高效液相色谱法测定食用油中黄曲霉毒素的讨论

刘振涛

摘 要：食用油中的黄曲霉毒素（AFT）是由寄生曲霉菌和黄曲霉菌代谢产生的一组具有强毒性的真菌毒素及其衍生代谢物，其中以B1、B2、G1、G2、M1与M2最为常见。而要控制食品中的黄曲霉毒素含量，就要有科学的检验标准和正确的方法对其进行检测和分析，确保含有黄曲霉毒素的食用油不流入市场，保证食品质量安全和人们群众的生命安全。

关键词：高效液相色谱法测定;岛津液相色谱仪;食用油

黄曲霉毒素中含有很多剧毒物质，这些剧毒物质的过量摄入会导致人类在短时间内中毒，甚至会因来不及医治而死亡。1993年，黄曲霉毒素被世界卫生组织（WHO）癌症研究机构划定为一类天然存在的致癌物，属毒性极强的剧毒物质，如果长期过量摄入，会让人类患肝癌的概率大大提高。而黄曲霉毒素的化学结构又比较稳定，一般不易改变，同时又具有一定的耐热性，只有把食品加热到230 ℃以上时才能破坏其中的黄曲霉毒素，所以一般的食物处理很难把它们清除。如果不慎服用了黄曲霉毒素，人体的免疫系统受到破坏，会对身体造成不可挽回的损害，危害人类生命安全，我国为了保护人民的健康安全，对可能含有黄曲霉毒素的食品进行了严格的含量限定及检测方法。

黄曲霉毒素的检测方法主要包括：同位素稀释液相色谱-串联质谱法、高效液相色谱-柱前衍生法、高效液相色谱-柱后衍生法、为酶联免疫吸附筛查法、为薄层色谱法与放射免疫法等。在过去的黄曲霉毒素分析方法中，薄层色谱法是使用最广泛的分析方法，也是使用最早的技术，但是由于要求较多，操作步骤繁琐，加上提取和净化的效果不够理想，在萃取液中依然存有许多杂质，所以现在很少使用这种方法。同位素稀释液相色谱-串联质谱法因为设备价格较高，还不能在基层检验检测机构普遍采用，而酶联免疫吸附筛查法因准确度不高而仅限于常规的定性快速筛查检测，高效液相色谱法虽然没有同位素稀释液相色谱-串联质谱法准确度高，但因操作便捷、分辨率高、分析时间较短、可同时检测多个AF种类以及适于大批量样品的分析等优点，是目前基层检验检测机构采用较多的一种检验检测方法[1]。本文将围绕高效液相色谱法检测食用油中黄霉曲毒素的相关问题进行讨论分析。

1 检测黄曲霉毒素的必要性

影响食物油品质的重要因素之一就是黄霉曲毒素是否超标。国家对食用油中黄霉曲毒素含量的要求也十分严格，尽管如此，在食用油中抽检中，依然发现很多样品中黄霉曲毒素的含量处于偏高和超标状态，所以需进一步加强对食用油中黄霉曲毒素含量的检测，然后针对食用油生产和流通过程采取有效的管、控、防措施，有效降低食用油中黄霉曲毒素的含量，提高食用油的质量，保障人民群众的食品安全。

2 高效液相色谱法特点

蒙山县食品安全检验检测中心主要采用高效液相色谱-柱后衍生法来检验食用油中的黄曲霉毒素含量。以下将对高效液相色谱法的特色进行简单的描述。

（1）高压：仪器中配置了高压泵，在装载液中加入高压，这样可以让流动相快速通过色谱柱，提高了分析速度。

（2）高效：分离的效率较高，还可以选择固定相和流动相，以达到最佳分离效果，比其他方法的效能高很多倍。

（3）高灵敏度：检测器检测限度可以达到纳克级别。

（4）应用范围广：70%以上的有机化合物可用高效液相色谱分析，特别是高沸点、大分子、强极性与热稳定性差化合物的分离，具有明显优势。

（5）柱子耐用：柱子可多次使用，并且用一根色谱柱可分离多种不同的化合物。

（6）样品量少、容易回收：样品经过色谱柱后不被破坏，可以收集单一组分。

高效液相色谱是近年使用率很高的黄曲霉毒素检验检测仪器，它应用广泛，覆盖了大部分食品的定量和定性分析。它的组成类似于气相色谱但又有所区别，高效液相色谱的流动相是液体，而液体的流动相粘度比气体的粘度要高得多，所以为了降低柱压，高效液相色谱的色谱柱一般比气相色谱的色谱柱厚，也短了很多。而其中加入的高压泵能保证仪器有恒定稳固的输液量。在高效液相色谱柱工作的时候，待检测的液体物质进入进样器中，并在压力的推动下通过色谱柱。因为物质种类不同，与固定相之间的吸附作用不同，这些不同的物质会按不同的保留时间逐一离开色谱柱，然后通过检测器，检测器获得不同的峰值信号，并形成电信号，最后通过对电信号强弱的判断和分析，从而得到食用油中黄曲霉毒素的含量[2]。

3 岛津液相色谱仪及其使用方法

岛津液相色谱仪LC-2030C3D是目前检测食用油中黄曲霉素毒的主要仪器。

3.1 仪器组成

由DGU-20As脱气机、LC-2030 Pump低压梯度泵、LC-2030Autosampler自动进样器、LC-2030Oven柱温箱、LC-2030PDA Detector检测器、RF--20A荧光检测器、LC-2030 Controller系统控制器与Labsolutions工作站等组成。

3.2 操作步骤

启动前，根据样品的方法的特性制备流动相、标准品和样品前处理。流动相通过超声过滤和脱气15 min，标准品和样品通过0.22 μm的滤膜。

打开主机、检测器和计算机电源开关，待高压泵、柱温箱、自动取样器、检测器和系统控制器自检完成后，双击Labsolutions图标，启动工作站软件。

选择新建方法文件，并在编辑方法（仪器参数）依次选定数据采集时间、冲洗脱气时间、泵浓度和流速、检测器类型及波长、色谱柱温度与进样量等各种参数并下载保存参数到仪器[3]。

方法参数保存后，开始执行自动排气，共10 min，在排气完成后，开始执行色谱柱平衡化，观察基线是否达到实验要求。

根据样品数量选择“单次处理分析”还是“批处理分析，，并设定样品编号、样品瓶架、样品名，最后设定文件名称并保存，完成后即可开始仪器分析。

3.3 数据处理

以上操作完成后，得到样品分析的原始数据，然后对样品进行数据处理（再分析），主要的处理方法有两种，一种是单针进样分析，另一种是批量分析。具体使用的处理方法需要与实际情况相结合，以得出更准确、更科学的结果。

3.4 形成报告

数据處理完毕，经复核无误后，保存到电脑，并形成实验报告。

4 结语

高效液相色谱-柱后衍生法可以同时分离多种黄曲霉毒素，操作相对简单便捷，进样架较多，适合同时开展大批量样品的分析，但这个方法的样品预处理程序相对复杂，所用到的试剂较多，也需要一定的检测时间，数据处理也需要较强的专业技术，对技术人员的专业水平要求很高。据调查发现，目前县一级的食品检验检测机构基本是近年来新成立的基层检测机构，存在技术人员偏少、技术比较薄弱、业务范围较窄与财政预算投入较少的状况，大规模普遍开展高效液相色谱法检测还有一定困难。只有积极引进培养优秀技术人员，提高专业检测水平，拓展业务范围，增加财政投入，加大业务培训和实验操作，才能进一步提高基层检验机构使用高效液相色谱法的频率和检验准确率，为保障食用油的品质和安全作贡献。

参考文献

[1]刘岚.粮油食品中黄曲霉毒素检测方法[J].农产品加工·综合刊，2010（4）：66-67.

[2]王峰莹.高效液相色谱法测定花生中的黄曲霉毒素[J].现代仪器，2002（3）：22-23，16.

[3]宫春波，姜连芳，张永翠，等.黄曲霉毒素在食品中的危害及去除方法[J].食品研究与开发，2004，25（1）：120-123.