温胃贴膏对顺铂所致恶心呕吐家鸽c-kitmRNA 表达的影响

孙素灵，胡高武，王鸣，胡华军

(上海中医药大学附属上海市中西医结合医院普外科，上海)

0 引言

化疗致恶心呕吐(chemotherapy-induced nausea and vomiting，CINV)是患者化疗过程中常见的化疗药物副反应之一，不仅影响患者的化疗进程和全身营养状况，而且大幅度降低了肿瘤患者的生活质量。现代医学领域，目前临床主要通过5-羟色胺受体拮抗剂联合地塞米松抑制呕吐，其对急性呕吐有明显的疗效，但仍有约30%的急性呕吐和50%的延迟性呕吐尚未得到有效的控制[1]。肿瘤患者的生活质量降低和生理心理负担加重，甚至使患者拒绝进一步治疗。温胃贴膏治疗化疗恶心呕吐在临床中已取得显著疗效，为探讨该方法治疗CINV 的可能作用机制。该实验采用家鸽腹腔注射顺铂法诱发恶心呕吐模型，观察家鸽呕吐频率、并利用RT-PCR 法检测家鸽小肠下段组织c-kitmRNA 相对表达量，探索温胃贴膏治疗CINV 的可能作用机制，为中医药外治法治疗CINV提供科学客观的实验依据。

1 分组

取清洁健康成年家鸽50 只，体重约为400±50g，分笼饲养，雌雄各半，饲养期间自由摄食饲料和清水。保持饲养环境清洁通风。采用随机数字表法随机分为5 组，分别为模型组、阳性格拉司琼对照组，高剂量组，中剂量组，低剂量组(温胃膏贴敷高、中、低剂量组分别为人临床剂量的12 倍，6 倍，3 倍)。

2 造模

常规喂养一周。家鸽腹腔注射顺铂4mg/kg，连续观察3 天，每天给药后，自由摄食和饮水，观察家鸽呕吐情况，每天观察5h，记录注射顺铂后家鸽初次呕吐的时间及5h 内的呕吐次数。呕吐观察标准以家鸽两翼稍抬，头部向前，上下伸脖，吐食或不吐食，继后抬头，恢复平静，记为一次。出现呕吐，标志造模成功。

3 方法

(1)模型组，腹腔注射与其应注射盐酸格拉斯琼注射液相等量的生理盐水(d1-4，第一天到第四天，每天同一时间相同剂量的注射)，腹腔注射顺铂4mg/kg(d2，第二天开始)，连续观察3 天(d2-4，第二天到第四天)，每天5h。

(2)阳性对照组，腹腔注射盐酸格拉斯琼注射液0.24mg/kg(成人格拉司琼40ug/kg，家鸽用药量是成人的6 倍，药液按1：10 稀释后注射(d1-4，第一天到第四天，每天同一时间相同剂量的注射)，注射盐酸格拉斯琼1 后腹腔注射顺铂4mg/kg(d2)，第二天开始，连续观察3 天(d2-4，第二天到第四天)，每天5h。

(3)温胃膏贴敷组，每只家鸽腹腔注射盐酸格拉斯琼注射液0.24mg/kg，分大、中、小三种剂量组，0.6g/kg 0.3g/kg 0.15g/kg (成人3g/60kg，家鸽用药量为成人的6 倍)外敷1cm2(d1-4 第一天开始到第四天)，(因家鸽无肚脐选择家鸽胸脯后三分之一的无毛区贴药，此处皮薄易吸收，不易被家鸽啄到，且解剖结构上与肚脐相似)[2]。注：模型的建立和用药剂量参照肿瘤药物用药指南及动物实验操作标准。

4 检测家鸽小肠中c-kitmRNA 相对表达量

留取家鸽小肠，放入冻存管保存于-80 ℃ 冰箱[3]。采用RTPCR 法检测家鸽小肠下段组织c-kitmRNA 相对表达量引物由生工合成，c-kit 上游引物5-GCCAACCAAGACAGACAAGAGG-3，下游引物 5-AAATCATCCAGGTCCAGAGCC-3(22bp)。取食管下段组织(约100mg)，用Trizol 提取总RNA，行常规反转录聚合酶链反应(PT-PCR)。反应结束后核对扩增曲线和熔解曲线，以GAPDH 为内参，通过2-DDet 法计算小肠下段组织c-kit 的相对表达量[4]。

5 结果

表1 各组家鸽呕吐次数

表2 各组c-kitmRNA 相对表达量比较

6 讨论

化疗药物大多毒性强，攻击癌细胞的同时，耗伤正气，脏腑输泄功能失司，气机升降失于调畅，导致清气不升，浊气不降，水液不运，停留胃肠，久之内生痰湿，进一步阻遏气机，本虚邪盛，导致恶心呕吐。温胃贴膏采用吴茱萸，半夏，肉桂，陈皮，附子制成，诸药配伍，散降有序，气机畅则呕吐止，共奏燥湿化痰，理气止呕之功。温胃贴膏，通过促使局部穴位皮肤发疱，产生温热的刺激，疏通经脉，联络脏腑表里，扶正祛邪[5]。本次试验穴位采用神阙穴，因其的解剖位置在脐中，脐部的生理解剖特点是表皮菲薄、皮下脂肪组织少及周围毛细血管丰富，这些特点均有利于药物透皮吸收。选择家鸽胸脯后三分之一的无毛区贴药，此处皮薄易吸收，不易被家鸽啄到，且解剖结构上与肚脐相似。家鸽实验中观察到格拉斯琼+大剂量组、格拉斯琼+中剂量组和阳性对照组呕吐次数均低于模型组，且格拉斯琼+温胃贴膏大剂量组呕吐次数低于阳性对照组，因此，造模成功的家鸽在使用格拉斯琼的基础上，加用大剂量温胃贴膏可有效减少家鸽呕吐次数。

c-kit 是一种原癌基因[6]，编码III 型酪氨酸激酶受体，通过与干细胞因子(SCF)结合使信号途径激活，在ICC 生长发育及细胞表型具有重要的调节作用[7]。有研究表明，敲除大鼠小肠c-kit 基因后，胃肠运动功能紊乱，c-kit 是ICC 特异性的标志蛋白[8]。ICC在控制胃肠道运动中起着重要的作用，是胃肠漫波活动的起搏器和传道者[9]。化疗所致恶心呕吐与胃肠功能紊乱有着密不可分的关系，化疗药物可能使家鸽小肠中c-kit 基因表达量减少，进而影响ICC 含量，导致胃肠功能紊乱。因此本实验主要通过检测温胃贴膏对c-kit mRNA 的表达量的影响，推测温胃贴膏对顺铂所致恶心呕吐家鸽可能的作用机制。实验结果显示，温胃贴膏通过促进c-kitmRNA 的表达，使ICC 含量恢复正常，进而减轻由顺铂引起的恶心呕吐。

本研究通过建立家鸽恶心呕吐模型，格拉斯琼+大剂量组、格拉斯琼+中剂量组和阳性对照组家鸽呕吐次数均低于模型组；格拉斯琼+大剂量组家鸽呕吐次数均低于阳性对照组；格拉斯琼+大剂量组、格拉斯琼+中剂量组和阳性对照组c-kit mRNA 的表达均高于模型组。说明温胃贴膏可有效防治顺铂所致家鸽的恶心呕吐，其作用机制可能是通过增加肠道c-kit 基因表达的数量，从而使肠道ICC 数目增加，趋于正常水平。肠道蠕动加快，肠道气机调畅，温胃贴膏的药物对穴位持续缓慢的刺激进而起到止吐的作用。