芩白清肺方联合糖皮质激素对肺炎支原体肺炎患者的临床疗效

2020-06-02赵霞，张岳

中成药 2020年5期

赵霞，张岳

（南阳医学高等专科学校，河南南阳473000）

肺炎支原体作为无细胞壁原核细胞型生物，可通过呼吸道传播，入侵机体后引发炎症免疫信号转导紊乱，伴随C-反应蛋白（CRP）、肿瘤坏死因子-α （TNF-α）、白介素-6 （IL-6）、白介素-8 （IL-8）等炎症细胞因子过度活化，从而发生肺炎支原体肺炎［1-2］，若不及时治疗，则容易促发炎症级联反应，导致全身炎症反应综合征及多器官功能不全综合症等，儿童是肺炎支原体肺炎易感人群。作为一种先天性免疫的病原模式识别受体，Toll 样受体（TLRs）具有识别多种病原微生物抗原成分的功能，通过髓样分化因子88 依赖性途径和非依赖性途径进行信号传导并活化NFκB，后者可启动CRP、TNF-α、IL-6、IL-8 等炎性细胞因子转录表达，启动适应性免疫，激发炎性连锁反应，促进病情发生发展［3-4］，可知以TLRs、炎症因子变化相关的免疫紊乱是病理特点。

西医治疗肺炎支原体时，常利用糖皮质激素迅速抑制内毒素分泌和合成，缓解临床症状，但其不良反应明显，芩白清肺方是根据南阳医学高等专科学校第二附属医院治疗经验及文献报道制备的院内制剂。

本研究考察芩白清肺方联合糖皮质激素对肺炎支原体肺炎患者的临床疗效，以期为该方临床应用提供参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料 2013 年5 月至2018 年4 月收治于南阳医学高等专科学校第二附属医院呼吸内科的168 例肺炎支原体患者，随机分为对照组（85 例）和观察组（83 例）。研究经医院伦理委员会批准，患者家属或监护人均签署知情同意书。

1.2 材料红细胞裂解液（美国eBioscience 公司）；CRP、TNF-α、IL-6、IL-8 试剂盒均购自上海研生实业有限公司。iMARK 型酶标仪、GENE Genius 凝胶成像系统（美国Bio-Rad 公司）；PCR 扩增仪（德国Biometra 公司）；MX3000P荧光定量PCR 仪（美国Stratagene 公司）；JM-250 电泳仪（大连捷迈科贸有限公司）；Du-640 紫外分光光度仪（美国贝克曼库尔特公司）；Master ScreenTMPAED 肺功能监测仪（德国耶格公司）；BJ05-4 血气分析仪（德国拜耳公司）。

1.3 治疗手段 2 组患者入院后，立即给予祛痰、结合、平喘、吸氧等常规治疗，对照组注射甲泼尼龙琥珀酸钠［辉瑞制药比利时公司，国药准字H20080284，40 mg／瓶（以甲泼尼龙计），批号20130302］静脉滴注，48 h 内每隔6 h 给药1 次，每次30 mg／kg，48 h 后改为醋酸泼尼松片（兰州佛慈制药股份有限公司，国药准字H62020884，5 mg／片，批号20130501）口服，剂量1 mg／kg；观察组在对照组基础上加用芩白清肺方，组方药材（黄芩、百部、桔梗、地龙、麦冬、紫苑）均购自河南省内中药批发公司，经南阳医学高等专科学校中医系吴黎明教授鉴定为正品，取上述药材各15 g，煎煮2 次，合并煎液，浓缩至200 mL，每天分2 次服用。两组均连续给药5 d。

1.4 指标检测

1.4.1 肺功能肺功能监测仪检测肺活量（VC）、用力肺活量（FVC）、1 s 用力呼气容积（FEV1）、峰值呼气流速（PEF）、最大呼气中段流量（MMEF）。

1.4.2 血气血气分析仪检测血液pH、PCO2、PO2、HCO-3、血红蛋白、血氧饱和度、红细胞压积。

1.4.3 炎症因子 ELISA 法检测空腹外周血CRP、TNF-α、IL-6、IL-8 水平。

1.4.4 To11 样受体2 （TLR2）、To11 样受体4 （TLR4）mRNA 表达采用RT-PCR 法检测。治疗前后收集空腹外周血各约5 mL，置于抗凝试管中，分离外周血单个核细胞，重悬RPMI-1640 培养基，置于96 孔板中，于37 ℃、5%CO2下培养60 min 后，Trrizol 法、紫外分光光度计分别提取并测定外周血单个核细胞总RNA 及纯度，引物序列见表1，以RNA 为模板，加2.5 mmol／L olig （dT） 18 与莫洛尼氏鼠白血病毒逆转录酶。TLR2、TLR4 mRNA 扩增条件为94 ℃预变性120 s，循环扩增，97 ℃变性90 s，56 ℃退火60 s，72 ℃延伸60 s，35 次循环，72 ℃延伸10 min，反应产物经琼脂糖凝胶电泳进行分析。采用Imag-proplus 软件分析条带，以TLR2、TLR4 与NAPDH的IOD 比值为两者mRNA 表达。

表1 引物序列

1.4.5 疗效评价（1）治愈，治疗2 周内，呼吸道症状、体温、血象、C 反应蛋白（CRP）均正常；（2）显效，体温有降低趋势，呼吸道症状、血象、CRP 均未完全恢复；（3）进步，体温未退，但呼吸道症状，血象、CRP 中至少有1 项改善；（4）无效，体温未退，呼吸道症状，血象、CRP 均未改善，甚至恶化。总有效率＝［（治愈例数+显效例数+进步例数）／总例数］ ×100%。

1.5 统计学分析通过SPSS 17.0 软件进行处理，计数资料以百分率表示，组间比较采用卡方检验；计量资料以（）表示，多组比较采用方差分析，两两比较采用LSD-t检验。P＜0.05 表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 一般资料 2 组患者性别比、年龄、病程、发热时间、咳嗽时间、并发症情况比较，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性，见表1。

表1 2 组一般资料比较（）

2.2 肺功能指标治疗后，观察组VC、FVC、FEV1、PEF、MMEF 高于对照组（P＜0.05），见表2。

表2 2 组肺功能指标比较（）

2.3 血气指标治疗后，观察组pH、PCO2、PO2、、血氧饱和度、血红蛋白高于对照组（P＜0.05），两组红细胞压积比较差异无统计学意义（P＞0.05），见表3。

表3 2 组血气指标比较（，1 mmHg＝0.133 kPa）

2.4 炎症因子治疗后，观察组CRP、TNF-α、IL-6、IL-8水平低于对照组（P＜0.05），见表4。

2.5TLR2、TLR4 mRNA 表达治疗后，观察组TLR2、TLR4 mRNA 表达低于对照组（P＜0.05），见表5、图1。

表4 2 组炎症因子比较（）

表5 2 组TLR2、 TLR4 mRNA 表达比较（）

图1 2 组TLR2、 TLR4 mRNA 表达

2.6 临床疗效观察组总有效率高于对照组（P＜0.05），见表6。

表6 2 组临床疗效比较

3 讨论

芩白清肺方是参考国家食品药品监督管理局批准的芩白清肺浓缩丸组方改造而成，由黄芩、百部、桔梗、地龙、麦冬、紫菀6 味药材组成，全方共奏清肺之热毒，可保肺之阴津，降肺之逆气［5］。本研究发现，与对照组（单用糖皮质激素）比较，观察组（芩白清肺方联合糖皮质激素）肺炎支原体肺炎患者肺功能、气血指标、临床疗效均明显提高。

LRs 可参与固有免疫与炎性细胞因子的产生及相关的信号传递过程，其中TLR2、TLR4 是该家族重要成员，可协同链接蛋白髓样分化因子并识别MP，进而激活促炎细胞因子，开启适应性免疫应答。本研究发现，治疗前患者外周血单个核细胞表面TLR2、TLR4 mRNA 均呈高表达，外周血炎症因子CRP、TNF-β、IL-6、IL-8 亦然，表明它们是病情发生发展的病理学特点［6-7］。

本研究发现，观察组可降低外周血单个核细胞表面TLR2、TLR4 mRNA 及炎症因子表达，与对照组比较在改善上述免疫紊乱方面效果更显著，提示芩白清肺方具有调节免疫紊乱的作用，可能与其所含的药材及有效成分相关。陈文等［8］报道，黄芩可通过下调肝肺组织炎症信号通路中TLR4 蛋白表达来阻止炎症信号的转导，减少反向细胞因子IL-1β、TNF-α 表达来发挥对内毒素血症大鼠肝肺损伤的保护作用；黄常新等［9］发现，含百部、紫菀的养阴清热及润肺止咳验方发挥功效是通过抑制TLR4 信号通路、下调肺部炎症因子表达、阻止或延缓放射性肺损伤发生发展所致，其作用与激素相当；单进军等［10］研究显示，桔梗中皂苷、黄酮类化合物可与TLR4 蛋白发生作用，调控呼吸道过度炎症反应，改善肺功能，降低咳嗽中枢对刺激反应，从而达到止咳祛痰的作用；曹羽等［11］报道，含有麦冬的芪冬活血饮对LPS 导致的大鼠急性肺损伤有保护作用，其机制与抑制TLR4 mRNA 表达、抑制促炎细胞因子TNF-α 和IL-1β、升高抗炎细胞因子表达、纠正炎症失衡等作用相关；邢清敏等［12］发现，含有麦冬的生脉散治疗扩张型心肌病大鼠的作用机制可能与调节TLR-4 蛋白水平，从而抑制TLR-4／NF-κB 信号通路反向炎症因子相关；文秀华等［13］研究显示，含有紫菀的补肺汤免煎剂可抑制慢性阻塞性肺疾病大鼠肺组织中TLR2、TLR4 活性，通过My D88 依赖性经典途径来调节反向NF-κB 信号通路，改善气道重塑，并呈现剂量依赖性关系。

尽管大量临床研究寻找中医治疗肺炎支原体肺炎的方法，以改善预后，但主要倾向于其疗效及安全性，鲜有对相关机制的深入考察。本研究在临床经验的基础上分析芩白清肺方的治疗机制，发现该方有助于降低TLR2、TLR4 mRNA 表达，可为相关中医药治疗提供参考。

综上所述，芩白清肺方联合糖皮质激素可改善肺炎支原体肺炎患者肺功能、气血指标、免疫紊乱，增强抗病能力，促进病情恢复，降低并发症发生。但芩白清肺方中含有多种中药成分，发挥调节TLR2、TLR4 mRNA 表达的机制可能是各成分协同作用的结果，考虑到临床研究的局限性，今后仍需通过动物或离体实验作进一步研究。