嗣育保胎丸对溴隐亭诱导大鼠流产的影响

靳 冉，岳 枫，刘 丹，张思玉，李晋生，顾海鸥

［1.北京同仁堂股份有限公司科学研究所，北京 100079；2.中国北京同仁堂（集团） 有限责任公司，北京 100079］

随着国家二胎政策的放开，以及近年来环境、饮食及人们工作生活压力的增大，临床流产发病率呈明显上升趋势，并且呈反复发生的势态［1］，给患者的身心及家庭稳定造成了很大伤害。目前单纯西医治疗效果欠佳［2］，而中药保胎作用历史悠久［3］，是中医妇科最具特色的治疗方法之一，嗣育保胎丸为经典保胎药，临床疗效确切，但这方面的研究几乎空白。本研究利用动物早期流产模型和孕初期大鼠在体子宫肌张力测试模型，观察药物的保胎作用，并初步探讨其作用机制。

1 材料

1.1 动物 SPF 级SD 大鼠126 只，雄性，42 只，体质量260～280 g，雌性84 只，体质量240～260 g，用于建立溴隐亭流产模型；SPF 级SD 大鼠105 只，雄性，35 只，体质量320～340 g，雌性，70 只，体质量260～280 g，用于建立在体子宫平滑肌张力检测模型。以上2 批动物均购自北京维通利华实验动物技术有限公司，生产许可证号SCXK（京）2016-0006。动物饲养于SPF 级动物室内，日光灯照明，12 h明暗周期，自由饮水、饮食，温度20～26 ℃，送风6～10 次/h，相对湿度40%～70%。

1.2 试剂与药物 嗣育保胎丸（北京同仁堂股份有限公司，批号15013043）由黄芪、党参、当归、熟地黄、阿胶、桑寄生、等多种药味组成；滋肾育胎丸（广州白云山中一药业有限公司，批号W06127）；黄体酮注射液（天津金耀药业有限公司，批号1601131）；缩宫素（安徽宏业药业有限公司，批号161045）；溴隐亭（澳大利亚Novaris 公司，批号TO228Sartorious）；孕酮（P）试剂盒（北京北方生物技术研究所，批号20170720）；泌乳素（PRL）试剂盒（北京北方生物技术研究所，批号20170820）。

1.3 仪器 BT124S 电子精密天平（塞多利斯科学仪器有限公司）；生物信号采集处理系统（美国BioPac 公司）。

2 方法

2.1 构建受孕大鼠模型 SD 大鼠适应性饲养4 d 后，每日下午5：00 分批次以雌雄2∶1 合笼交配，次日上午8：00见有阴道栓者认为受孕成功［4］，作为妊娠第1 天。

2.2 分组、给药 将每次受孕成功的雌性大鼠随机分为正常对照组、模型组、黄体酮组、滋肾育胎丸组、嗣育保胎丸高、中、低剂量组，称重并做标记。妊娠第5 天开始，嗣育保胎丸高、中、低剂量组大鼠灌胃给予受试药物，给药剂量分别为7.2、3.6、1.8 g/kg；滋肾育胎丸组给药剂量为1.5 g/kg，1 次/d，连续7 d。黄体酮组大鼠隔日肌肉注射2 mg/kg，模型组和正常对照组每天给予等体积蒸馏水。灌胃给药体积均为1 mL/100 g，肌肉注射体积为0.5 mL/100 g。

2.3 构建溴隐亭诱导大鼠流产模型 84 只受孕大鼠，除正常对照组外，其余各组于妊娠第6～8 天每只大鼠皮下注射溴隐亭0.25 mg，连续3 d［5］。

2.4 测定大鼠血清P、PRL 水平 妊娠第11 天，所有动物麻醉经腹主动脉取血，1 500 r/min 离心10 min，取血清，放射免疫法测定大鼠血清P、PRL 水平。

2.5 测定大鼠流产率 84 只受孕大鼠腹主动脉取血后，仔细分离子宫，解剖观察子宫正常胚胎数和流产胚胎数，计算流产率。流产率=（流产数/着床点数）×100%。

2.6 测定缩宫素前后大鼠子宫平滑肌张力、收缩峰面积 70只受孕大鼠于妊娠第11 天，给药40 min 后注射戊巴比妥钠（60 mg/kg）麻醉，仰位固定于手术台，下腹部和腹股沟处备皮后，分离股静脉，插入静脉滞留针固定，于腹部正中作4～5 cm 长的切口打开腹腔找出子宫，在其一侧子宫角选取长3 cm 的一段，将子宫角的阴道端和卵巢端分别缝合在特制的塑料T 型支架底部的两端支点上［6-7］。打开MP-150 多导生理记录仪，调零定标，标本负荷1 g。在已固定好的子宫两支点中点处缝一棉线，从塑料管中引出，与5 g 肌张力传感器连接，静止张力1 g。待子宫收缩稳定10 min 后，记录子宫平滑肌正常收缩曲线，10 min 后各组大鼠股静脉注射缩宫素0.2 U，造成子宫收缩痉挛模型，正常对照组注射等量生理盐水后，继续观察10 min 并记录子宫活动状态。

2.7 统计学分析 采用SPSS 13.0 统计软件进行分析，计量资料以（）表示。进行方差齐性检验，方差齐采用方差分析；方差不齐采用非参数检验。以P＜0.05 表示差异有统计学意义。

3 结果

3.1 动物受孕情况 溴隐亭致大鼠流产模型实验中，模型组和嗣育保胎丸高剂量组各有1 只假阳受孕大鼠，黄体酮组有1 只假阴受孕大鼠；大鼠子宫平滑肌张力实验中，正常对照组和嗣育保胎丸高剂量组各有1 只假阳受孕大鼠，这些动物的实验数据在结果统计时均予剔除。

3.2 大鼠血清P、PRL 水平 与正常对照组比较，模型组孕鼠P 水平下降（P＜0.01）；与模型组比较，嗣育保胎丸高剂量组大鼠血清P、PRL 水平升高（P＜0.05），中剂量组大鼠血清P 升高（P＜0.05）。见表1。

表1 嗣育保胎丸对大鼠血清P、PRL 水平的影响（）

表1 嗣育保胎丸对大鼠血清P、PRL 水平的影响（）

注：与正常对照组比较，△△P＜0.01；与模型组比较，∗P＜0.05，∗∗P＜0.01。

3.3 嗣育保胎丸对大鼠流产率的影响 动物子宫解剖后发现正常妊娠组子宫呈粉红色，宫腔内未见明显的出血点，胚胎发育良好，大小均匀，胎盘附着处无瘀血，黄体呈淡黄色；流产组子宫呈暗红色，胚胎大小不一，宫腔内可见黑色的淤血点，特别是胚胎附着处，黄体颜色较正常组稍淡。与正常对照组比较，模型组孕鼠的流产率升高（P＜0.01）；灌服嗣育保胎丸后，嗣育保胎丸高、中剂量大鼠的流产率降低（P＜0.05）。见表2。

3.4 嗣育保胎丸对大鼠子宫平滑肌张力和收缩峰面积的影响 与正常对照组比较，模型组孕初期大鼠静脉注射缩宫素前后，子宫张力差值升高（P＜0.01），子宫平滑肌收缩峰面积差值增加（P＜0.01）；与模型组比较，嗣育保胎丸高、中剂量组孕初期大鼠的子宫张力差值降低（P＜0.05）。见表3。

表2 嗣育保胎丸对大鼠流产率的影响（）

表2 嗣育保胎丸对大鼠流产率的影响（）

注：与正常 对照组比较，△△P ＜0.01；与模型 组比较，∗P＜0.05，∗∗P＜0.01。

表3 嗣育保胎丸对大鼠子宫平滑肌张力和收缩峰面积的影响（）

表3 嗣育保胎丸对大鼠子宫平滑肌张力和收缩峰面积的影响（）

注：与正常对照组比较，△△P＜0.01；与模型组比较，∗P＜0.05。

4 讨论

妊娠10 周前，母体血孕激素合成和分泌主要来源于妊娠黄体［8-9］，而PRL 对调节卵巢功能，促进胎儿器官组织的发育等均有重要影响，适当的生理性高血PRL 是维持妊娠的重要因素［10］。由溴隐亭诱导的大鼠流产模型具有血清PRL、P 水平低的特点［11］。实验发现，嗣育保胎丸组大鼠的血清PRL、P 明显升高，且子宫内胚胎比较完整，流产率较模型组明显降低。由此可见嗣育保胎能够通过逆转溴隐亭对PRL、P 降低的作用，实现其保胎效果。嗣育保胎丸组大鼠流产率明显下降，妊娠成功率及胎仔数显著提高，进而达到改善黄体功能的治疗效果，提示嗣育保胎丸对于防治母胎界面的内分泌免疫紊乱、健黄体、维持正常妊娠有重要意义。

大量资料证实，孕周期间子宫出现一种规则的、低强度的收缩，其有助于子宫血液循环［12］。在妊娠早期，子宫这种生理性收缩提前出现或强度增加，都会干扰到孕囊在子宫内营养的吸收和良好的着床，从而引发孕囊与子宫脱膜层的移位剥脱，导致先兆流产的可能［13］。缩宫素即催产素，具有直接兴奋子宫平滑肌，加强其收缩的作用［14］。小剂量缩宫素加强子宫的节律性收缩，使收缩振幅加大，张力稍增加，随着剂量加大，将引起肌张力持续增高，最后可致强直性收缩。催产素对非孕子宫的作用较弱，而对妊娠子宫的作用较强［15］。本研究结果显示，初孕大鼠静脉注射缩宫素后，子宫平滑肌的收缩强度明显升高。给予嗣育保胎丸后，大鼠的子宫平滑肌收缩强度差明显降低，提示嗣育保胎丸能抑制缩宫素引起的子宫平滑肌兴奋状态，对抗子宫平滑肌的紧张作用，对早期流产具有明显的保胎作用，但其具体作用机制及作用环节尚待进一步研究。