冠心病患者外周血单核细胞中miR-125a-5p、miR-193b的表达

戴海龙，张 星，潘 云，冯晓岚，卢祥婷，光雪峰，尹小龙

（云南省心血管疾病重点，实验室昆明医科大学附属延安医院心内科，云南昆明 650051）

冠心病（coronary heart disease，CHD）指粥样硬化斑块在冠状动脉形成，导致冠状动脉的管腔狭窄或阻塞，导致心肌缺氧、缺血，从而引起的心脏病。冠心病最为重要的病理基础是动脉粥样硬化（atherosclerosis，AS），它是一种进展缓慢的非特异性的炎性疾病。巨噬细胞浸润发生在动脉粥样硬化斑块的不同过程中。巨噬细胞有着不同的分化类型，其中M1型（经典活化型），它可表达大量炎性因子，具有促炎作用[1]，M 2型（替代活化型）则表达炎症抑制因子，抑制炎症反应[2]。MicroRNAs（miRNA）是一类非编码的内源性小RNA，长度约为20-25个核苷酸，与靶基因配对结合后在转录水平调控基因表达[3]。有研究[4-6]显示单核细胞向M2型巨噬细胞分化中miR-193b表达升高；miR-125a-5p在抑制M1型巨噬细胞，促进M2型巨噬细胞中起着重要作用。笔者在冠心病患者外周血单核细胞中检测 miR-125a-5p、miR-193b水平，探讨它们与冠心病的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取昆明医科大学附属延安医院心血管内科于2018年9月至12月期间住院的冠心病患者，及排除冠心病的患者为对照组。入选标准：年龄20～75岁，经心电图、心肌标志物及冠状动脉造影或冠状动脉CT血管造影检查确诊[7]。排除标准：严重心律失常、心肌炎、心脏瓣膜病、心包疾病、脑卒中、陈旧性心肌梗死、风湿免疫疾病、甲状腺疾病、血液肿瘤疾病；肺动脉栓塞、慢性阻塞性肺疾病等肺部疾病；结核、肝炎、HIV感染；严重肝肾功能不全及使用激素患者。

最终共有102例研究对象入选，其中对照组25例（A组），稳定型心绞痛组22例（B组），不稳定型心绞痛组26例（C组），急性心肌梗死组29例（D组）。本研究通过了昆明医科大学附属延安医院伦理委员会批准，所有入选者均签署知情同意书。

1.2 血液样本采集

标本采集研究对象于入院当日或次日清晨用枸橼酸钠抗凝管采集空腹静脉血4 mL，尽快置入4℃冰箱保存待测，避免样本在室温放置超过4 h及反复冻融。

1.3 实时荧光定量PCR检测

miR-125a-5p、miR-193b含量检测采用密度梯度离心的方法分离外周血单核细胞。Trizol一步法提取总 RNA。应 用 All－in－One TM miRNAqRT－PCR Detection Kit试剂盒进行逆转录反应及实时荧光定量PCR检测。逆转录反应反应体系25μL，反应条件：37℃60 min，85 ℃5 min，4 ℃10 min。实时荧光定量PCR反应体系20μL，反应条件：95℃10 min，95 ℃10 s、61℃20 s及72℃30 s，后面这3步共40个循环。选取U6作为内参，miRNA原始表达水平由miRNA到达反应阈值的循环数表示。采用2-△△Ct计算miRNA的相对表达量。

1.4 统计学处理

2 结果

2.1 基本临床资料比较

四组间年龄、性别、合并高血压、糖尿病比例、总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、尿素氮（BUN）、肌酐（Cr）差异无统计学意义（P＞0.05）。D组天门冬氨酸氨基转移酶（AST）高于A组、B组及C组（P＜0.05），见表1。

2.2 miR-125a-5p、miR-193b在不同组别中的表达差异

miR-125a-5p在四组间表达水平分别为：A组：（1.0±0.55），B组：（0.57±0.56），C组：（0.37±0.21），D组：（0.36±0.28）。与A组比较，miR-125a-5p在B、C、D组中的表达量显著降低（P＜0.01）；与B组比较，miR-125a-5p在C、D组中的表达量显著降低（P＜0.05）；miR-125a-5p在C组和D组中，差异无统计学意义（P＞0.05）。miR-193b在四组间表达水平分别为：A组：（1.0±0.57），B组：（0.53±0.82），C组：（0.26±0.25），D组：（0.25±0.24）。与A组比较，miR-193b在B、C、D组中的表达量显著降低（P＜0.01）；与B组比较，miR-193b在C、D组中的表达量显著降低（P＜0.01）；miR-193b在C组和D组，差异无统计学意义（P＞0.05），见表2。

表1 四组间临床资料比较（）Tab.1 A comparison of basic data among the four groups（）

表1 四组间临床资料比较（）Tab.1 A comparison of basic data among the four groups（）

与A组、B组、C组比较，**P ＜0.01。

表2 miR-125a-5p、miR-193b表达水平Tab.2 Expression level of miR-125a-5p and miR-193b

3 讨论

冠心病是一种严重危害人类健康的常见病和多发病。动脉粥样硬化是冠心病最为重要的病理基础，是一种进展缓慢的非特异性炎性疾病。炎症在动脉粥样硬化斑块的形成、进展及破裂中起着重要的作用。在斑块病变进展过程中，单核细胞分化为巨噬细胞，单核细胞和巨噬细胞在动脉粥样硬化的发病机制中起关键作用，并决定动脉粥样硬化的发生、发展和稳定性[8]。巨噬细胞在动脉壁内的聚集是动脉粥样硬化斑块的一个显著特征。巨噬细胞受各种斑块微环境刺激的影响，如氧化脂质、细胞因子和衰老红细胞，从而极化为两种主要表型，即促炎M1和抗炎M2巨噬细胞。M1型巨噬细胞为经典活化巨噬细胞，产生促炎细胞因子，具有促炎作用。而活化的M2型巨噬细胞则具有抗炎作用。M1型巨噬细胞与粥样硬化斑块形成相关，是不稳定斑块的显著表型，而M2型巨噬细胞能促进斑块纤维帽生成，进而增强斑块稳定性。巨噬细胞调节可能是动脉粥样硬化治疗的有效途径[9]。

MicroRNA（miRNA）是一类内源性非编码RNA，长度为20-25个核苷酸。miRNA在转录后水平通过结合mRNA的3’非编码区（3'-UTR），促进靶基因的降解或沉默，从而调控相关基因表达[10-11]。研究[12-14]表明miRNA与心血管疾病密切相关。Hao等[15]研究发现，在人非冠状动脉粥样硬化斑块组织中的 miR-199a/b-3p、miR-155和miR-125a-5p表达水平比冠脉粥样硬化斑块组织中的表达水平高。张凤香等[16]研究显示，miR-125a-5p可以调节ACAT-1、ABCA1、SR-A1等因子表达，抑制巨噬细胞向泡沫细胞转化，具有抗动脉粥样硬化作用。有研究[4-6]显示miR-125a-5p在促进M2型巨噬细胞，抑制M1型巨噬细胞中起重要作用，miR-193b M2型巨噬细胞分化中表达升高。

本研究发现，与对照组相比，稳定型心绞痛组、不稳定型心绞痛组、急性心肌梗死组的miR-125a-5p、miR-193b表达水平降低。与稳定型心绞痛组相比，不稳定型心绞痛组、急性心肌梗死组miR-125a-5p、miR-193b表达水平降低。这提示miR-125a-5p、miR-193b与冠状动脉粥样硬化斑块的形成以及稳定性有关。而在不稳定型心绞痛与急性心肌梗死组间miR-125a-5p、miR-193b表达无差异，可能为不稳型心绞痛与急性心肌梗死有着共同的病理生理学机制，即不稳定斑块的破裂。但在病程的不同进展、不同阶段中，miR-125a-5p、miR-193b的表达是否会存在动态变化，仍有待进一步观察。

综上所述，miR-125a-5p、miR-193b可能与动脉粥样硬化的发生、发展相关，可能为动脉粥样硬化治疗的新靶点。然而，具体的作用及相关机制需进一步研究。