免疫组化法与荧光原位杂交技术检测乳腺癌组织HER2表达对比分析

方卓宁 吕祥瑞

河南省焦作市人民医院 454150

乳腺癌是一种发生在乳腺上皮组织的女性恶性肿瘤，异质性较强，具有临床多样性，且不同乳腺癌组织基因表达也不同，增加临床治疗的困难程度，严重威胁女性生命健康安全[1]。目前尚未明确乳腺癌的发病机制，多认为其发展是多因素、多步骤、多阶段共同作用的结果，故明确乳腺癌发生、发展中重要的生物学指标，对改善患者预后尤为重要。人类表皮生长因子受体2(Human epidermal growth factor receptor 2，HER2)是一种原癌基因，在细胞生长因子的信号传导过程中有重要作用，若乳腺癌患者的肿瘤细胞中HER2呈高表达状态，则将使癌细胞生长转移[2]。目前，荧光原位杂交技术及免疫组化法是检测乳腺癌组织HER2表达的常用方法，但两种方法存在不一致性[3]。鉴于此，本文对我院140例乳腺癌患者检测结果展开分析，进一步对比免疫组化法与荧光原位杂交技术检测乳腺癌组织HER2表达的效果，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 通过我院医学伦理委员会审核，选择本院2013年2月—2015年12月140例乳腺癌患者，年龄37～64岁，平均年龄(49.84±9.59)岁；体重指数(BMI)18～32，平均BMI 23.59±3.29；TNM分期：Ⅱ期87例，Ⅲ期53例；分化程度：低分化30例，中分化38例，高分化72例；合并症：高脂血症18例，糖尿病11例，高血压7例。所有患者及家属均已知并签署知情同意书。

1.2 入选标准 纳入标准：(1)术前或术中病理检查确诊为乳腺癌；(2)年龄≤65岁；(3)TNM分期为Ⅱ～Ⅲ期。排除标准：(1)合并脑梗死、心肌梗死等重大心血管疾病；(2)术前曾接受化疗或分子生物治疗；(3)合并其他恶性肿瘤；(4)肝、肾等脏器功能不全；(5)治疗期间转院、放弃治疗。

1.3 方法 所有患者术前均完善各项检查，并择期进行乳腺癌根治术，术中取肿瘤组织病理标本，分别进行免疫组化法和荧光原位杂交技术检测病灶组织中HER2表达情况。(1)免疫组化法检测：使用10%中性福尔马林固定乳腺癌组织标本，并使用石蜡包埋切片，采用SP免疫组化法对乳腺癌组织中HER2蛋白表达情况进行检测。其中≤10%肿瘤细胞膜染色为HER2(-)；染色程度较轻，但>10%肿瘤细胞膜染色为HER2(+)；染色程度较重，且10%～30%肿瘤细胞完整包膜染色为HER2(++)；>30%肿瘤细胞完整包膜强染色为HER2(+++)，且认为HER2阳性包括HER2(++)及HER2(+++)，HER2阴性包括HER2(-)及HER2(+)。(2)荧光原位杂交技术：在65℃下烘烤乳腺癌组织的石蜡切片4h后脱蜡，使用90℃蒸馏水处理30min后，采用蛋白酶K消化10min，之后使用10%福尔马林固定10min后脱水晾干，封片并放入原位杂交仪中，加入DAPI 10μl，15min后使用荧光显微镜对玻片进行观察。其中HER2拷贝数/细胞≥6.0或细胞核内橘红色的HER2基因荧光信号/17号染色体绿色荧光信号值≥2.0则为HER2阳性；HER2拷贝数/细胞<6.0且该比值<2.0为HER2阴性。重新检测结果不确定的患者，再分类。所有患者术后均随访3年。

1.4 评价指标 (1)HER2检测结果：统计免疫组化法检测HER2表达情况[HER2(-)、HER2(+)、HER2(++)及HER2(+++)]，以及荧光原位杂交技术检测HER2表达情况(阳性、阴性)；(2)检测结果一致性：统计免疫组化法和荧光原位杂交技术检测HER2表达阳性、阴性情况，并计算其一致性；(3)术后复发情况：统计术后3年疾病复发情况，并比较HER2表达阳性和阴性患者的术后复发情况。

1.5 统计学方法 采用SPSS25.0统计学软件处理所得数据，计数资料以[n(%)]表示，组间比较采用χ2检验；采用Kappa分析免疫组化法和荧光原位杂交技术检测HER2结果的一致性；以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 HER2检测结果 免疫组化法检测结果为HER2(-)的患者荧光原位杂交技术检测均为阴性，其符合率为100.00%；免疫组化法检测结果为HER2(+)患者中荧光原位杂交技术检测为阴性29例，符合率为96.67%；免疫组化法检测结果为HER2(++)患者中荧光原位杂交技术检测为阳性21例，符合率为87.50%；免疫组化法检测结果为HER2(+++)患者中荧光原位杂交技术检测为阳性23例，符合率为95.83%,见表1。

2.2 检测结果一致性 免疫组化法和荧光原位杂交技术检测乳腺癌患者HER2结果的一致性较好(Kappa=0.920，P=0.000),见表2。

2.3 术后复发情况 经3年随访，140例乳腺癌患者中复发35例。其中荧光原位杂交技术检测HER2表达为阳性患者中术后复发23例(51.11%)，明显高于其检测为阴性患者的12例(12.63%)，差异有统计学意义(χ2=36.631，P=0.000)；免疫组化法检测HER2表达阳性患者术后复发24例(50.00%)，明显高于其检测为阴性的患者的11例(11.96%)，差异有统计学意义(χ2=24.348，P=0.000)。

表1 免疫组化法和荧光原位杂交技术检测HER2的结果(n)

表2 免疫组化法和荧光原位杂交技术检测HER2结果的一致性分析(n)

3 讨论

乳腺癌是一种好发于中年及更年期妇女的妇科肿瘤性疾病，其发生率约占女性恶性肿瘤的25%，具有较高的死亡率，特别是HER2阳性乳腺癌患者。HER2是一种原癌基因，在乳腺癌诊断中具有重要的作用，其阳性表达则表示病灶具有转移的可能性。而有关研究指出，根据HER2表达情况制定针对性的治疗方案，可在一定程度上降低术后疾病复发率，延长患者生存周期，改善生活质量[4]。因此，选择一种更为有效的检测方法明确病灶组织中HER2表达情况尤为重要。

免疫组化法是一种常用HER2表达检测方法，以组织为基础的蛋白检测方法，通过特殊染色后可对肿瘤细胞表面是否有HER2受体进行判断，具有操作简单、价格低廉等特点。但其检测过程中标本的固定及处理中可能会产生蛋白质变性、17号染色体非整倍体情况及在抗原修复、抗体批号差异、结果主观判断等实验关键步骤不标准化情况，对结果的可靠性造成影响[5-6]。荧光原位杂交技术是以荧光标记的特异寡聚核苷酸片段作为探针，检查17号染色体着丝粒和HER-2/neu基因扩增情况的乳腺癌诊断新技术，可使肿瘤细胞表面的HER2基因受体发出荧光，在荧光显微镜下对细胞或组织原位观察分析，进而获取细胞内染色体或基因变化的原位，可对基因扩增、鉴别染色体数目及结构异常情况进行判断，且具有较高的敏感性、特异性[7-8]。本文中，荧光原位杂交技术检测乳腺癌组织HER2表达的结果与免疫组化法检测结果具有较高的符合率，表明免疫组化法和荧光原位杂交技术检测乳腺癌组织HER2具有较高的一致性，可显示乳腺癌组织HER2表达情况。组织中DNA的稳定性较高，故荧光原位杂交技术检测可提供客观、明确的阴性或阳性结果，但其易受蛋白消化不当、烤片温度过高等因素影响，导致荧光信号减弱或无信号等[9]。同时该检测方法对实验要求较高、实验器材较为昂贵，无法广泛推广使用。而免疫组化法对材料要求不高，且方法简便、可重复性好等，可用于对乳腺癌筛查，而对于无法确定的病灶组织则可采用荧光原位杂交技术检测[10]。

乳腺癌的发生、发展过程中，原癌基因、抑癌基因的失活、缺失、突变等有着重要的作用。随着研究的不断深入发现，分子标志物的检测在乳腺癌的诊断、治疗和预后的评估中提供了新的措施，有助于更好的预测乳腺癌患者术后生存情况[11]。本文结果显示，荧光原位杂交技术和免疫组化法检测HER2表达阳性患者术后复发率明显高于各自检测阴性患者，表明HER2表达情况可对乳腺癌患者术后疾病复发情况进行预测。分析其原因为HER2是具有酪氨酸蛋白激酶活性的表皮生长因子受体家族成员，在细胞增殖、分化及维持正常细胞调节中有着重要作用，是乳腺癌分子靶向治疗的基因靶位点，而激活HER2受体后将产生过度表达，使恶性肿瘤转化活性得到充分发挥，进而造成恶性肿瘤复发和转移，缩短患者无病生存期和总生存期[12]。

综上所述，在乳腺癌组织HER2表达检测中荧光原位杂交技术和免疫组化法检测有高度一致性，可对乳腺癌患者术后疾病复发进行反映。