采用超高效液相色谱法测定饮料中的苯甲酸和山梨酸的研究

黄文恺

摘 要：实验采用超高效液相色谱法测定饮料中的苯甲酸、山梨酸含量，选用ZORBAX Eclipse XDB-C18色谱柱，以甲醇、0.02 mol/L乙酸铵溶液为流动相进行等度洗脱，在2 min内完成进样分析。检测发现苯甲酸和山梨酸在5、20、40 μg/ L浓度时，得出被测样品回收率为92.2%～98.2%，说明该方法具备实用价值。

关键词：超高效液相色谱法；苯甲酸；山梨酸

苯甲酸、山梨酸是食品加工业常用的食品防腐剂，过量食用含有这两种食品添加剂的食品将削弱人体对于钙、维生素的吸收效果，加重肝脏负担，甚至引发毒性反应、增加致癌率。本文采用超声与水提法提取饮料中的苯甲酸与山梨酸，运用超高效液相色谱法测定两种物质的具体含量，为食品检测提供参考价值。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

选取Agilent1200超高效液相色谱仪、KQ218超声波清洗器、600 r/min的低速离心机作为检测仪器，配备0.2μm微孔滤膜。在试剂制备上，试验称取1.54 g乙酸铵，加入纯水进行稀释溶解，定容至1 000 mL；称取适量苯甲酸、山梨酸标准品，分别加入无水乙醇配制成1 mg/mL苯甲酸标准溶液与山梨酸标准溶液，结合实际检测需要加入纯水配制成相应质量浓度的标准溶液。

1.2 色谱条件与标准曲线

在色谱条件设置上，选取ZORBAX Eclipse XDB-C18（4.6 mm×50 mm×1.8 μm）色谱柱；柱温为30℃；进样量为1 μL；流动相为甲醇和0.02 mol/L乙酸铵溶液，流速为2 mL/min；检测器为全波长扫描，检测波长为230 nm[1]。在標准曲线设置上，分别配置浓度为0.5、1、2、5、10、20 μg/L与40 μg/L的苯甲酸、山梨酸混合标准溶液，置入自动进样器1μg/L，并基于色谱条件进行检测，选取两种物质的保留时间与峰面积分别进行不同浓度的线性回归。

2 结果与分析

2.1 样品处理方法

选取碳酸饮料、乳饮料两种饮料作为待测样品，分别进行样品的前处理。在碳酸饮料处理上，取适量样品置于超声波清洗器中脱气15 min，随后称取10 g样品装入25 mL具塞试管内，加入氨水使其pH值近似中性，并加入纯水定容至25 mL，利用0.2 μm水相微孔滤膜进行混合液的过滤处理，留出滤液待测定。在乳饮料处理上，称取10 g样品置于25 mL具塞试管内，依次加入2 mL亚铁氰化钾溶液与乙酸锌溶液进行摇匀，形成蛋白质沉淀，加入纯水定容至25 mL后，以4 000 r/min离心处理10 min，提取上清液利用0.2 μm水相微孔滤膜进行过滤处理，留出滤液待测定[2]。

2.2 波长与流动相的选择

通过观察两种物质混合标准溶液的色谱图可以发现，苯甲酸、山梨酸的最大吸收波长分别为230 nm和261 nm，且两种食品添加剂均以230 nm为最佳吸收波长且基线稳定，因此选取230 nm作为检测波长，选取甲醇-水、甲醇-乙酸铵溶液-乙腈-水、乙腈-乙酸铵溶液作为流动相，进行待测样品的分离处理，当甲醇与0.02 mol/L乙酸铵溶液的配比为3∶97时，苯甲酸、山梨酸达到最佳分离效果，仅耗时2 min。

2.3 线性范围与检出限

通过观察苯甲酸、山梨酸在0.5～40 μg/L浓度范围内的标准曲线可以发现，其线性关系良好。苯甲酸的回归方程为y=1.60550x+0.489519，r值为0.999 91，检出限为0.15 mg/L；山梨酸的回归方程为y=2.78926x+ 0.179118，r值为1.000 0，检出限为0.18 mg/L。

2.4 精密度与回收率测定

选取6份饮料样品分别加入0.5 mL苯甲酸、山梨酸混合标准溶液，经由处理后实行平行测定，计算出其峰面积的相对标准偏差（RSD），得出苯甲酸、山梨酸峰面积的RSD分别为1.4%和2.1%。选取6份饮料样品进行加标回收率的测定，添加水平分别设为5、20 、40 mg/L，测得苯甲酸的平均测定值分别为4.61、19.21、39.28 mg/L，平均回收率保持在92.2%～98.2%区间内；山梨酸的平均测定值分别为4.67、19.28、39.11 mg/L，平均回收率保持在93.4%～97.8%。

3 结语

本文采用的超高效液相色谱法具有易于操作、高效率、准确度高以及灵敏度高等优势，适用于测定碳酸饮料与蛋白质含量较高的饮品，可在2 min时间内完成样品的测定分析，且其相对标准偏差均未超过5%，平均回收率保持在92.2%～98.2%，使检测效率得到大幅提升，实现对大批量饮料的有效检测。

参考文献

[1]卫星华.高效液相法同时测定饮品中8种食品添加剂[J].食品研究与开发，2017（24）：137-140.

[2]朱斐全，安小宁，黄凤君，等.加入沉淀剂对高效液相色谱法测定果汁中苯甲酸、山梨酸含量结果的影响[J].食品安全质量检测学报，2018（12）：3192-3196.