高效液相色谱法测定丁细牙痛胶囊中丁香酚和细辛脂素含量

2020-06-17陈骁勇

中国药业 2020年11期

陈骁勇

（江苏省盐城市第一人民医院，江苏盐城 224000）

丁细牙痛胶囊由丁香叶和细辛组方，具有清热解毒、疏风止痛的功效，对慢性牙髓炎具有较好疗效[1]。现行质量标准采用供试品在酸性条件下与亚硝钠-钼酸钠反应，以原儿茶酸为对照，采用紫外分光光度法测定其中丁香叶的含量[2]，而对细辛及丁香叶中丁香酚无测定方法。丁香叶中所含丁香酚具有广谱抗菌消炎作用[3]，细辛所含细辛脂素具有祛风止痛功效，可用于治疗牙痛[4]。参考文献[5-9]，采用高效液相色谱(HPLC)法同时测定丁香叶和细辛中的丁香酚和细辛脂素的含量，能更好地控制丁细牙痛胶囊的质量。现报道如下。

1 仪器与试药

1.1仪器

岛津LC-20A型高效液相色谱仪（岛津企业管理＜中国＞有限公司）；XP26型电子天平（瑞士Mettler Toledo公司，精度为百万分之一）；KQ-500型超声波清洗器（昆山禾创超声仪器有限公司，功率为500 W，频率为40 kHz）；Merck Milli-Q Advantage A10 型纯水机（德国Merck Millipore公司）。

1.2 试药

丁细牙痛胶囊（深圳市泰康制药有限公司，批号分别为 20170903，20180312，180316，20180502，180907，规格为每粒0.45 g）；丁香酚对照品（批号为110725-201213，含量为 99.7% ），细辛脂素对照品（批号为111889-201504，含量为 100.0%），均购自中国食品药品检定研究院；乙腈为色谱纯，水为纯水仪自制去离子水，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Capcell Pak MG ⅡC18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈（A）-水（B），按表 1 进行梯度洗脱；进样量：10 μL；柱温：35 ℃；流速：1 mL／min；检测波长：287 nm。

2.2 溶液制备

分别取丁香酚对照品10.70 mg、细辛脂素对照品19.25mg，精密称定，置100 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备溶液。精密量取2 mL，置10 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。取样品（批号为20170903）20粒，混合均匀，取2 g，精密称定，加甲醇50 mL，称定质量，超声处理（功率为 500 W，频率 40 kHz）30 min，放冷，用甲醇补足减失的质量，摇匀，用0.45 μm滤膜滤过，取续滤液，作为供试品溶液。根据产品处方的用量比例，分别配制阴性对照品溶液、缺细辛阴性对照品溶液、缺丁香叶阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

专属性试验：分别取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照品溶液，缺细辛阴性对照品溶液、缺丁香叶阴性对照品溶液，按拟订色谱条件测定。结果主成分峰分离度良好，与杂质能得到很好分离，原辅料均无干扰。色谱图见图1。

线性关系考察：精密吸取上述对照品贮备液0.5，1.0，2.0，4.0，6.0 mL，置 10 mL 容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。分别精密吸取5 μL注入色谱仪，记录色谱图，以质量浓度为横坐标（X）、峰面积为纵坐标（Y）绘制标准曲线，得丁香酚的回归方程 Y丁＝5.4×104X丁+19 656（r＝0.999 9），细辛脂素的回归方程 Y细＝5.8×104X细+54 205（r＝0.999 9）。结果表明，丁香酚和细辛脂素质量浓度分别在 5.334 ～ 64.008 μg／mL 和9.625～115.500μg／mL范围内与其峰面积线性关系良好。

精密度试验：取样品（批号为20170903）适量，依法制备供试品溶液，每次10 μL，重复进样6次，记录色谱图。结果峰面积的 RSD丁香酚为 0.97%（n＝6），细辛脂素为0.76%（n＝6），表明仪器精密度良好。

稳定性试验：取样品（批号为20170903）适量，依法制备供试品溶液 10 μL，分别于 0，2，4，8，12，24 h时进样测定峰面积。结果丁香酚、细辛脂素的 RSD分别为 1.57%和 1.31%（n＝6），表明供试品溶液在 24 h内稳定。

重复性试验：取同一批样品（批号为20170903），按2.2项下方法平行制备供试品溶液6份，按拟订色谱条件测定。结果丁香酚平均含量为 1.19 mg／g、RSD为1.87% （n ＝6），细辛脂素平均含量为 2.22 mg／g、RSD为1.61%（n＝6），表明方法重复性良好。