基于感官审评与HPLC-DAD法的不同月份藤茶质量研究

黄建华，谢思敏，彭清华，李正治，张远芳，王俊杰

(湘南学院 药学院，湖南 郴州 423000)

藤茶，属葡萄科植物显齿蛇葡萄(Ampelopsisgrossedentata)，又名白茶、龙须茶、甜茶、霉茶等，主要分布于我国湖南、福建、贵州、湖北、广西等长江以南地区[1]。藤茶在湖南张家界当地俗称土家神茶，青安莓茶，神仙草等，普通茶隔夜不能喝，易变馊，而藤茶沏泡一星期仍可饮用[2]。现代研究表明藤茶具有清热解毒、抗菌消炎、祛风除湿、降血脂、降血糖、保肝护肝等功效[3]。藤茶中主要活性成分是以二氢杨梅素为代表的黄酮类物质，二氢杨梅素具有显著的抗炎、镇痛、抑菌、抗肿瘤、抗氧化等活性[4-7]，其在藤茶中的含量经高效液相色谱检测可高达25.5%[8]，且4～6月份藤茶中二氢杨梅素的含量高于其他月份[9-11]。鉴于藤茶巨大的应用价值和市场潜力，目前关于藤茶的研究很多，但其质量研究基本都集中在二氢杨梅素及总黄酮的含量测定上，且检测方法多，没有统一标准，结果差异性较大[12-19]。此外藤茶作为一款茶饮品，其感官如何尚未见到相关文献报道。

本研究在已有的藤茶研究基础上，首次采用感官审评的方法，并运用高效液相色谱-二极管阵列检测器法(HPLC-DAD)建立稳定高效的藤茶中二氢杨梅素含量测定方法，同时结合感官品质和主要活性成分含量综合评价藤茶质量，为藤茶资源更加合理的利用与开发提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 仪器

高效液相色谱仪，包括自动进样器和DAD检测器(LC-20AT型，日本岛津公司)；色谱柱InertSustain©C18 (4.6 mm×250 mm，5 μm，日本岛津公司)；超声波清洗机(KQ-500DE型，昆山市超声仪器有限公司)；电子天平(AUW120D型，日本岛津公司)；电热鼓风干燥箱(DHG-9140A型，上海一恒科学仪器有限公司)。

1.2 材料与试剂

4、5、6月份的野生藤茶均于2017年采自湖南省郴州宜章地区，经湘南学院王俊杰教授鉴定均为葡萄科蛇葡萄属显齿蛇葡萄(A.grossedentata)的叶和茎，样本保存于湘南学院药学院湖南省心脑血管天然药物研究重点实验室。

二氢杨梅素标准品(纯度 ≥ 98%，上海源叶生物科技有限公司)；色谱甲醇，Fisher Chemical(赛默飞世尔科技有限公司)；磷酸(国产分析纯，天津科密欧公司)；娃哈哈纯净水(市购)。

1.3 试验方法

1.3.1 感官审评

1.3.1.1 感官审评方法 本试验参照GB/T23776-2018《茶叶感官审评办法》[20]并进行了适当修改，对4、5、6月份的藤茶茶样进行审评：3 g茶样，100 mL水，沸水冲泡5 min制备茶汤，进行感官审评。分别从外形(20分)、汤色(10分)、香气(30分)、滋味(30分)、叶底(10分)4个因子，由7名评茶员对3种茶样进行感官审评后，各因子取平均值，再按加权平均法算出总分值，得分越高，反映藤茶的品质越好。

1.3.1.2 感官审评因子 藤茶审评中：外形以干茶宽粗，不硬不软，色泽均匀，明亮，夹杂物少，完整为优质；汤色以色泽均匀，浑浊少，亮绿或浅绿色，清澈明亮为优质；香气以保有茶类原有香味，香味浓醇，持久为优质；滋味以茶味鲜浓纯正，回味甘甜为优质；叶底以叶底嫩，色泽均匀，黄绿色，明亮匀整为优质。

1.3.1.3 计算公式 感官总得分 = 外形得分×20%+汤色得分×10%+香气得分×30%+滋味得分×30%+叶底得分×10%。

1.3.2 含量测定

1.3.2.1 色谱条件及系统适应性试验 色谱柱为岛津InertSustain®C18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流动相为甲醇(A)∶0.05%磷酸水(B)=45∶55，等度洗脱30 min；检测波长290 nm，柱温30℃，流速0.8 mL/min，进样10 μL。在该色谱条件下，二氢杨梅素的理论塔板数不低于3500，分离度大于1.5。对照品溶液和供试品溶液色谱图见图1～2。

图1 二氢杨梅素对照品HPLC图谱Fig. 1 HPLC chromatogram of dihydromyricetin

图2 藤茶原料HPLC图谱Fig. 2 HPLC chromatogram of material sample

1.3.2.2 对照品溶液制备 精确量取二氢杨梅素标准品3.71 mg，于20 mL容量瓶，配成0.186 mg/mL的标准液作为母液。再精密量取母液分别稀释成二氢杨梅素浓度为0.030917，0.023186，0.01855，0.011593，0.005796 mg/mL的标准品溶液，分别经0.45 μm微孔膜过滤后作为供试品溶液，待测。

1.3.2.3 供试样品液制备 将4、5、6月份采摘的藤茶干燥样品分别粉碎后过80目筛，各取1.0 g，于20 mL容量瓶中，加入甲醇超声30 min，甲醇定容，配成浓度为50 mg/mL样品溶液，再各取1 mL稀释成1.0 mg/mL的样品溶液，分别经0.45 μm微孔膜过滤后作为供试品溶液，待测。

1.3.2.4 线性关系考察 取二氢杨梅素标准品浓度为0.030917，0.023186，0.01855，0.011593，0.005796 mg/mL的标准品溶液，在上述色谱条件下精确量取10 μL平行进样两次，以样品浓度(X)对出峰面积平均值(Y)进行线性回归得到回归方程：Y=195959X-29397(R2=0.9994)，线性范围为5.796～30.917 μg/mL。

1.3.2.5 精密度试验 精密量取浓度为0.030917 mg/mL二氢杨梅素标准品，在上述色谱条件下连续进样6次，每次10 μL，根据二氢杨梅素的峰面积数值，计算RSD值为0.77%，表明仪器精密度良好。

1.3.2.6 稳定性试验 精密吸取4月份样品的供试品溶液，分别于制备后的0、2、4、8、12、16、24 h进样10 μL测定，根据二氢杨梅素的峰面积数值，计算RSD值为1.49%，表明供试品溶液在24 h内稳定。

1.3.2.7 重复性试验 取4月份样品适量，精密称定，按“1.3.2.3”项中方法平行制备供试品溶液6份，分别进样10 μL，测定峰面积，计算二氢杨梅素的质量分数RSD值为1.24%，表明该方法重复性较好。

1.3.2.8 加样回收率试验 取4月份样品粉末(过80目筛)6份，各0.2 g，精密加入5.0 mg二氢杨梅素对照品，按“1.3.2.3”项中方法制备供试品溶液，分别进样10 μL，测定峰面积，计算二氢杨梅素的加样回收率和RSD值。测得二氢杨梅素的平均加样回收率为98.97%，RSD值为1.91%，表明该方法的准确度良好。

1.3.2.9 样品测定 取4、5、6月份藤茶样品各20 g，粉碎过80目筛，精密称取各样品约1.0 g，每个样品平行称2份，按“1.3.2.3”项中方法制备供试品溶液，并按“1.3.2.1”项中色谱条件进行二氢杨梅素的含量分析，测定峰面积，取平均值代入回归方程计算样品中的二氢杨梅素的质量分数。

2 结果

2.1 感官审评结果

不同月份藤茶的感官审评结果如下表1。

从表1中可知，4～6月份的藤茶感官品质均较好，且随着月份递增品质呈增加趋势，其中香气、滋味和叶底均逐渐增加。而外形和汤色不明显，可能是由于人工采摘和加工过程进行控制的结果。

2.2 含量测定结果

在“1.3.2.1”色谱条件下，不同月份藤茶样品中的二氢杨梅素的含量测定结果如下表2。

从表2中可知，4～6月份的藤茶中二氢杨梅素含量均比较高，其中4月份的含量最高，达34.06%，然后逐月递减，6月份的含量仍有28.19%。

表2 藤茶样品中二氢杨梅素含量测定结果

3 讨论

已有研究表明不同产地和不同采摘时间对藤茶中二氢杨梅素含量均有较大影响[10-11,15]，而围绕藤茶本身作为一种茶饮品的感官研究鲜见报道。本试验首次发现湖南省郴州市宜章地区4～6月份的藤茶中二氢杨梅素的含量较高，且呈逐月递减趋势，其中4月份的含量可高达34%以上，明显优于文献报道的25.5%[8]，且本研究建立的HPLC-DAD检测方法操作简便，结果可靠。感官研究发现，4～6月份的藤茶品质整体较好，且呈逐月递增趋势，其中6月份的藤茶感官品质最好，这些结果提示藤茶的质量受月份影响明显，且感官品质和二氢杨梅素的含量存在差异性变化。故为了更加合理有效地开发和利用藤茶资源，不能简单以二氢杨梅素含量水平作为单一评价指标，需结合感官品质以及原料产地、外观性状、采收时间等多种因素进行综合评价。例如4月份的藤茶二氢杨梅素含量最高，更适合用于二氢杨梅素的提取，而6月份的藤茶口感最佳，更适合用于藤茶饮品的制作。在后续研究中，还需进一步对更多的藤茶资源及其品质进行考察，分析探究藤茶中的呈味成分与活性成分的关系，以期建立并完善藤茶质量的综合评价体系。