不同剂型养阴清肺丸微生物污染程度探讨

王静，张秀花，任仲丽，闫世生，盛春雷

(菏泽市食品药品检验检测研究院，山东 菏泽)

0 引言

养阴清肺丸由地黄、麦冬、玄参、川贝母、白芍、牡丹皮、薄荷、甘草八种中药组成。主要作用为补益剂，具有养阴润燥，清肺利咽之功效，主治阴虚肺燥，咽喉干痛，干咳少痰或痰中带血[2]。本品属纯中药制剂，副作用小，价格便宜，市场需求量大，越来越受到病患的关注。作者在2019 年风险监测样品检验过程中，通过全国四家药品生产企业提供的微生物限度检查方法适用性试验资料发现，四家企业的方法适用性试验均存在差异；在此基础上，本实验室参照其提供方法适用性试验对30 批次样品进行了检验，并对其检验结果进行统计，分析微生物污染程度。

1 试验材料

1.1 样品

1.1.1 北京同仁堂股份有限公司同仁堂制药厂

大蜜丸14 批次：批号分别为18010482 两批次、18010204、18010480、18010483、18010364、18010367、18010494、18010135、18010360、18010476、17016020、18010487、18010162。

水蜜丸11 批次：批号分别为17035535 三批次、17035131两 批 次、17035536 两 批 次、17035537、17035290、17035132、17035288。

1.1.2 山西华康药业股份有限公司

水蜜丸3 批次，批号分别为20190202、20181202、20181201。

1.1.3 呼伦贝尔松鹿制药有限公司

大蜜丸1 批次，批号为181213。

1.1.4 颈复康药业集团赤峰丹龙药业有限公司

大蜜丸1 批次，批号为1705052。

1.2 培养基与稀释液

胰酪大豆胨琼脂培养基(批号：190518)、沙氏葡萄糖琼脂培养基(批号：190625)、胰酪大豆胨液体培养基(批号：190712)、PH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液(批号：190520)麦康凯琼脂培养基(批号：170925)、麦康凯液体培养基(批号：171205)肠道菌增菌液(批号：180222)、紫红胆盐葡萄糖琼脂培养基(批号：180627)木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基(批号：170804)等均由北京陆桥技术股份有限公司生产。

1.3 仪器

电子天平(HZT-A600，福州华志科学仪器有限公司)、高压蒸汽灭菌器(MLS-3781L-PC，三洋工业株式会社)、生物安全柜(Class ⅡBSC，新加坡ESCD 公司)、细菌浊度分析仪(WGZ-2XJ，上海盺瑞仪器仪表有限公司)、电热恒温培养箱(DHP-420，北京市永光明医疗仪器厂)、生化培养箱(SPX-150B，上海博泰实验设备有限公司)。

2 方法

2.1 供试液制备

取供试品10g，加pH7.0 无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100mL，匀 浆，制 成1：10 供 试 液；取 上 述 供 试 液1mL 加 至9mLpH7.0 无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液中，制成1：100 的供试液，依法制成1：1000 的供试液。

2.2 需氧菌计数、霉菌及酵母菌计数

2.2.1 常规法

取1：10 供试液，依相应微生物计数法操作。

2.2.2 增加稀释液法

取1：10 供试液2mL，加pH7.0 无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至10mL，制成1：50 供试液，依相应微生物计数法操作。

2.3 控制菌检查

2.3.1 耐胆盐革兰阴性菌

2.3.1.1 常规法

分别取2.1 中1：10、1：100、1：1000 供试液各1mL 加入10mL肠道菌增菌液体培养基中，依相应控制菌检查方法检查。

2.3.1.2 增加培养基体积法

分别取2.1 中1：10、1：100、1：1000 供试液各1mL 加入50mL肠道菌增菌液体培养基中，依相应控制菌检查方法检查。

2.3.2 大肠埃希菌

常规法 取2.1 中1：10 供试液10mL，接种至100mL 胰酪大豆胨液体培养基中，依相应控制菌检查方法检查。

2.3.3 沙门菌

2.3.3.1 常规法

取供试品10g，接种至100mL 胰酪大豆胨液体培养基中，匀浆，依相应控制菌检查方法检查。

2.3.3.2 增加培养基体积法

取供试品10g，接种至200mL 胰酪大豆胨液体培养基中，匀浆，依相应控制菌检查方法检查。

2.4 四家生产企业提供微生物限度检查方法适用性试验及结果。

2.5 30 批次样品微生物限度检验结果。

3 讨论

3.1 微生物限度检查法

系检查非规定灭菌制剂及其原料、辅料受微生物污染程度的方法[3]，其检验项目包括微生物计数及控制菌检查。从表1、表2可看出，因原料产地、批次、辅料及生产工艺存在一定差异，不同企业的方法适用性试验不同，不能固定沿用同一种微生物限度检查法，而应该通过方法适用性试验确定其可行性及可靠性[4]。

表1 四家生产企业提供的微生物限度检查方法适用性试验

表2 四家生产企业提供需氧菌、霉菌和酵母菌回收比值

表3 30 批次样品微生物计数检验结果统计

表4 30 批次样品致病菌检验结果统计

3.2 从表3 可以看出，大蜜丸需氧菌总数检出率为37.5%，霉菌和酵母菌总数检出率为31.2%；水蜜丸需氧菌总数检出率为21.4%，霉菌和酵母菌总数检出率为14.3%；从表4 可以看出，耐胆盐革兰阴性菌均小于10cfu/g，大肠埃希菌和沙门菌均未检出。由此可以看出，同一品种大蜜丸较水蜜丸微生物污染程度高。

3.3 综合分析

3.3.1 样品中微生物生长所需营养成分

针对我院30 批次检验报告分析：大蜜丸平均水分11.9%，水蜜丸平均水分7.3%，大蜜丸比水蜜丸水分高4.6%；标准制法中大蜜丸加炼蜜量为70～90g，水蜜丸加入炼蜜量为20～40g[5]，大蜜丸炼蜜加入量是水蜜丸的2.5～3.5 倍，炼蜜中最主要的成分是糖类；水分和糖类是微生物生长中不可缺少的营养成分[6]，因此大蜜丸比水蜜丸更容易滋生微生物。

3.3.2 中药材质量

中药材中凡含糖类、粘液质、淀粉、蛋白质及油类药材易发霉[7]，而样品制备过程中所用麦冬、甘草、薄荷均属于此类中药材，为引起霉菌过高的重要因素，因此生产企业在选用此类中药材时要严格把控质量，确保药品安全可靠。