血液分析仪XT-4000i 在检测浆膜腔积液中的研究与应用

李俊虹，李映廷，陈 飞

（1） 云南省第一人民医院检验科；2） 普外一科；3） 肾内科，云南昆明 650032）

体腔液细胞学的常规检查对各种积液性质的初步判断能够提供非常重要的依据，对鉴别炎症和非炎症性积液、恶性和良性积液是一个基础性的检查项目，对临床各种疾病的早期诊断、鉴别诊断及疗效观察具有重要的临床意义[1-2]。目前体腔液细胞学的检查采用传统的手工镜检法，检测结果的重复性和准确性差，漏检率和误检率高[3]。近年来，体腔液细胞学的自动化检测已广泛应用于实验室[4]。仪器种类繁多，但目前没有统一的规范化标准，仪器法是否可以代替手工镜检法、仪器的性能验证、标准化操作、质量控制、复检规则、报告的发放和解析等都是需要研究的重点[7-8]。临床迫切需要实验室检验医师发放一份精确的、具有参考价值的体腔液细胞学检验报告。本研究的目的是以传统手工法为参考方法，验证仪器法是否可代替体腔液细胞学的检查，结合显微镜观察，对细胞性质做出正确的判读。研究高荧光参数值的高低与异常细胞、肿瘤细胞检出的相关性。

1 对象与方法

1.1 研究对象

收集2013 年5 月至2016 年12 月就诊于云南省第一人民医院门诊以及住院患者体液标本198例，所有标本经EDTA-K2 抗凝，年龄2～80 岁，男性122例，女性76例，其中胸水110例，腹水51例，关节液1 份，心包积液4 份，滑膜腔积液1份，腹膜透析液2 份，脑脊液29 份，回访临床病理最终确诊为恶性积液的标本数87例，良性积液55例，结核积液36例，肝硬化腹水20例。每份标本确保2 mL，收到标本后立即检测，不能及时检测的标本放低温（2～4℃） 保存。

1.2 研究方法

1.2.1 试剂与仪器 莱卡相差显微镜、低速台式离心机、SysmexXT-4000i 全自动血球分析仪、改良牛鲍氏计数板、20 μL 的微量吸管、血球分析仪器特定试剂、瑞氏染液、3%的冰醋酸。

1.2.2 全自动血球分析仪XT-4000i 仪器检测 将收集经到的体腔液标本于1 h 内严格按照仪器标准化操作规程，选用XT-4000i 的体液模式下进行上机检测，获得体液有核细胞总数（TC-BF），白细胞总数（WBC-BF）、红细胞（RBC-BF） 分叶核细胞（PMN（#%））、单个核细胞（MN（#%））、嗜酸性粒细胞（EO-（#%））、高荧光参数（HF-BF（#%）） 值。PMN（#%） 主要指中性粒细胞、MN（#%） 主要包括淋巴细胞和单核细胞，HF-BF（#%） 主要包括组织细胞和肿瘤细胞等异常的大细胞。

1.2.3 手工计数法 由取得技师资格证的三位操作人员采用双盲法（以减少由于人为因素造成的误差） 平行进行，严格遵照《全国临床检验操作规程》，在显微镜下分析标本有核细胞的总数。

1.2.4 显微镜检查 把标本沉淀后吸出上面的液体丢弃，保留少量的液体，把管底的液体轻轻混匀，制成涂片，规格约为2.5×1.0 cm（长×宽），待手工制片自然干燥后，固定标本，用血球瑞氏染液按染血片的方法进行染色（瑞氏染液和缓冲液1:1 的比例染色），待染色的制片自然干燥后，用莱卡相差显微镜在低倍镜下整片观察涂片，观察有核细胞的分布情况（特别是头、体、尾部重点观察），如制片上有核细胞有无结构形态的异常、充分估计数量的多少，对发现形态巨大的、成团的、染色质结构疏松的、形态异常的有核细胞用油镜辨认。分类有核细胞中单个核细胞、多个核细胞、间皮细胞、异常细胞所占的百分比。

2 结果

2.1 仪器性能验证

根据体腔液标本有核细胞的浓度，把198 份标本分为四组：A 组，30×106/L（n=56），B 组，31～200×106/L（n=45），C 组，201～1 000×106/L（n=62），D 组，1001×106/L（n=35）。有核细胞计数分析显示（表1、2），A 组仪器法CV%（11.32） 大于手工法CV%（5.63），说明仪器法精密度不如手工法的好，相关系数r 为0.537，表明仪器法和手工法计数有核细胞中度相关。而B 组、C 组、D 组的CV% （6.52、2.68、8.26），表明仪器法精密度好。特别是B 组、C 组变异系数值小，具有很好的精密度。B、C、D 组相关系数分别为0.962、0.984、0.942，表明B、C、D 组都具有很高的相关性。结果显示:有核细胞计数浓度在31～200×106/L、201～1000×106/L、1001×106/L 时，其仪器检测法性能良好，结果较为精准。在有核细胞计数浓度≤30×106/L，仪器法计数误差大，不能代替手工法。

在有核细胞分类中，表3 显示，A 组和D 组手工法和仪器法的检测结果差异有统计学意义（A组F＜0.01，D 组F＜0.02），表明在低高浓度的标本中，仪器法的体液有核细胞分类结果与手工法不一致。B 组和C 组仪器法和手工法的检测结果差异无统计学意义（B 组F＞0.06，C 组F＞0.08），表明在中浓度的标本中，全自动血球分析仪XT-4000i 有核细胞分类结果与手工法较一致。

2.2 高荧光参数检测的意义

本研究根据HF-BF（#%） 值，将标本分为四组，分别为：HF-BF≤3%组56例，3%＜HF-BF≤10% 组39例、10% ＜HF-BF ≤20% 组73例、HF-BF＞20%组34例[38]。据本研究表4 显示，10%＜HF-BF≤20%组所占的比例为45.34%，其中主要为增生、变形、异常的间皮细胞（58例，36.02%）；其次为HF-BF ≤3% 组 （56例，34.77%），其中主要为多核细胞和单个核细胞（38例23.6%）；3%＜HF-BF≤10%组的标本为39例和HF-BF＞20%组的标本为34例，其中主要为增生、变形、异常的间皮细胞，分别为（26例16.15%）、（19例11.80%），肿瘤细胞主要分布在10%＜HF-BF≤20%组、HF-BF＞20%组中，分别为（11例，6.83%）、（9例，5.59%）。

2.3 散点图与高荧光参数的相关性

全自动血球分析仪XT-4000i 仪器DIFF 通道检测获得的散点图和相差显微镜镜检结果从HF-BF ≤3% 组、3% ＜HF-BF ≤10% 组、10%＜HF-BF≤20%组、HF-BF≧20%组中选取一例标本，根据散点图及镜检结果对从HF-BF＞20%组中选取的5例标本进行诊断和分析。见图1～5。

标本1 类型：胸水。有核细胞总数明显增高，分类PMN 占94.3%，PMN 荧光区有大量的细胞；镜下可见大量中性粒细胞，此外可见破碎的细胞。病理结果未见肿瘤细胞。出院诊断：肺部感染伴胸水。

标本2 类型：胸水。有核细胞值增高，分类PMN 占72.9%，HF-BF%值为58.8%，镜下可见组织细胞和增生、变性的间皮细胞。病理结果：未见肿瘤细胞。出院诊断：肺部感染伴胸水。

标本3 类型：胸水。有核细胞值明显增高，MN%较高，HF-BF%值为6.9%，镜下以淋巴细胞为主。病理结果：未见肿瘤细胞。出院诊断：肺结核胸水，胸膜炎。

标本4 种类：腹水。白细胞值较高，分类单个核细胞82.5%，高荧光参数值为15.3%，镜下可见较多的肿瘤细胞。病理诊断：腺癌。临床诊断：结肠癌转移。

标本5 种类：胸水。白细胞总数升高，分类中单个核细胞比例74.6%，高荧光参数比值为13.4%，显微镜下见到较多的组织细胞、间皮细胞、肿瘤细胞。病理诊断：腺癌。

表1 XT-4000i 与镜下有核细胞计数结果比较Tab.1 XT-4000i was compared with the count results of nucleated cells under the microscope

表2 XT-4000i 与显微镜下有核细胞计数结果相关性比较Tab.2 Correlation between XT-4000i and nuclear cell count under microscope

表3 XT-4000i 与显微镜下有核细胞分类结果的比较（）Tab.3 Comparison of XT-4000i and the classification results of nucleated cells under the microscope（）

表3 XT-4000i 与显微镜下有核细胞分类结果的比较（）Tab.3 Comparison of XT-4000i and the classification results of nucleated cells under the microscope（）

表4 四组标本镜检结果与高荧光参数(HF-BF%)的比较［n（%）］Tab.4 Comparison of microscopic examination results and high fluorescence parameters (HF-BF%) in four groups ［n（%）］

图1 HF-BF≤3%标本的仪器结果及显微镜结果（×100）Fig.1 Instrument results and microscope ×100 results of HF-BF≤3% specimens

图2 HF-BF≥20%标本的仪器结果及显微镜结果（×100）Fig.2 Instrument results and microscope ×100 results of HF-BF≥20% specimens

图3 3%＜HF-BF≤10%标本的仪器结果及显微镜结果（×100）Fig.3 Instrument results and microscope ×100 results of 3%＜HF-BF≤10% specimens

图4 10%＜HF-BF≤20%标本的仪器结果及显微镜结果（×100）Fig.4 Instrument results and microscope ×100 results of 10%＜HF-BF≤20% specimens

图5 HF-BF＞20%标本的仪器及显微镜结果（×100）Fig.5 Instrument results and microscope ×100 results of HF-BF＞20% specimens

3 讨论

本研究以手工法为参考方法，对全自动血球分析仪XT-4000i 体液模式检测体腔液标本分不同的浓度进行比对，表明自动化体液细胞检测不能完全代替手工法，在体腔液细胞中、高浓度时，仪器法检测结果精准，快速，可以解决手工法的费时费力，人为误差等因素[5]。但在低浓度时，仪器法检测结果精确度差，与手工法相关性不高，检测结果误差较大，特别是脑脊液标本，细胞浓度较低时，仪器检测结果是错误的，仪器法不能代替手工法。有核细胞的形态分析应根据细胞散点图的分布并结合显微镜下观察[3，4，7]。高荧光参数值越高，检出异常细胞及肿瘤细胞的可能性越大，但有极少数高荧光参数值很高的体液标本，显微镜下检出的是变异的间皮细胞。所以高荧光参数值的高低与异常细胞的相关性还有待于进一步研究[6，10]。

仪器法检测已广泛应用于实验室[8]，但目前没有制定出一个规范的检测要求，自动化体液细胞学检测规范化应包括以下几点： （1） 标本的要求：根据来源的不同，体液标本分为浆膜腔积液（胸腔、腹腔） 关节腔积液、心包积液、滑膜腔积液、肺泡灌溪液等。标本量通常为3～6ML，不低于2 ML，标本采集后立即送检，在室温下保存时间不超过1 h，在4℃情况下保存不超过6 h，如此可以避免细胞破损、退化和死亡，以保障检验结果的准确性，体液标本抗凝选用抗凝剂以EDTA-K2 为最佳，拒收有凝块标本；（2） 仪器性能的验证：任何体液细胞自动化分析的仪器都应该以手工法作为参考方法进行比对，对仪器的性能进行验证，只有通过性能验证的仪器才能作为检测仪器；（3） 质量控制：包括检测前标本的采集要求、检测中检验人员的规范化操作、仪器的规范化操作、检测后结果的分析和报告的发放；（4） 复检规则的制定：当有形态不规整细胞的标本应该进行显微镜复核，当XT-4000i 报警提示有核细胞检测异常时应手工镜下复核，当高荧光参数（HF） 散点图报警出现异常时应该进行显微镜复核；（5） 报告的解读和分析：结合临床诊断、病理学诊断报告、肿瘤标记物检测报告、生化检验报告综合分析检测结果，为临床提供有价值的检验报告。