屎肠球菌8296对断奶仔猪生长性能、营养物质表观消化率和血清生化指标的影响

李英英 陈曦 宋铁英

摘要：[目的]研究饲粮中添加屎肠球菌8296对断奶仔猪生长性能、营养物质表观消化率和血清生化指标的影响，为断奶仔猪应激能力提升提供依据。[方法]选取60头21日龄外三元（杜长大）断奶仔猪，随机分为3组（每组5个重复，每重复4头）：对照组饲喂基础饲粮，2个屎肠球菌组（EFl组和EF2组）分别饲喂添加0.1%和0.3%屎肠球菌8296的基础饲粮，试验周期30d.测定并比较3组仔猪的生长性能、营养物质表观消化率和血清生化指标。[结果]①与对照组相比，EFl组仔猪的平均日增重（ADG）显著提高（P<0.05），料重比（F/G）显著降低（P<0.05）;EF2组ADG和平均日采食量（ADFI）分别极显著（P<0.01）和显著（P<0.05）提高，F/G极显著降低（P<0.01）。②EF2组仔猪的粗脂肪（EE）和钙（Ca）的表观消化率显著高于对照组（P<0.05），磷（P）的表观消化率极显著高于对照组（P<0.01）。③与对照组相比，EFl组仔猪血清中谷草转氨酶（AST）活性极显著降低（P<0.01），免疫球蛋白M（IgM）含量显著升高（P<0.05）;EF2组球蛋白（GLO）、磷（P）、免疫球蛋白G（IgG）的含量显著降低（P<0.05），AST活性极显著降低（P<0.01），甘油三酯（/G）和IgM的含量显著上升（户<0.05），免疫球蛋白A（IgA）含量极显著上升（P<0.01）。[结论]在饲粮中添加屎肠球菌8296可改善断奶仔猪生长性能、提高仔猪对营养物质的消化吸收能力，增强免疫力;添加剂量为0.3%时效果更显著。

关键词：屎肠球菌，断奶仔猪，生长性能，营养物质表观消化率，血清生化指标

中图分类号：S816文献标志码：A 文章编号：1008-0384（2020）03-0266-07

0 引言

（研究意义）仔猪断奶时由于饲粮、环境等因素的改变，常会引起采食量下降、生长缓慢和腹泻等症状，严重的甚至死亡，造成较大的经济损失。屎肠球菌属于养殖动物中允许添加的菌种（《饲料添加剂品种目录2013》——中华人民共和国农业部公告第2045号），具有改善肠道环境、促进消化吸收、降低料肉比、提高免疫力等作用;另一方面，作为内源性微生物，屎肠球菌具有无污染、无副作用等优点。因此，在断奶仔猪饲粮中添加屎肠球菌改善应激成为当前的研究热点。（前人研究进展）目前屎肠球菌的研究存在菌种多样、应用效果不一致等问题，筛选易培养、抗逆性好、应用效果好的菌株，可以为屎肠球菌在畜禽养殖中的推广应用提供参考资料。前期研究中课题组自主分离到1株抗逆性较好的猪源屎肠球菌（屎肠球菌8296），通过包被和喷雾干燥工艺，制备成微胶囊制剂，使其对高温、胃酸和消化酶等条件具有较好的耐受性;并已证实其具有改善断奶仔猪肠道菌群结构、改善断奶仔猪生长性能的作用。（本研究切入点）但屎肠球菌8296对断奶仔猪消化力和免疫功能的影响尚待研究。（拟解决的关键问题）本试验通过在断奶仔猪饲粮中添加屎肠球菌8296，探讨该菌株对断奶仔猪的生长性能、营养物质表观消化率和血清生化指标的影响，为屎肠球菌8296在断奶仔猪中的应用研究提供参考资料。

1 材料与方法

1.1 试验菌株

屎肠球菌8296：由福建省农业科学院生物技术研究所自主分离得到的1株抗逆性较好的猪源屎肠球菌，通过喷雾干燥工艺制成微胶囊制剂，活菌数：3×10¹⁰CFU·g^-1。

1.2 试验动物及饲喂管理办法

试验仔猪由福建省闽清县后洋猪场提供，选取60头21日龄外三元（杜长大）断奶仔猪，随机分为3组，每组5个重复，每重复4头。参考前期预试验结果，对照组饲喂基础饲粮，两个屎肠球菌组（EFl组和EF2组）分别饲喂添加0.1%和0.3%的屎肠球菌8296微胶囊制剂的基础饲粮。基础饲粮为福建省金华龙饲料有限公司提供的断奶仔猪教槽料（100A），其组成及营养水平见表1.试验期间采取自由采食、自由饮水，日常管理和免疫按常规程序进行，试验周期为30d，第30d的20：00停止喂食。

1.3 指标测定

1.3.1生长性能指标 在试验第1d及第31d清晨对仔猪空腹称重，试验期间，每天7：00～8：00、11：00～12：00、17：00～18：00观察仔猪排粪情况，记录腹泻头数。试验期间记录仔猪死淘情况及每天的用料量，计算初始体重（IBW）、终末体重（FBW）、平均日增重（ADG）、平均日采食量（ADFI）、料重比（F/G）、腹泻率及死淘率。

1.3.2营养物质表观消化率 在试验结束前3d每天8：00～10：00、15：00～17：00收集新鲜粪样，加入10%盐酸固氮后置于烘箱中65℃烘干，烘干的样品粉碎混匀后装入密封袋内4℃保存，用于营养物质分析。饲料样品的采集采用四分法，粉碎后同样装入密封袋内4℃保存备用。

粗蛋白（CP）含量测定标准参照GB/T643-1994，使用仪器为上海纤检凯氏定氮仪KD-N2;粗脂肪（EE）含量测定标准参照GB/T 6433-006，使用仪器为意大利VELP公司SERl48脂肪测定仪;钙（Ca）含量测定采用火焰原子吸收分光光度法，使用仪器为北分瑞利原子吸收分光光度计WTX-l 10B;磷（P）含量测定标准参照GB/T64372002，采用钒钼黄比色法;营养物质表观消化率测定采用盐酸不溶灰分（AIA）内源指示剂法（盐酸不溶灰分测定标准参照GB/T 23742-2009）。营养物质表观消化率计算公式为：

Dd/%=100-（Id/If）×（Af/Ad）×100（1）

式中：Dd为营养物质表观消化率，%;Id为试验饲粮中盐酸不溶灰分的含量，%;If為粪中盐酸不溶灰分的含量，%;Af为粪中营养物质含量，%;Ad为试验饲粮中营养物质含量，%。

1.3.3血清生化指标 在试验第31d清晨空腹前腔静脉采血，每个重复内随机选择1头仔猪，采血3mL于真空促凝管中，静置30min后，4℃，3000r·min^-1离心30min，取上层血清用于检测血清生化指标，包括总蛋白TP（g·L^-1）、白蛋白ALB（g·L^-1）、血糖GLU（mmol·L^-1）、甘油三酯TG（mmol·L^-1）、谷草转氨酶AST（IU·L^-1）、尿素氮UN（mmol·L^-1）、磷P（mmol·L^-1）和免疫球蛋白（IgG、IgM、IgA）（mg·L^-1）。血清生化检测使用美国爱德士VETTEST 8008生化仪，免疫球蛋白检测使用江苏科晶生物有限公司的猪免疫球蛋白G（IgG）ELISA检测试剂盒、猪免疫球蛋白M（IgM）ELISA检测试剂盒、猪免疫球蛋白A（IgA）ELISA检测试剂盒。

1.4 数据分析

采用SPSS 16.0for Windows对所得数据进行单因子方差分析，Duncan法进行多重比较，当P<0.05时差异显著，P<0.01时差异极显著。数据用“平均值±标准差”表示。

2 结果与分析

2.1 屎肠球菌8296对断奶仔猪生长性能的影响

断奶仔猪的生长性能测定结果见表2.与对照组相比，EFl组仔猪的ADG显著提高（P<0.05），F/G显著降低（P<0.05）;EF2组ADG极显著提高（P<0.01），ADFI显著增加（P<0.05），F/G极显著降低（P<0.01）。但2个屎肠球菌组的腹泻率与对照组相比未见降低，试验期间3组仔猪均未有死亡或者淘汰。

2.2 屎肠球菌8296对断奶仔猪营养物质表观消化率的影响

表3为断奶仔猪营养物质表观消化率的结果，可以看出，EFl组仔猪的CP、EE、Ca、P的表观消化率与对照组差异均不显著（P>0.05），但EF2组仔猪的EE和Ca的表观消化率均显著高于对照组（P<0.05），P的表观消化率极显著高于对照组（P<0.01）。

2.3 屎肠球菌8296对断奶仔猪血清生化指标的影响

表4为断奶仔猪血清生化检测的结果，2个屎肠球菌组及对照组仔猪血清中TP、ALB、UN的含量均在正常范围内，GLO、AST和P的含量均偏高，GLU含量均偏低;对照组和EFl组的TG含量也低于正常值，仅有EF2组在正常范围内。差异性分析结果显示：与对照组相比，EFl组仔猪血清中AST活性极显著降低（P<0.01），IgM含量显著升高（P<0.05）;EF2组GLO、IgG的含量显著降低（P<0.05），TG、P和IgM的含量显著上升（P<0.05），AST活性极显著降低（P<0.01），IgA含量极显著上升（P<0.01）;EFl组中TP、ALB、GLO、GLU、TG、UN、P、IgG、IgA和EF2组中TP、ALB、GLU、UN与对照组相比差异不显著（P>0.05）。

3 讨论与结论

3.1 屎肠球菌8296对断奶仔猪生长性能和营养物质表观消化率的影响

仔猪断奶是养猪生产中的关键阶段，由于食物、环境、群体等方面的应激，仔猪采食量会下降、营养缺乏，进而造成肠黏膜损伤、消化功能障碍，同时对病原体的抵抗力变弱，易引发疾病，最终导致生产性能降低。屎肠球菌是一种常用的益生菌制剂，饲喂后可抑制动物肠道内致病菌的生长，改善肠道菌群结构，增强仔猪小肠上皮细胞的完整性和代谢活性，促进肠道绒毛发育和营养物质的吸收，提高其生长性能。课题组前期研究发现在断奶仔猪的饲粮中添加屎肠球菌8296后，肠道内的菌群结构发生了明显变化，主要表现在厚壁菌门的丰度明显增加，拟杆菌门的丰度明显下降。厚壁菌门的变化主要在乳杆菌属和梭菌目，前者的增加表明机体营养吸收和免疫能力提高，而后者包含很多产丁酸的菌种，与小肠上皮的修复相关。因此，厚壁菌门的丰度增加常被认为有利于动物的增重和健康;而拟杆菌门内普氏菌属在肠道内的丰度较高，且其内所含菌种大多与感染和炎症有关，故拟杆菌门在肠道内丰度降低可能代表机体感染病原的风险降低，健康状况得到改善。

本试验的结果显示：饲粮中添加0.1%和0.3%屎肠球菌8296，断奶仔猪的采食量均有提高，料重比均有所下降，生长性能得到改善;但0.3%组仔猪的生长性能改善效果更明显。同时，0.3%组仔猪对于饲粮中EE、Ca和P的表观消化率也有明显提高。该结果与以往认为的屎肠球菌可有效改善动物生长性能、提高其对饲粮中营养成分的消化率的观点基本一致，推测屎肠球菌进入动物肠道后，可能通过影响肠道菌群结构和肠绒毛结构进而影响机体的消化吸收能力，改善生长性能，但具体机理仍需进一步研究。本试验中，屎肠球菌8296降低腹泻率及死淘率的作用未见体现，可能是受到季节和饲养水平的影响，对照组和2个处理组的腹泻率均处于较低的水平，且3组仔猪均没有死亡或者淘汰，所以未见明显区别。

3.2 屎肠球菌8296对断奶仔猪血清生化指标的影响

血液是机体内环境重要的组成部分，参与机体的新陈代谢，血液成分的变化可反映机体代谢的情况。血清中TP反应机体对蛋白质的代谢情况，由ALB和GLO组成，ALB反应机体对蛋白的代谢吸收能力;GLO则与机体的免疫应答密切相关。动物摄人饲粮后，三大营养物质糖类、脂质和蛋白质需分解成小分子物质后才能进入血液循环，被机体吸收利用，血清中GLU、TG和ALB分别反映机体对糖、脂肪和蛋白质的代谢吸收水平，因此，临床上常通过这3个指标判断机体的营养状况。当肝脏受损时，血清中AST活性会升高，因此常将其在血液中的含量作为判断肝脏功能的标准。血中的UN和P主要由肾脏排出体外，其含量与肾功能密切相关，临床上将它们作为肾脏健康状况的指标。本试验中，2个屎肠球菌组及对照组仔猪血清中GLO含量均偏高，但随着屎肠球菌添加量提高，仔猪血清中GLO水平呈负相关，其中0.3%屎肠球菌组的GLO含量已接近正常值，可能是由于仔猪在断奶期间，由于环境和食物的变化引起应激反应，导致GLO升高，加人屎肠球菌8296后，降低了仔猪的免疫应激反应，其体内GLO含量趋于正常，免疫状况优于对照组。同时，仔猪饲粮中添加屎肠球菌8296后其血清中AST活性和P含量也随着添加剂量提高而降低，且0.3%屎肠球菌组仔猪的AST活性和P含量也接近正常值，与GLO的改变趋势一致，可能显示屎肠球菌组仔猪肾脏健康状况优于对照组。血清生化指标中，代表仔猪营养状况的ALB、GLU和TG在对照组和0.1%屎肠球菌组间并没有明显区别，但0.3%屎肠球菌组仔猪血清中的含量均高于对照组;特别是TG含量，对照组和0.1%屎肠球菌组均偏低，仅0.3%屎肠球菌组在正常范围内，说明饲粮中添加0.3%屎肠球菌8296后仔猪糖、脂肪和蛋白质的代谢吸收水平均有升高。以上结果说明饲粮中添加屎肠球菌8296可改善断奶仔猪的营养状况以及肝脏、肾脏等免疫器官的健康状况，增强机体抵抗力。这与屎肠球菌可增强机体免疫力、降低早期断奶对仔猪造成的应激损伤的结论基本一致。

IgG、IgM和IgA均为免疫球蛋白，由B淋巴细胞产生，介导机体的体液免疫。机体启动体液免疫时，最先产生的免疫球蛋白是IgM，其杀菌、溶菌、溶血、调理及凝集等作用均高于IgG，但在机体产生大量IgG后会逐渐消失;IgG是哺乳动物最主要的免疫球蛋白，占血清中免疫球蛋白总量的75%～80%，参与体内多种免疫反应，具有抗菌、抗病毒和抗毒素等作用;而IgA主要与机体的黏膜免疫相关，参与黏膜局部的抗菌、抗病毒反应。前人研究中，关于益生菌对仔猪免疫球蛋白含量的影响并不一致。文静等用屎肠球菌饲喂断奶仔猪后发现，试验组仔猪血清中IgA和IgG含量均显著提高，IgM含量未见明显变化;而王永等用屎肠球菌饲喂断奶仔猪时发现，试验组仔猪的IgG和IgM含量显著高于对照组，IgA含量却未见明显变化。Zhang等在研究乳酸菌对感染大肠杆菌的模型仔猪的影响时，发现饲喂乳酸菌的仔猪空肠、回肠相关淋巴组织内的分泌型IgA含量显著高于对照组。本试验结果显示，饲喂屎肠球菌8296后仔猪血清中IgG含量未见提升，但IgM和IgA的含量均显著高于对照组，并且随着屎肠球菌8296添加量提高而增加，推测可能是由于屎肠球菌8296通过口服饲喂进入肠道，促进了仔猪的肠道黏膜免疫和体液免疫反应，进而增强其免疫力。

仔猪血清生化检测结果的差异性分析结果显示，0.1%屎肠球菌组与对照组仅有AST活性差异显著;而0.3%屎肠球菌组与对照组血清中GLO、TG、P、IgG和IgM含量差異显著，两组间AST活性和IgA含量差异极显著，说明屎肠球菌8296在饲粮中添加量为0.3%时，对断奶仔猪血清生化指标的影响较大。