茜草不同炮制品的对比研究

杨宇婷，崔春雨

(河南师范大学 国家级化学实验教学示范中心，河南 新乡 457003)

茜草有名茜根，俗名称拉拉藤、活血草、血见愁等[1]，为茜草科多年生植物茜草Rubia cordifolia L.的干燥根和根茎，在我国分布广泛，南北各地均有分布，我国共有24种10变种，以西南地区为种类最多，例如河南、山东、陕西、安徽、河北等地均大量出产，春秋两季采挖，洗净，干燥，切断。茜草性寒味苦，归肝经。既能凉血止血，又能活血祛瘀。临床上主要用其生品和茜草炭，茜草生品苦寒泄热，凉血祛瘀，通经，临床用于吐血，衄血，崩漏，外伤出血，瘀阻经闭，关节痹痛，跌扑肿痛[2]218-219。其炮制品炒炭后，味苦、涩，能增强止血作用[3]，临床用于血痢，咯血，崩漏出血，尿血等各种出血。现代化学研究茜草的化学成分多样以蒽醌及其苷类为主例如大叶茜草素、羟基茜草素、茜草素[3]等，此外还含有萘醌类、萜类、鞣质、多糖、微量元素等化学成分，对其化学成分和药理作用再进一步研究中。本文主要对茜草炮制前后化学成分的变化进行研究，为临床更好的使用茜草及炮制品提供依据。

1 实验材料

日本岛津LC10A高效液相色谱仪(自动进样器、检测器SPD-M10AYP、四元低压梯度泵、Class-VP 色谱工作站)、SG5200HPT超声波清洗器(上海冠特超声仪器有限公司)、FA2104B电子天平(上海越平科学仪器有限公司)、100-2AS电热鼓风干燥箱(上海市永光明医疗仪器厂)、752型紫外分光光度计(上海棱光技术有限公司)。

大叶茜草素对照品(批号：110884-200604 中检所)、没食子酸对照品(批号：110831-201204 中检所)碳酸钠、钨酸钠、钼酸钠、干酪素、水为分析纯水、甲醇 四氢呋喃为色谱纯(天津科密欧化学试剂有限公司)、茜草购于河南省药材公司。

2 实验方法和结果

2.1 炮制方法

茜草生品：取茜草，除去杂质，清水洗净，润透后切成3 cm段，干燥。

茜草炭：取茜草段，置热锅内，炒至表面焦黑色、内部焦褐色，喷淋少许清水，熄灭火星，取出，晾干[2]附录ⅡD.。

2.2 炮制前后大叶茜草素的含量测定

2.2.1 色谱条件

按照2015年版《中国药典》记载其色谱条件色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相为甲醇：乙腈：0.2%磷酸溶液(25∶50∶25)检测波长为250 nm，进行试验发现试验过程中，结果并不理想，保留时间太长，分离度不够，出现拖尾现象，磷酸溶液需要新鲜配制，易生微生物，操作繁琐。因此，对色谱条件进行重新筛选，经过反复试验结合查阅文献[4-5]，色谱条件确定为：色谱柱：Shim-pack VP-ODS柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)、流动相：乙腈∶水(65∶35)、流速：1 mL/min、柱温：30℃、检测波长：250 nm、进样量：10 μL。

2.2.2 标准曲线

用甲醇精密配置各浓度大叶茜草素对照品溶液，浓度分别是：0.01、0.02、0.04、0.08、0.10 mg/mL。分别吸取10 μL进样，记录相应的峰面积。分析得：a=5 ×104 b+81637，r=0.9998，大叶茜草素进样量在0.01～0.10 mg之间呈良好的线性关系，其中a代表峰面积，b代表对照品浓度，色谱图见图1。

图1 大叶茜草素对照品的HPLC色谱图Fig.1 HPLC chromatograph of mollugin

2.2.3 供试品溶液

取茜草生品及茜草炭适量粉碎，过60目筛。精密称取各样品80 mg，放置于10 mL容量瓶中，加入8 mL甲醇，超声波提取1 h，取出放冷、用甲醇定容至10 mL，提取液用0.45 μm微孔滤膜过滤，即得供试品溶液。

2.2.4 精密度考察

取0.04 mg/mL大叶茜草素对照品溶液，在2.2.1条件下，连续进样5次，每次10 μL，进行测定，分析结果大叶茜草素峰面积积分值的RSD为0.26%，表明仪器的精密度良好。

2.2.5 重现性考察

取茜草生品样品5份，按2.2.3方法制备成供试溶液，在2.2.1条件下，进行测定，分析结果大叶茜草素峰面积的RSD为1.3%，表明重现性良好。

2.2.6 稳定性考察

取茜草生品室温下放置，分别于0、2、4、6、8和10 h，按上述方法进行测定，分析结果大叶茜草素峰面积的RSD为0.5%，表明样品溶液在10 h内稳定。

2.2.7 加样回收率考察

精密称取已知含量的茜草生品9份，每份40.0 mg，随机分为3组，每组分别准确加入大叶茜草素对照品，加入量分别为样品中答应我茜草素含量的80%，100%、120%。 按2.2.3方法制备成供试品溶液， 按2.2.1色谱条件下，进行测定，计算回收率，测得大叶茜草素的加样回收率在97.90%，RSD为1.4%(n=9)。

2.2.8 样品含量测定

取茜草生品及茜草炭样品，按上述方法制备成供试溶液，按上述色谱条件进行测定，吸取供试品溶液10 μL进行测定，测定茜草生品中大叶茜草素的含量为0.53%，茜草炭中大叶茜草素的含量为0.35%。色谱图见图2、3。

图2 茜草生品中大叶茜草素的含量Fig.2 Chromatograph of obtained from Rubia cordifolia L

图3 茜草炭中大叶茜草素的含量Fig.3 Chromatograph of obtained from Rubia cordifolia L carbon

2.3 炮制前后鞣质含量测定[2]附录ⅩB

2.3.1 标准曲线

按照2015年版《中国药典》方法建立准曲线：以吸光度a为纵坐标，浓度b为横坐标，绘制标准曲线。a=4.015b-0.0582，r=0.9982。

2.3.2 供试品溶液的制备

取茜草生品及茜草炭粉末，精密2 g，置250 mL棕色量瓶中，加水150 mL，超声处理1 h放冷，用水定容至250 mL，摇匀，静置，滤过，弃去初滤液50 mL，精密量取续滤液20 mL，置100 mL棕色量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即得。

2.3.3 样品测定

精密量取各种供试品溶液2 mL，置25 mL棕色量瓶中。按照2010年版《中国药典》方法测定各供试品中总酚量及不被吸附的多酚量，计算各供试品中鞣质的含量：茜草生品中鞣质的含量为：0.16%、茜草炭中鞣质的含量为：0.33%。

3 结论

茜草始载于《神农本草经》，2015年版《中国药典》收录其根、根茎。茜草根及根茎长期以来作为天然染料和止血药使用，其药理活性和活血成分进行了系统分析。本文采用HPLC法及紫外-分光光度法测定茜草生品及茜草炭中大叶茜草素和鞣质的含量。其中茜草炭中大叶茜草素的含量及茜草生品降低，鞣质的含量明显升高。制炭过程中温度过高可能会造成大叶茜草素升华、分解造成含量降低，同时高温造成其他化学成分分解为鞣质，茜草炭中鞣质的含量明显增高。有实验表明鞣质与止血作用[6]有一定的联系，这也与茜草炭的药活性相一致。在试验过程中应注意温度的控制，做到“炒炭存性”，避免炭化。