胃癌组织中Beclin1和LC3的表达水平分析

王颖

【摘要】 目的   分析胃癌组织中Beclin1和微管相关蛋白轻链3（LC3）的表达水平， 以期为临床相关工作或研究提供参考。方法 选取75例胃癌组织芯片HStmA150CS02标本为研究对象， 对所有标本实施染色处理。比较胃癌组织与癌旁组织中Beclin1、LC3表达水平， 分析胃癌患者的基本信息和病理特征以及患者病理特征与Beclin1、LC3表达水平之间的关系。结果 胃癌组织中Beclin1、LC3的表达阳性率分别为30.67%、34.67%， 均明显低于癌旁组织的89.33%、76.00%， 差异具有统计学意义（P<0.05）。Beclin1、LC3表达阳性患者与Beclin1、LC3阴性表达患者的年龄、性别及肿瘤位置比较， 差异无统计学意义（P>0.05）。Ⅰ～Ⅱ期患者Beclin1、LC3表达阳性率分别为82.61%、80.77%， 均明显高于Ⅲ～Ⅳ期的17.39%、19.23%， 差异具有统计学意义（P<0.05）;浆膜层内患者Beclin1、LC3表达阳性率分别为86.96%、84.62%， 均明显高于浆膜层外患者的13.04%、15.38%， 差异具有统计学意义（P<0.05）;淋巴结未转移患者Beclin1、LC3表达阳性率分别为86.96%、84.62%， 均明显高于淋巴结转移患者的13.04%、15.38%， 差异具有统计学意义（P<0.05）;Ⅲ级分化患者Beclin1、LC3表达阳性率分别为8.70%、11.54%， 均明显低于Ⅰ～Ⅱ级分化患者的91.30%、88.46%， 差异具有统计学意义（P<0.05）。结论 Beclin1、LC3在胃癌组织中的表达阳性率相对较低， 且随着患者病情的发展， 该两项指标的表达阳性率会随之降低。

【关键词】 Beclin1;胃癌;微管相关蛋白轻链3;自噬;凋亡

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2020.12.087

胃癌是指起源于胃黏膜上皮的一种恶性肿瘤， 在国内各地恶性肿瘤发病率中稳居首位， 该病的发生有显著地域差异性， 多见于东部沿海与西北地区， 高发于>50岁人群， 男性多于女性， 两者发病率的比例约为2∶1[1]。近年来， 由于饮食结构与生活方式的变化， 该病发生率有所上升， 且呈年轻化发展趋势， 当前， 临床上尚未找到特效治疗方法。Beclin1、LC3皆是形成自噬体的重要基因， Beclin1属于自噬相关基因， 其与Bcl-2基因共同调控自噬， 在自噬溶酶体降解期间可发挥抗肿瘤效果;LC3为一种自噬标志基因， 也是诊断自噬特异的主要指标之一。为分析Beclin1、LC3于胃癌组织中的表达水平， 现对75例胃癌患者展开研讨， 详细报告如下。

1 资料与方法

1. 1 一般资料 选取上海芯超生物科技有限公司提供的75例胃癌组织芯片HStmA150CS02标本， 均为手术过程中获取， 且经病理检查明确判断。

1. 2 方法 对胃癌芯片进行常规脱蜡， 之后， 利用柠檬酸缓冲液实施抗原修复， 添加3%双氧水去离子水， 于37℃下孵育18 min。第1抗体（兔抗人Beclin1与LC3多克隆抗体）稀释至1∶200， 在4℃下过夜， 之后添加相应的试剂于37℃下进行孵育， 时间为20 min。在第2抗（羊抗兔抗体）中添加过氧化物酶进行标记， 然后， 实施显色， 利用苏木精实施重新染色;脱水后， 应用中性树胶进行封片。

1. 3 观察指标 ①观察比较胃癌组织与癌旁组织中Beclin1、LC3表达阳性情况。②观察患者基本信息（年龄、性别及肿瘤位置）分布与Beclin1、LC3表达水平。③对芯片实施免疫组化分析， 所用产品编号为HStmA150CS02（上海芯超生物科技有限公司）， 点阵直径为1.5 mm， 胃腺癌75例——癌75点/癌旁75点， 并分析75例患者病理特征（病理分级、浸润深度、淋巴结有无转移、分化程度）与Beclin1、LC3表达水平之间的关系。

1. 4 统计学方法 采用SPSS17.0统计学软件对数据进行统计分析。计数资料以率（%）表示， 采用χ2检验。P<0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2. 1 胃癌组织与癌旁组织中Beclin1、LC3表达阳性情况对比 胃癌组织中Beclin1、LC3表达阳性率均低于癌旁组织， 差异具有统计学意义（P<0.05）。见表1。

2. 2 75例患者基本信息分布与Beclin1、LC3表达水平分析 Beclin1、LC3表达阳性患者与Beclin1、LC3表达阴性患者的年龄、性别及肿瘤位置比较， 差异无统计学意义（P>0.05）。见表2。

2. 3 75例患者病理特征与Beclin1、LC3表达水平之间的关系分析 Ⅰ～Ⅱ期患者Beclin1、LC3表达阳性率均显著高于Ⅲ～Ⅳ期， 浆膜层内患者Beclin1、LC3表达阳性率均明显高于浆膜层外患者， 淋巴结未转移患者Beclin1、LC3表達阳性率均高于淋巴结转移患者， Ⅲ级分化患者Beclin1、LC3表达阳性率均低于Ⅰ～Ⅱ级分化患者， 差异具有统计学意义（P<0.05）。见表3。

3 讨论

自噬在机体的病理与生理过程中均可见到， 其主要是借助溶酶体来降解自身受损的大分子物质与细胞器， 为真核细胞独有的生命特征[2]。自噬除了参与细胞死亡、分化成熟、生长发育的调控外， 还与肿瘤的出现、演变存在密切的关系。

Beclin1基因又称为BECNI基因， 为自噬调控因子， 也被临床上作为肿瘤相关因子。从肿瘤方面， Beclin1参与的自噬反应有以下几种机理：①清除具有较高遗传毒性、促使细胞非凋亡方式死亡、合成活性氧的细胞器;②降解必要的、特定的长寿蛋白与细胞器， 调控细胞生长。由此可推断出， Beclin1可能具有清除肿瘤细胞、阻止肿瘤发展与出现的可能性。现有研究证实[3]， Beclin1于同一或不同肿瘤的不同时期发挥的作用也不尽相同。于前列腺癌、卵巢癌、乳腺癌细胞内， Beclin1可出现缺失现象。经动物实验表明， 敲掉Beclin1基因的小鼠， 其体内不同癌症的发生率显著大于正常小鼠， 可见Beclin1与癌症的发生存在明显的关联性， 可能为癌症发生的早期事件[4]。在本研究中， 胃癌组织内的Beclin1表达阳性率显著低于胃癌旁组织（P<0.05）， 这说明癌症的发生与Beclin1表达情况存在密切关系。

LC3为哺乳动物的一个ATG同源蛋白， 在细胞中主要分为LC3-Ⅰ与LC3-Ⅱ2种剪切方式。当出现自噬时， LC3-Ⅰ会在泛素样作用下产生水解衍生物， 即LC3-Ⅱ[5]。LC3-Ⅰ主要分布于细胞质中， LC3-Ⅱ主要是分布于自噬体膜上。当营养不足时， LC3基因会随之激活， 转录出充足的LC3前体。于自噬体膜产生期间， LC3前体在ATG4B剪切成LC3-Ⅰ[6]。LC3-Ⅰ在末端的甘氨酸作用下， 与ATG3与ATG7活性位点部位的半胱氨酸相结合产生硫脂键， 促使LC3-Ⅰ和硫脂键相结合， 从而生成LC3-Ⅱ[7]。整个反应期间， ATG3与ATG7主要起介导作用， 跟随自噬体的出现， LC3-Ⅱ开始聚集在自噬体膜上;当此期间， LC3-Ⅱ量不断增加。然后， 溶酶体与自噬体相融合， 后者随之降解， 其表面的LC3-Ⅱ于ATG4B作用下， 重新转变为LC3-Ⅰ， 以实现LC3-Ⅰ于自噬体反应过程中的循环利用[8]。LC3-Ⅱ对自噬体的产生具有重要作用， 有关文献报道表示[9]， 当把LC3-Ⅱ去除， 将会出现许多非闭合的自噬体结构。由于LC3-Ⅱ数量与自噬体数量呈现为相对应的关系， 故而临床上将其作为自噬体标志物之一。在本研究中， 胃癌组织内的LC3表达阳性率低于癌旁组织（P<0.05）， 这说明LC3与胃癌的发生有一定关系。

关于Beclin1、LC3水平的表达是否与胃癌患者的性别、年龄及肿瘤位置有一定的相关性， 临床上有关研究较少， 还需进行求证与研究。本研究中， Beclin1、LC3表达阳性患者与Beclin1、LC3表达阴性患者的年龄、性别及肿瘤位置比较， 差异无统计学意义（P>0.05）。可见Beclin1、LC3在胃癌组织内的表达水平与患者的年龄、性别、肿瘤位置无关系。有关文献报道[10]， Beclin1、LC3表达水平与癌症患者病理分级、病理分期、淋巴结转移、侵及浆膜程度、分化程度有密切关系。在本研究中， Ⅲ～Ⅳ期、浆膜层外、淋巴结转移、Ⅲ级分化患者的Beclin1、LC3表达阳性率均显著低于Ⅰ～Ⅱ期、浆膜层内、淋巴结未转移、Ⅰ～Ⅱ级分化患者， 由此可见患者病理分期越高、侵及浆膜程度越深、淋巴结轉移、分化程度越高， Beclin1、LC3的表达阳性率越低。

总之， Beclin1、LC3在胃癌组织中的表达阳性率相对较低， 且随着患者病情的发展， 该两项指标的表达阳性率会随之降低。

参考文献

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[收稿日期：2020-01-09]