黄芪多糖对动物免疫器官生长发育的影响

马发顺，范乐乐，时志琪，梁秀丽，宋玉伟，元雪浈

（1.安阳工学院生物与食品工程学院，河南安阳455000；2.河南省兽用生物制品研发与应用国际联合实验室/河南省动物疫病防控与营养免疫院士工作站，河南安阳455000；3.河南省兽药饲料监察所，郑州450000）

中药黄芪为蒙古黄芪或膜荚黄芪的干燥根，其中最主要的活性成分是多糖、皂甙、黄酮等[1]。黄芪多糖（APS）具有促进动物免疫器官发育、提高机体免疫力、促进生长发育等功能，是较好的免疫调节剂。杨庆芳等[2]、柳志余等[3]和孙波等[4]研究表明，肉鸡和珍珠鸡日粮中添加APS可提高日增重和免疫器官功能；蒙洪娇等[5]和李春凤等[6]研究表明，APS可提高仔猪日增重和免疫功能；桑秋凌等[7]认为APS可增强大鼠细胞免疫功能；蒋瑞雪等[8]研究了APS对小鼠免疫功能的影响；葛斌等[9]研究了APS对小鼠的抗衰老作用机制。上述研究主要集中在APS对动物的生产性能和免疫功能方面，而针对动物免疫器官生长发育的研究比较少。笔者以昆明鼠为试验动物，在APS生物活性检测的基础上研究其对小鼠免疫器官的影响，为以后APS的作用机理研究提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试验动物

昆明小鼠（SPF级）购自河南省实验动物中心。饲养室保持空气流通，自然光照，温度控制在20～26℃，湿度控制在40%～70%；所用饲料（SPF级），购自河南省实验动物中心；饮水为去离子水；保持小鼠生活环境清新，保持饲料、饮水清洁。

1.1.2 试验仪器和药品

电子天平（型号ES3200），天津市德安特传感技术有限公司生产；独立送风隔离笼具（型号IVCII），上海康为医疗科技发展有限公司生产；黄芪多糖注射液（规格以葡萄糖计100mL：1.0g），河南省各兽药厂提供；氯化钠注射液（规格0.90%），河南科伦药业有限公司生产。

1.2 方法

1.2.1 试验设计

取体重18～20 g健康昆明鼠64只，随机分为8组，每组8只；其中4组为试验组，4组为对照组。安排4种APS样品进行试验，每1种样品设1组试验，1组对照。试验组每只腹腔注射黄芪多糖注射液0.5 mL/d，对照组注射等量生理盐水；试验期为7 d。

1.2.2 测定项目

最后1次注射APS 24 h后将小鼠处死，称量小鼠的体重、脾重和胸腺重，并计算脾指数和胸腺指数；脾指数=脾脏重(mg)/体重(g)，胸腺指数=胸腺重(mg)/体重(g)。再计算试验组相对于对照组的增长率：增长率=(试验组测量值－对照组测量值)/对照组测量值×100%。按照《中华人民共和国兽药典》（2015版二部）的规定，试验组与对照组脾指数差值≥2判定样品为合格，差值＜2判定样品为不合格。

1.2.3 数据分析

使用Excel 2010软件进行数据整理和描述统计，试验组与对照组间的比较采用t检验法，数据以“平均数±标准差”表示。

2 结果与分析

2.1 各项目初步统计结果

APS生物活性检测各项目测定结果见表1。

从表1可以看出，脾重和脾指数在4种样品试验组与对照组间均差异极显著（P＜0.01），胸腺重1种样品差异极显著（P＜0.01）、2种样品差异显著（P＜0.05）；胸腺指数1种样品差异极显著（P＜0.01）、1种样品差异显著（P＜0.05）；体重2种样品差异极显著（P＜0.01）、1种样品差异显著（P＜0.05），但样品S2t值为负值。从变异系数（CV）来看，胸腺重和胸腺指数变异程度较大，其次是体重，脾重和脾指数变异程度最小。

表1 各项目测定结果

2.2 各项目增长情况

比较各项目试验组相对于对照组的增长情况，计算的绝对差值和增长率见表2。

表2 各项目试验组相对于对照组的增长情况

从表2可以看出，体重项差值大小顺序为：S3、S4、S1、S2，脾重项为：S1、S3、S4、S2，胸腺重项为：S4、S3、S2、S1，脾指数项为：S1、S2、S3、S4，胸腺指数项为：S4、S2、S3、S1。从各项目增长率的比较来看，样品 S1和S3的脾重增长率均最大，样品S4的胸腺重最大，样品S2的胸腺指数最大。样品S2的体重项试验组小于对照组。根据判定标准可判定样品S1、S2、S3为合格品，样品S4不合格。

2.3 合格样品试验组与对照组的比较

将合格样品S1、S2、S3进行综合分析，考查各项目试验组相对于对照组的变化情况，结果见表3。

从表3可以看出，试验组体重高于对照组体重5.67个百分点，但差异不显著（P＞0.05），试验组变异程度大于对照组；脾重试验组比对照组高71.98个百分点，差异极显著（P＜0.01），试验组变异程度小于对照组；胸腺重试验组比对照组高25.93个百分点，差异显著（P＜0.05），试验组变异程度小于对照组；脾指数试验组比对照组高66.33个百分点，差异极显著（P＜0.01），试验组变异程度小于对照组；胸腺指数试验组比对照组高17.29个百分点，但差异不显著（P＞0.05），试验组变异程度小于对照组。

3 讨论与结论

1）从试验组与对照组的比较来看，APS对小鼠脾脏和胸腺生长均有促进作用，但对脾脏生长的促进作用更显著，此结果与陈明志等[10]和高旭等[11]的研究结果一致。注射APS注射液可使小鼠脾重和脾指数极显著提高（P＜0.01），可使胸腺重显著提高（P＜0.05），而胸腺指数提高未达到显著水平（P＞0.05），这与黄志远等[12]的研究结果不完全相同。APS对体重生长的影响不显著（P＞0.05），此结果与杨庆芳等[2]、柳志余等[3]和孙波等[4]的结论不一致，这可能与动物的种类及试验设计有关。样品S2体重项的特殊差异可能是由于试验应激和误差所造成。

表3 合格样品试验组与对照组间的比较

2）APS对小鼠体重、脾重和胸腺重促生长作用程度不同。比较而言对脾重影响最大（增长率71.98%），其次是胸腺重（增重率25.93%），对体重影响最小（增长率5.67%）。由于APS样品不同其生物学效价不同，对小鼠脾重、胸腺重和体重的影响有较大差异；小鼠个体对APS样品的反应不同，导致试验组体重变异程度有增大的倾向，而由于APS对免疫器官的促生长作用，使脾重和胸腺重的变异程度有减小的倾向。

3）按照我国兽药典提供的方法进行APS生物活性检测，方法中仅规定了小鼠的体重要求，而没有日龄、性别、注射操作、体重称量、脾脏分离与称量等方面的说明。在实际检测时这些因素均可能成为误差来源，影响试验数据的精确性和准确性。所以相关部门应加强试验规范性研究，出台操作细则以降低试验误差，提高试验结果的可靠性。