癌及癌前病变确诊的依据，但是其为有创性检查手段[16]。宫颈细胞DNA倍体分析是在TCT的基础上进行改进的检测方法，其采用Schiffy试剂对DNA进行特异性染色，通过DNA图像分析仪进行观察分析[17]。研究显示，宫颈细胞DNA倍体分析在宫颈癌前筛查中具有一定的价值[18]。

本研究结果显示，宫颈细胞DNA倍体分析的符合率、敏感度及特异性均高于宫颈细胞学检测、HPV检测，差异有统计学意义（P<0.05），提示宫颈细胞DNA倍体分析在宫颈癌前筛查中与宫颈组织活检具有较高的符合率，且敏感度及特异性均较高;宫颈细胞学与HPV雙阴性者宫颈细胞DNA倍体分析的符合率为99.67%（307/308），宫颈细胞学TCT≥ASCUS但HPV阴性者宫颈细胞DNA倍体分析的符合率为96.23%（51/53），两者比较差异无统计学意义（P>0.05），提示宫颈细胞DNA倍体分析可以作为宫颈组织活检的参考指标;随访3个月，宫颈细胞DNA倍体分析的符合率高于宫颈细胞学检测、HPV检测，差异有统计学意义（P<0.05），提示宫颈细胞DNA倍体分析可以作为筛查宫颈癌前病变发展的一个有价值的指标。

综上所述，宫颈细胞DNA倍体分析在宫颈癌前筛查中与宫颈组织活检具有较高的符合率，能在现有宫颈癌筛查方式（宫颈细胞学检查或HPV检测）的基础上尽可能地提高准确率，减少漏诊率，且敏感度及特异性均较高，值得临床推广应用。

[参考文献]

[1] 谢幸，孔北华，段涛. 妇产科学[M]. 第9版.北京：人民卫生出版社，2018：298-303.

[2] 胡芬娜，底姣阳，张三元. p16蛋白在宫颈癌前病变及宫颈癌筛查中的研究进展[J]. 中华妇幼临床医学杂志（电子版），2017，13（1）：112-115.

[3] 孙宇虹，朱正英. 液基细胞学检查和高危性人类乳头状瘤病毒DNA检测对宫颈病变的诊断价值[J]. 安徽医药，2017，21（1）：109-112.

[4] 范莹莹，张健，徐冰. Aptima HPV联合宫颈液基细胞学筛查宫颈癌前病变的临床研究[J].陕西医学杂志，2017，46（2）：162-164.

[5] 唐绪明，田玉生，邹颜阳，等. 宫颈细胞DNA倍体分析在临床上的应用[J]. 深圳中西医结合杂志，2015，25（19）：90-91.

[6] 杨永国，丁岚. DNA倍体分析与常规细胞学诊断对宫颈上皮内瘤变的诊断价值[J]. 影像研究与医学应用，2017，1（17）：165-166.

[7] 朱月峰，王国平，张亚丽，等. 早期宫颈癌腹腔镜手术治疗进展及反思[J]. 长治医学院学报，2019，33（2）：155-160.

[8] 吕金梅. 人乳头瘤病毒16/18 阳性阴道镜可疑宫颈病变的病理分析[J]. 中国药物与临床，2019，19（12）：2058-2060.

[9] 徐晓琪，王志莲. 宫颈人乳头瘤状病毒感染危险因素的研究进展[J]. 中华临床医师杂志（电子版），2019，13（4）：308-311.

[10] 张蔚苓，赵珊琼. 高危型人乳头瘤病毒感染的相关危险因素分析[J]. 中国现代医生，2018，56（19）：57-60.

[11] 郭海莲. 宫颈环形电切术治疗宫颈上皮内瘤变合并高危型HPV感染的临床疗效观察[J]. 当代医学，2016，22（35）：63-64.

[12] 戴永刚，张乃馨，穆家康. HPV亚型与子宫颈癌前病变及癌变的关系研究[J]. 中国肿瘤临床与康复，2018，25（6）：657-659.

[13] 王叶颖. 章丘市农村妇女乳腺癌和子宫颈癌筛查结果分析与防治对策研究[D]. 济南：山东大学，2013.

[14] 井佳雨，牟婧祎，王轶英，等.宫颈癌及癌前病变筛查方法研究进展[J]. 中华实用诊断与治疗杂志，2017，31（2）：203-205.

[15] 何小英，唐发清，田卫华. 细胞 DNA 定量分析技术在宫颈癌及癌前病变早期筛查中的应用价值[J]. 现代医院，2015，15（5）：88-90.

[16] 任建民. TCT联合HR-HPV检测在宫颈癌及癌前病变筛查中的临床意义[J]. 医学理论与实践，2019，32（15）：2339-2342.

[17] 刘敏丽，沈娟，张生军. DNA倍体分析联合宫颈液基细胞学检查在宫颈癌筛查中的应用[J]. 延安大学学报（医学科学版），2018，16（3）：13-16.

[18] 龙彩，张磊. 宫颈DNA倍体分析及TCT在宫颈病变早期筛查中的临床意义[J]. 实用妇科内分泌杂志（电子版），2017，4（24）：90，92.

（收稿日期：2019-12-27）