两种主流全自动免疫组化染色系统的应用对比及各自优缺点分析

郭 霞，虞 杰，顾冬梅，杨红丽

（苏州大学附属第一医院病理科，江苏 苏州 215006）

随着21世纪医学科学的不断进步，病理学也随之发展，出现了很多新的分析手段和检测方法，然而，免疫组化染色技术作为对肿瘤确诊分型、明确来源、判断预后等方面研究提供重要支持的技术手段，其作用仍然不可替代，意义重大[1]。可靠的染色结果是准确诊断的前提，伴随各单位对免疫组化质控的重视日渐提高，2015年国际特设专家委员会对18 种常用抗体的对照组织以及它们的染色结果的判断标准做出了推荐[2]。传统的手工染色方法由于多方面的不足，已经逐渐被各种自动化染色系统所替代，全自动免疫组化染色系统稳定、精确 、高效，染色结果可靠性大大提高[3]，为后期诊断治疗提供了良好的先决条件，但由于其工作原理设计等原因，也会出现染色结果不佳的现象，目前，针对我院使用的Ventana BenchMark XT和Dako omnis两种全自动免疫组化染色系统，对其各自的优势和不足之处进行了总结和对比分析。

1 材料与方法

1.1 材料 选取本院自2017年1月—2019年6月经两位经验丰富高年资病理医师专家确诊的淋巴瘤、乳腺癌及胃肠道间质瘤组织标本各10 例进行染色。

1.2 仪器

1.2.1 Ventana BenchMark XT染色系统：该系统可自动进行脱蜡，抗原修复，免疫组化染色，苏木素复染及蓝化，可针对不同抗体的个性化需求进行独立的染色程序设置，并具有在染色过程中对每个切片位置进行独立监控及对错误故障报警的功能[4]，其特有的LCS液体封盖膜技术，对免疫组化染色过程中防止干片的湿盒起到了非常好的替代作用，该系统每次可同时进行30 张切片的免疫组化染色，所有切片染色须全部完成才能取出，再进行下一批切片染色。此外，由于不使用二甲苯，且专门针对废液中DAB等毒性较强试剂进行合理处置，因此其安全环保方面的优势也较为突出。

1.2.2 Dako omnis染色系统：该系统为密闭式全自动染色处理环境，可自动完成切片脱蜡-抗原修复-免疫组化染色-苏木素复染-蓝化的整个过程，采用加样探针抽吸试剂滴加方式进行染色，其染色混匀防干片系统采用Dynamic gap动态盖板液体混匀技术，染色过程中试剂可以18 ℃恒温保存，系统还可对染色过程进行全程监控，对错误故障以声音和不同颜色报警灯进行分类提示，为染色环境提供保障，该系统一次可分批或连续添加60 张切片进行染色，并可在染色过程中一旦有染色程序耗时短先完成的切片空出染色位置后即可立即加入新的切片进行染色，无需等待所有切片染色完成。其废液系统可将无毒与有毒废液分开单独存放，大大减轻了有毒废液处置压力[5]。

1.3 试剂 本次实验试剂采用购自DAKO公司的CD20，CD3和基因公司的CD117，ER，PR，GATA3共6 种一抗，以及Ventana BenchMark XT染色系统和Dako omnis染色系统各自配套的检测和二抗显色系统试剂。

1.4 方法 为评估不同染色系统对相同抗体及组织进行染色时的影响，本实验将抗体与组织分为两组，A组在Ventana BenchMark XT染色系统进行染色，B组在Dako omnis染色系统上进行染色，具体染色流程按照两型染色系统相应抗体的标准染色程序运行处理。

2 结果

本次实验两种染色系统均对每个抗体标记物的染色流程分别进行了独立设定，除Ventana BenchMark XT染色系统一抗由手工滴加外，其余所有抗体及试剂的滴加均通过系统激光扫码后自动执行，两个系统的染色结果对比见表1和图1。

表1 两型全自动免疫组化染色系统染色结果比较

图1 两型全自动免疫组化染色系统不同指标表达比较

3 讨论

本次实验中，两种全自动免疫组化染色系统均对染色环境控制稳定，受外界因素影响很小，染色效率较高，染色结果较好，同型号染色系统同批次染色结果较为均一，但仍存在轻微差异。

对于免疫组化染色结果的影响因素有很多，在利用全自动染色系统进行染色前，组织前期固定，切片是否平整，切片的厚薄，刀痕，皱褶，抗体质量等因素都会直接或间接对染色结果产生影响[6]。此外，不同染色系统由于其工作原理及自身特性，对染色结果的影响因素也各有不同[7]。

3.1 Ventana BenchMark XT染色系统 该系统使用了特有的LCS液体封盖膜技术，在对反应环境有所保证的同时也容易出现油膜下沉现象，导致全片组织无规则的部分或全部假阴性结果，在防止组织脱片的同时还需要防止油膜下沉，因此对载玻片的要求较高，需要使用亲水型防脱载玻片。但优势是液体封盖膜可以较好覆盖全片范围，因此在捞片时对组织在载玻片上的位置要求较低。

试剂保存温度不当易引起反应效价降低，该系统的试剂台是旋转开放式的，在整个染色过程中试剂放置环境温度与外界一致，因此使用该系统进行染色时，对实验室的温度要求较高。以25 ℃以下为宜，当使用全自动方案进行染色时，每次配置一抗不宜过多，实验结束时，应第一时间将试剂移至4℃冰箱进行保存。

虽然本系统在新开试剂滴加前系统会自动按压5 次以防瓶口空气未排空，但部分情况下由于试剂瓶质量不佳仍有可能造成染色时空滴导致染色假阴性，因此在上载新开封试剂前最好手工按压试剂瓶，确认滴加顺畅，同时，本系统通过击锤打压试剂瓶滴加抗体到组织切片上，虽然对试剂瓶的识别通过激光扫描条码完成，但在运行前自检时对试剂瓶位置细小偏差未必能够发现，染色时会导致试剂滴偏出现假阴性结果，因此，上载试剂瓶时务必安装到位无偏移再运行程序。

3.2 Dako omnis染色系统 该系统使用Dynamic（动态盖板混匀技术），染色时由动态盖板保证染色玻片处于湿盒相同环境下避免干片，因此，组织切片只需使用普通防脱粘附载玻片即可，但盖板区域外的组织易造成染色效果不佳，所以在捞片时需注意尽量将组织置于载玻片中心位置。

由于该系统的试剂存贮系统密闭且具有温控功能，在整个染色过程中，试剂均处于18 ℃环境保存，因此对实验室环境温度要求相对宽松，对试剂保质特别是维持一抗效价稳定方面表现相对较好。但仍需注意避免一次配置过多导致时间过久试剂失效。

本系统通过探针抽吸滴加抗体及试剂到组织切片上，因此，当试剂瓶内试剂不足，或有空泡时，易引起加样探针空吸，加样时空打，而且如加样探针清洁不彻底，易引起交叉污染，有时因外力导致探针偏移位置不精准，以上因素可能导致染色结果出现边缘效应，非特异性背景及假阴性结果。

此外，本次实验中，相对于ER、PR、CD3这些指标在两种染色系统间染色结果无明显差异外，也发现部分抗体在两种染色系统间染色结果有一定程度的特定差异，如CD20，在Ventana BenchMark XT染色系统的染色结果中边缘效应及非特异性背景情况稍好一些；而CD117和GATA3这两个指标则在Dako omnis染色系统中染色敏感性更佳，染色结果更清晰，导致这些差异的原因可能是部分厂家个别克隆号抗体对不同染色系统的适应性有所不同，主要考虑修复方式和二抗显色系统对其亲和力差异方面的原因[8]，也可能是因为两型染色系统的抗原修复方式和二抗显色系统敏感性的区别，由于部分检测系统其修复及二抗显色系统具超敏性，可显著放大增强抗原与抗体间的结合能力[9-10]，因此有更强的染色结果。对于这些现象，可以针对具体情况试着通过改变抗体浓度、使用增强型试剂盒及对应染色方案、改用其他修复方式或者选用其他厂家及不同克隆号一抗等方式来解决问题。