Ki-67在乳腺癌中的表达差异及其临床意义

陆奉科，王 健*

（广西医科大学，广西 南宁 530021）

乳腺癌目前已经成为首要威胁女性健康的恶性肿瘤，近年来乳腺癌的检测诊断技术和治疗方案愈加受到重视。该肿瘤在女性患者中死亡率较高，且发病年龄越来越呈现出年轻化趋势[1]。免疫组化技术能较好促进病理诊断水平，研究对象Ki67是一种增殖细胞核抗原，是与细胞周期相关的蛋白质，其功能与有丝分裂有关，是多种恶性肿瘤疾病重要生物标志之一[2]，有研究表明，通过检测Ki67抗原，能够了解恶性肿瘤的细胞增殖活性，对疾病诊断治疗及预后评价，均有较重要的参考价值。

1 材料与方法

1.1 一般资料

收集2018年6月～2019年6月间就诊于柳州某三家医院的患者共164例，均为女性，患者年龄（26-78岁）。对筛选样本进行分组，分组如下，是否浸润：非浸润性癌31例，乳腺浸润性癌133例；组织学分型：乳腺浸润性导管癌Ⅰ级36例，乳腺浸润性导管癌Ⅱ级～Ⅲ级88例；是否转移：有转移的38例；无转移的126例。根据Ki67表达高低分为低表达组（Ki67＜14%）及高表达组（Ki67≥14%），其中低表达组38例，高表达组126例。

1.2 方法

所有操作步骤均严格遵守SOP文件，石蜡切片脱蜡、水化，自来水洗并浸泡于水中待用；取适量已稀释成1:50的EDTA抗原修复液于高压锅进行修复2 min；将切片放入3%过氧化氢溶液中浸泡10 min，自来水冲洗干净；离组织3 mm处用免疫组化油笔画圈；组织上加一滴Ki67抗体，室温下孵育120分钟或4℃过夜，PBS冲洗5次；滴加二抗，室温下孵育20 min，PBS冲洗5次；DAB显色，镜下观看显色效果并终止反应；苏木素复染2 min；中性树胶封固。

1.3 结果判定

所有标本均由两位以上经验丰富的病理科医师进行诊断。每张切片取 10 个具有代表性的高倍视野，Ki67 蛋白阳性染色定位于细胞核，颗粒呈棕黄色。采用相对定量法：计算阳性细胞占肿瘤细胞的百分比。若＜14%的细胞表达Ki-67 为阴性（-）；若≥14% 的细胞表达 Ki67则为阳性（+）。

1.4 统计学处理

采用SPSS 25.0软件对所有实验数据进行统计学处理。计数资料以频数或百分率表示，组间比较采用x2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

表1 Ki-67在各型乳腺癌中的阳性率比

（1）Ki67 蛋白异常表达与乳腺癌恶性程度是否浸润比较，P＞0.05,差异无统计学意义。

（2）乳腺癌细胞核分级的增加、乳腺癌是否组织转移与Ki67蛋白异常表达结果比较有统计学意义。

3 讨 论

随着临床上免疫组织化学技术得到广泛应用，病理医生利用检测技术可以提高诊断的准确性，并有助于疾病的鉴别诊断。与传统的病理HE染色技术相比，免疫组织化学技术在形态学诊断中更加具有直观性、简便性，提高了诊断的特异性与准确性，从而提高了诊断的效能。Ki67是一种核蛋白，位于人类Ki67基因定位在第10号染色体上，其与核糖体RNA转录有关 ，Ki67的失活使核糖体RNA合成受限。Ki67在细胞增殖的各期（G1，S，G2和M）中均有表达，但在细胞静止期G0期不表达，可以作为一个细胞增殖的相关标记物。因此，在病理诊断报告中的指数高低与许多肿瘤分化程度、浸润、转移及预后均有相关性。由于其主要表达在活跃的细胞周期阶段，在细胞核内的定位具有一定的特异性，并且随细胞周期而改变，能被Ki67单克隆抗体染色的细胞核只有处于细胞周期的G1后期及以后的各活跃增殖期细胞，而处于静止期的细胞核不会被染色，因此，Ki67成为目前非常理想的细胞增殖标记物，更好的作为形态学结果的补充。

本研究结果显示，Ki67高表达组中组织学分级Ⅱ、Ⅲ级的患者比例明显高于低表达组，Ki67蛋白在乳腺癌组织转移的样本中表现为高表达水平，说明患者结果增殖指数与肿瘤过度增殖、肿瘤分化程度较低有关，增加Ki67等免疫组化指标检测可以增加病理诊断的客观性，提高结果报告的准确性和特异性。Ki67表达高水平，反映肿瘤细胞增殖快，预后较差。目前国内有相关报道 Ki67 高表达与浸润性乳腺癌有相关性，Ki67 可以在浸润性乳腺癌中作为判断预后的指标[3]，并有助于治疗决策的制定，临床上对其进行化疗后在对其预后评估过程中可将 Ki67 作为判断的重要治疗 , 进而对化疗效果进行评估。但也有研究该指标高表达与浸润性无明显特异性相关性，本研究仅限于单中心的回顾性分析，仍需扩大研究范围，增加研究数量，尚待更多临床资料进行进一步的研究。