三种不同剂型四君子制剂对脾气虚证大鼠血清SOD活性和MDA含量影响及以方测证研究*

孙豪娴，孙贵香，邓琳蓉，张 婷，肖 丹，厉佳俊

湖南中医药大学(长沙 410208)

颗粒剂膏是现在临床上运用最新的制药技术出现的一种新型膏剂，区别于传统汤剂与传统膏剂，颗粒剂膏不仅具备了膏滋的缓补作用，还结合了颗粒剂药物口感好、煎煮方便等优点。但对于颗粒剂膏与传统膏、传统饮片汤剂之间的疗效是否存在差异目前还未见详细研究报道。因此，本研究从四君子汤、传统四君子膏、颗粒四君子膏出发，以脾气虚证模型大鼠为研究对象，主要从大鼠体重、肛温、血清SOD活性水平、MDA水平等方面对比三组不同四君子制剂之间的作用差别，旨在对颗粒剂膏的疗效进行评估，为颗粒剂膏能否运用于临床提供实验依据。

材料与方法

1 材 料

1.1 实验动物：SPF级SD大鼠(180±20g)共50只，雌雄各半，体重(200±20)g，购自湖南中医药大学，合格证号：SYXK(湘)2013-0005。饲养于湖南中医药大学动物实验研究中心，实验室内温度控制在20～22℃，相对湿度维持在50%～60%。所用饲料和垫料均购自湖南中医药大学动物实验研究中心。

1.2 试药：大鼠超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)试剂盒(Andygene biotechnology公司)；大黄制剂液，四君子汤，成品颗粒剂四君子膏、传统四君子膏均按照四君子汤比例由深圳华润三九医药有限公司制造提供。

1.3 仪器：JE1002电子天平(精密度：0.01 g)、WMY-01数字温度计、低温高速离心机、EL34oi型全自动酶标仪、微量式移液器、室内游泳槽、冰箱等。

2 实验方法

2.1 分组：将50只大鼠依次编号，采用国际上通用的编号表计，随机分为5组，即正常组、模型组、四君子汤组、传统四君子膏组、颗粒四君子膏组，每组均10只大鼠。

2.2 药液制备：传统四君子膏、颗粒四君子膏药液：参照《人与动物用药量换算表》，按照体表面积折算等效剂量。四君子膏服用方法为成人2次/d，每次一调匙(约30 g)，则体重200 g的大鼠每日服用约1.16 g四君子膏。按照该剂量将传统四君子膏剂、颗粒剂四君子膏剂加纯净蒸馏水稀释配制灌胃药液。四君子汤组药液：以《太平惠民和剂局方》为依据：人参、茯苓、白术(炒)各9 g，甘草(炙)6 g，组方成药，煎煮两次，同样依据以上换算法浓缩配制药液。大黄制剂液：以成人每日服用大黄量为6 g换算，浓缩制备药液。

2.3 造模：采用饮食失节、耗气破气、劳倦过度法复制脾气虚证大鼠模型[1]。饮食失节：正常组大鼠每日正常饮水、进食及活动，其余四组大鼠隔日进食，自由饮水；耗气破气：于每天上午9点给予正常组大鼠灌胃0.9%的Nacl，余四组予大黄制剂液灌胃；劳倦过度：除正常组外其他组大鼠每日下午15点负重10%，于水深50 cm，水温(22±2)℃的室内游泳槽中游泳，以力竭为度(大鼠鼻尖没入水面10 s)。

2.4 给药：采取边造模边给药的方法，于每日下午16点，四君子汤组、传统四君子膏组、颗粒四君子膏组分别予以各组制备药液，正常组、模型组则予以等量0.9%的Nacl溶液。连续28 d。

2.5 观察指标：①实验全程观测动物的毛色、精神状态、粪便情况、游泳时间、食物量、饮食量等变化，比较各组间症状与体征的区别。②大鼠体重与肛温的测定：每两天称量一次各组大鼠的体重，并且对各组大鼠的肛温进行测量，并记录数据。③大鼠血清SOD、MDA水平测定：造模给药结束后次日，各组大鼠称重后水合氯醛麻醉，腹主动脉取血，放置凝后于低温下以3000 r/min的转速进行离心15 min，采用ELISA法测大鼠血清中SOD活性和MDA含量，测量方法按照试剂盒的说明书进行。

结 果

1 一般情况 正常组大鼠饮食、饮水正常，毛发有光泽，活动较多，反应灵敏；模型组大鼠于第4、5天开始排泄不成形大便，第9、10天开始出现拉尾排便，且排便次数增多，食量、饮水量减少，后出现扎堆、蜷缩，反应较迟钝，毛发无光泽，随着时间的推移，力竭游泳的时间逐渐缩短；四君子汤组、传统四君子膏组、颗粒四君子膏组大鼠一般情况表现接近正常组。

2 对大鼠体重、肛温的影响 造模前，大鼠的体重与肛温组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。造模后，与正常组相比，其余四组大鼠的体重与肛温都有所下降 (P<0.05)。与模型组相比，四君子汤组、传统四君子膏组、颗粒四君子膏组大鼠的体重及肛温均有所升高 (P<0.05)。三组四君子制剂组间比较提示，四君子汤组、传统四君子膏组、颗粒四君子膏组三组大鼠的肛温与体重差异无统计学意义(P>0.05)。见表1、表2。

表1 各组大鼠造模前后体重变化(g)

表2 各组大鼠造模前后肛温变化(℃)

3 对血清SOD活性和MDA含量的影响 与正常组相比，模型组大鼠的SOD活性水平降低，MDA水平升高，差异具有统计学意义(P<0.05)；与模型组相比，四君子汤、传统四君子膏、颗粒四君子膏组大鼠血清SOD活力均有所提高(P<0.05)，血清MDA浓度均低于模型组(P<0.05)；三组四君子制剂组间相互比较，四君子汤组、传统四君子膏组、颗粒四君子膏组，三组大鼠之间的SOD活性水平、MDA水平差异无统计学意义(P>0.05)。见表3。

表3 各组大鼠SOD活性水平、MDA水平的比较

注：与正常组比较,*P<0.05；与模型组比较,△P<0.05；与四君子汤组比较,▲P<0.05；与传统四君子膏组比较,□P<0.05

讨 论

纵观脾气虚证的造模方法，目前运用的形式多样化，有耗气破气法、饮食失节法、劳倦过度法、利血平法等，但大部分造模方法存在稳定性较差、恢复较快等问题[1]。诸多学者研究表明，多因素复合建立起的动物模型具有良好的稳定性[2]。因此，本实验参考中医理论中致病因素的内容，采取饮食失节加耗气破气加劳倦过度法的方法复制脾气虚证大鼠模型。造模后，模型组大鼠相继出现食少纳差、便溏倦怠、神疲迟钝等脾气虚证的表现，同时其反应细胞损伤程度的指标MDA的含量，及能够还原过氧化物，保护细胞不受自由基损伤的指标SOD的活性水平[3-4]较正常组存在明显改变，提示脾气虚证大鼠存在氧化损伤，其组织细胞清除氧自由基的能力下降。

四君子汤出自于宋代的《太平惠民和剂局方》，全方由人参、白术、茯苓、甘草四药组成，方中人参甘温，补元气，益中气，白术温脾燥湿，茯苓淡渗，健脾除湿，甘草益胃和中，调和诸药[5-6]。因选药平和，方中均为中和之品，故名曰君子[7]，该方具有益气健脾的功效，是治疗脾气虚证的基础方[8-9]。对比模型组，四君子汤组大鼠在灌胃四君子汤后其饮食、大便、精神状态得到明显改善，其血清中的SOD活性水平增高，MDA含量减少，说明四君子汤能够增加大鼠的活性氧清除机制，缓解氧自由基的损害，对造模后的大鼠具有治疗性作用。本实验建立的大鼠模型符合脾气虚证模型。证明运用饮食失节、耗气破气、劳倦过度法的方法复合建立脾气虚证大鼠模型符合中医理论，与相应的中医证候一致，并经得起药物反证，说明该造模方法是切实可行的。

中药颗粒剂的应用始于20世纪70年代，随着制备技术的不断提高和制备工艺的不断完善，颗粒剂在临床上的使用频率也越来越高[10]。何佳奇等[11]对2012年至2016年在浙江省有中药配方颗粒生产销售的企业和使用中药配方颗粒的医疗机构进行了统计调查，发现2012年至2016年5年，中药配方颗粒在浙江省医疗机构的销售额呈逐年递增趋，该结果提示配方颗粒在临床上的使用频率也逐年增长。沈光辉等[12]对重庆市某社区医院2015年1月至2017年8月中药配方颗粒和小包装饮片临床消费情况进行统计分析，发现中药配方颗粒在该院门诊部处方和金额中的占比在逐年递增，得出中药配方颗粒已逐渐被大众接受和认可的结论。不仅如此，颗粒剂既具备传统汤剂吸收快、作用迅速的特点，又克服了传统汤剂煎煮不便、服用量大、易霉变等不足[13]，在临床上药材剂型选择中扮演着越来越重要的角色。

膏剂是一种将饮片药物用水再三煎煮，去滓浓缩后加蜂蜜或冰糖收膏制成的呈半流体状的剂型，是中医常用八大剂型中的重要组成部分[14]。《山海经》言其：“言味好皆滑为膏，如指内容，以为物之精粹，如指作用，以滋养膏润为长”，近代名医秦伯未云膏方：“盖煎熬药汁成脂溢而所以营养五脏六腑之枯燥虚弱者”[15]，指出了膏剂的缓慢滋养作用，长期服用，不仅可以疗病祛疾，还具有补益虚羸、改善体质等作用。

颗粒四君子膏是由参苓术草这四味主药按照一定的比例炼制而成。在制作上，对比传统饮片膏，颗粒四君子膏的制作原料选用配方颗粒，制作主要包含溶解、浓缩、收膏三大步骤，省去了传统膏剂制作前期浸泡、一煎、二煎、过筛等繁琐的工艺，节约了人力物力[16]。在功效上，传统四君子膏组、颗粒四君子膏组大鼠的体重、肛温、血清SOD活性水平、MDA含量较模型组均有变化，说明四君子膏在对脾气虚证大鼠的情况改善上存在较好的疗效，进一步验证了其益气健脾的作用。组间比较发现，在体重和肛温上，两组的均值都低于正常组，且颗粒四君子膏组与四君子汤组大鼠的体重与肛温值较接近，稍高于传统四君子膏组，但组间的差异不具有统计学意义，说明传统四君子膏与颗粒四君子膏在对大鼠体重和肛温的影响上效应相同。对比组间血清SOD活性和MDA的含量，两者均较模型组存在差异，提示四君子膏可以提高脾气虚证模型大鼠的SOD活力，降低MDA浓度。虽然二者在数值上存在上下小幅度的偏差，但差异无统计学意义，说明传统四君子膏与颗粒四君子膏在对大鼠血清SOD活性和MDA的含量的影响上效应相同。提示在一定程度上传统四君子膏与颗粒四君子膏均可抑制大鼠体内细胞的过氧化反应，保护其不受氧自由基的损伤。

综上可知，传统四君子膏与颗粒四君子膏均有较好的益气健脾的作用，对于脾气虚证的治疗具有较好的效果，且两者在疗效上无明显差异，与四君子汤的效果相比也无明显区别。因此在临床处方剂型上，我们可以根据患者自身的疾病及需求情况，考虑是否选择膏剂对其进行治疗；在膏剂的制作上，我们亦可以结合患者的顾虑喜好，考虑是否选择颗粒剂来进行膏剂的制备。医者不仅需要做到“用药如用兵”，还需要针对患者的具体的情况选用不同的中药制剂，以充分发挥各自的优势，取得理想的疗效。