老年多原发膀胱癌靶向治疗相关靶点的实验研究

祝庆亮*，谷 江，詹德明，杨永国，马洪贵，张永春，朱 鹏，薛浩良，崇延坤，郑 翔

（1.扬州市江都人民医院泌尿外科，江苏 扬州 225200； 2.贵阳医学院附属医院泌尿外科，贵州 贵阳 550004；3.扬州市江都人民医院病理科，江苏 扬州 225200）

临床上老年多原发膀胱癌患者不断增多，靶向治疗可能成为拒绝或不能耐受手术及放化疗患者的治疗方法之一。研究表明C-erbB-2、EGFR等基因与膀胱癌发生、发展及预后密切相关[1-2]，目前以C-erbB-2为靶点的药物曲妥珠单抗、以EGFR为靶点的药物吉非替尼等肿瘤靶向药物已广泛运用于临床肿瘤的靶向治疗，C-erbB-2、EGFR靶点检测表达阳性的患者相关靶向治疗效果较好[3-4]，我们研究发现老年多原发膀胱癌中膀胱癌C-erbB-2、EGFR表达低于老年单发膀胱癌[5]，是否明显高于老年腺性膀胱炎等非肿瘤疾病，是否有靶向治疗的可行性需进一步研究。老年多原发膀胱癌是一种特殊的膀胱癌，它除膀胱癌外，还有其他恶性肿瘤（第二癌）存在，C-erbB-2、EGFR在老年多原发膀胱癌其他肿瘤（第二癌）中表达情况，也是老年多原发膀胱癌靶向治疗的重要基础。因此本研究通过测定老年多原发膀胱癌中膀胱癌及第二癌中C-erbB-2、EGFR靶点表达，比较老年多原发膀胱癌中膀胱癌组织与老年腺性膀胱炎组织中C-erbB-2、EGFR表达差异，同时观察C-erbB-2、EGFR靶点在老年多原发膀胱癌其他肿瘤（第二癌）中表达情况，为老年多原发膀胱癌靶向治疗可行性提供实验依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集我们医院1995年～2020年老年多原发膀胱癌病理石蜡切片标本21例，男性13例，女性8例，年龄60～80岁，平均69.7岁，其中膀胱癌临床分期、病理分级见表1。老年腺性膀胱炎21例，男13例，女8例，年龄60～80岁，平均69.7岁，21例正常膀胱组织患者，男13例，女8例，年龄60～80岁，平均69.7岁（正常膀胱组织的来源：（1）膀胱镜活检组织；（2）开放手术膀胱组织；（3）尸检膀胱组织）（见表1）。其中老年腺性膀胱炎患者、老年正常膀胱组织患者与老年多原发膀胱癌患者性别完全相同、年龄基本相同，差异无统计学意义（P＞0.05）。三组共63例患者（老年多原发膀胱癌包括第二癌标本）的标本，4%中性福尔马林固定，常规脱水包埋。

表1 老年多原发膀胱癌、老年腺性膀胱炎及老年正常膀胱患者资料（各21例）

1.2 试剂及方法

C-erbB-2抗体试剂（免疫组化化学法）、EGFR受体抗体试剂（免疫组化化学法）及同型对照抗体、SP免疫组化试剂盒、DAB显色试剂盒均购于均购买于福州迈新生物技术开发有限公司。检测步骤按说明书开展。每份标本作3张切片，厚度4 μm，2张分别标记C-erbB-2、EGFR抗体行C-erbB-2、EGFR免疫组化染色，1张作H.E.染色。

1.3 结果判定方法

结果判定采用图象分析系统分析，C-erbB-2、EGFR免疫标记采用测量平均光密度方法。图象分析步骤：（1）显微镜下，通过摄像头采集免疫组化切片图象，输入分析系统，进行平均光密度测量。（2）每例随机选取5个不同视场，每个视场选取4个阳性区域，分别测量平均光密度。（3）每例有20个数据，数据进行系统数据分析。

1.4 统计学方法

采用SPSS 18.0统计软件进行数据分析，采用方差分析比较C-erbB-2、EGFR的组间表达，P＜0.05有统计学意义，P＜0.001有显著统计学意义。

2 结 果

2.1 老年多原发膀胱癌、老年腺性膀胱炎及老年正常膀胱组织中C-erbB-2、EGFR免疫组化结果图(见图1～6)

2.2 老年多原发膀胱癌的第二癌（肺癌、乳腺癌、肝癌、结肠癌、前列腺癌、肾癌）EGFR免疫组化阳性染色结果图(见图1～6)

2.3 老年多原发膀胱癌、老年腺性膀胱炎及老年正常膀胱组织中C-erbB-2、EGFR表达情况（见表2）

表2 老年多原发膀胱癌、腺性膀胱炎及正常膀胱组织中C-erbB-2、EGFR表达比较（±s）

表2 老年多原发膀胱癌、腺性膀胱炎及正常膀胱组织中C-erbB-2、EGFR表达比较（±s）

注：阳性表达与平均光密度值成反比（平均光密度值越小表示阳性表达越强，越大表示阳性表达越弱）。

标本nC-erbB-2EGFR images/BZ_37_1351_1170_1373_1213.png±sP值images/BZ_37_1351_1170_1373_1213.png±sP值老年多原发膀胱癌 21 95.18±12.72 ＜ 0.05 115.58±12.66 ＜ 0.001老年腺性膀胱炎21 101.16±11.12 ＜ 0.001 124.18±11.20 ＜ 0.001老年正常膀胱组织 21 109.36±9.78 ＜ 0.001 148.86±11.68 ＜ 0.001

2.4 老年多原发膀胱癌膀胱癌及第二癌（肺癌、乳腺癌、肝癌、结肠癌、前列腺癌、肾癌）C-erbB-2、EGFR表达情况（见表3）

2.5 结果分析

21例老年多原发膀胱癌组织中C-erbB-2的平均光密度值为95.18±12.72，21例老年腺性膀胱炎组织中C-erbB-2的平均光密度值为101.16±11.12，21例老年正常膀胱组织中C-erbB-2的平均光密度值为109.36±9.78。老年多原发膀胱癌及老年腺性膀胱炎组织组织中C-erbB-2表达均高于老年正常膀胱组织，差异有统计学意义（P＜0.05）。老年多原发膀胱癌组织中C-erbB-2表达高于老年腺性膀胱炎，差异有统计学意义（P＜0.05）。

21例老年多原发膀胱癌组织中EGFR的平均光密度值为115.58±12.66，21例老年腺性膀胱炎组织中EGFR的平均光密度值为124.18±11.20，21例老年正常膀胱组织中C-erbB-2的平均光密度值为148.86±11.68。老年多原发膀胱癌、老年腺性膀胱炎中EGFR表达均高于老年正常膀胱组织，差异有统计学意义（P＜0.05）。老年多原发膀胱癌组织中EGFR表达明显高于老年腺性膀胱炎，差异有统计学意义（P＜0.05）。

表3 老年多原发膀胱癌中膀胱癌及第二癌C-erbB-2、EGFR表达情况

3 讨 论

C-erbB-2基因又名neu或HER-2基因，在许多肿瘤中高表达，与肿瘤的恶性程度和侵袭力密切相关[6]。本研究结果显示老年多原发膀胱癌中C-erbB-2表达显著高于老年正常膀胱组织，差异有统计学意义（P＜0.05），表明C-erbB-2可能在老年多原发膀胱癌的膀胱癌（第一癌）发展过程中起作用。老年腺性膀胱炎中C-erbB-2表达高于老年正常膀胱组织，差异有统计学意义（P＜0.05），可能跟部分腺性膀胱炎为癌前病变有向膀胱癌发展有关[7]，本实验结果表明C-erbB-2靶点在老年多原发膀胱癌第二癌（乳腺癌）中表达阳性可能是老年多原发膀胱癌（第二癌为乳腺癌）靶向治疗的基础，C-erbB-2靶点在老年多原发膀胱癌第二癌除乳腺癌以外均为阴性，说明老年多原发膀胱癌以C-erbB-2为靶点的靶向治疗可能效果不佳，但具体效果有待进一步研究。

EGFR是原癌基因C-erbB-1的表达产物，EGFR过度表达与肿瘤发生、发展有关，报道显示在膀胱癌非肿瘤粘膜中EGFR的表达高于正常膀胱组织[8]。目前认为EGFR是肿瘤靶向治疗的相关靶点，EGFR通路异常与肿瘤的增值、浸润、抗凋亡等有关[9]。本研究表明老年腺性膀胱炎组织中EGFR表达均明显高于老年正常膀胱组织，差异有统计学意义（P＜0.05），老年多原发膀胱癌中EGFR表达高于老年腺性膀胱炎，差异有统计学意义（P＜0.05），结果表明EGFR基因可能在老年多原发膀胱癌发展过程中起作用，本实验EGFR靶点表达在老年多原发膀胱癌第二癌（肺癌、乳腺癌、肝癌、结肠癌、前列腺癌、肾癌）为阳性，这为第二癌是肺癌、乳腺癌、肝癌、结肠癌、前列腺癌、肾癌的老年多原发膀胱癌的靶向治疗提供了治疗靶点。老年腺性膀胱炎组织中EGFR表达均明显高于老年正常膀胱组织，差异有统计学意义（P＜0.05），可能与部分腺性膀胱炎患者发展成为膀胱癌有关，说明EGFR在老年腺性膀胱炎发生、发展过程中也可能起一定作用[7,8,10]。

综上所述，本研究C-erbB-2、EGFR在老年多原发膀胱癌的第一癌（膀胱癌）中表达高于老年正常膀胱组织、老年腺性膀胱炎，差异有统计学意义（P＜0.05）及在第二癌中表达阳性，为靶向治疗老年多原发膀胱癌提供了可能。随着吉非替尼、厄洛替尼、伊马替尼等EGFR的靶向药物以及针对C-erbB-2的曲妥珠单抗等肿瘤靶向药物不断用于临床肿瘤靶向治疗[11]，相信在不远将来老年多原发膀胱癌的靶向治疗有可能得以实现。