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HPLC法测定伤风停胶囊中欧前胡素的含量

2020-05-07

中国民族民间医药 2020年5期
关键词:伤风白芷甲醇

张 杰 何 艳

湘南学院药学院,湖南 郴州 423000

伤风停胶囊由麻黄、荆芥、白芷、苍术(炒)、陈皮和甘草组成的复方制剂,现行质量标准收载于《卫生部药品标准》中药成方制剂第十三册中,具有发散风寒之功效,用于外感风寒、头痛、鼻塞肢体酸重等症状。方中白芷具解表散寒、宣鼻通窍之功效,主治风寒表证、头痛、痹痛、鼻塞不通等症;欧前胡素是白芷中含有的主要香豆素类成分,具抗炎、抗菌、镇痛等药理作用[1-3]。《中国药典》2015年版一部收载的白芷质量标准中采用HPLC法测定欧前胡素作为评价指标[4],而伤风停胶囊现行质量标准[5]中白芷药材的质量控制仅采用薄层鉴别,无含量测定项,无法有效控制其质量。为此,本实验建立HPLC法测定伤风停胶囊中欧前胡素含量的方法,此法结果准确,重现性好,为有效控制该制剂的质量提供科学依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器 Agilent 1260高效液相色谱仪(美国Agilent公司),AUW-220D电子天平(岛津公司,感量:0.01 mg),电热恒温水浴锅(北京市永明医疗仪器有限公司),超声清洗器(昆山超声仪器有限公司)。

1.2 试药 伤风停胶囊(云南A厂家,批号:WXCC1802、WXFA1705和WXEC1805),欧前胡素对照品(中国食品药品鉴定研究院,批号:110862-201616,纯度:99.6%)。甲醇、乙腈为色谱纯,其余试剂、试药均为分析纯,水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱为Thermo Hypersil Gold-C18(4.6 mm×250 mm,5 μm);流动相为乙腈- 0.1%磷酸(50∶50),检测波长300 nm;流速1.0 mL·min-1,柱温35 ℃,进样量10 μL。在上述色谱条件下,欧前胡素与其他色谱峰分离较好,且阴性样品无干扰。结果如图1所示。

2.2 对照品溶液的制备 精密称取欧前胡素对照品适量,置100 mL量瓶中,用70%甲醇溶液定容至刻度,得欧前胡素对照品储备溶液(17.44 μg·mL-1)。

2.3 供试品溶液的制备 取伤风停胶囊样品适量,研细,取约1 g,精密称定,置锥形瓶中,精密加入70%甲醇溶液50 mL,称定重量,超声提取40 min,放冷至室温,再称定重量,用70%甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,即得。

2.4 阴性样品溶液的制备 取按处方工艺制成不含白芷的阴性样品适量,研细,按“2.3”项下方法制成缺白芷的阴性样品溶液。

2.5 线性关系考察 精密量取“2.2”项下的对照品溶液0.5、1.0、2.0、4.0、5.0、6.0 mL,分别置于10 mL容量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀,精密吸取10 μL,注入高效液相色谱仪中,按“2.1”项下色谱条件测定其峰面积,以进样质量浓度(μg·mL-1)为横坐标(X),峰面积(A)为纵坐标(Y),进行线性回归。欧前胡素在0.87~10.64 μg·mL-1范围内线性关系良好,回归方程为Y=25.762X+0.181,r=0.9999。

2.6 精密度试验 精密吸取欧前胡素对照品溶液10 μL,注入液相色谱仪中,连续进样6次,测得其峰面积并计算,欧前胡素峰面积的RSD为0.65%,结果表明仪器的精密度良好。

2.7 稳定性试验 精密吸取同一供试品(批号:WXCC1802)溶液10 μL,分别在0、2、4、6、10、18 h依次进样,测定其峰面积并计算,欧前胡素峰面积的RSD为0.70%,结果表明供试品溶液在18 h内稳定性良好。

2.8 重复性试验 精密称取同一批样品(批号:WXCC1802)6份,照“2.3”项下制备,得供试品溶液,进样10 μL依法测定峰面积,欧前胡素含量为0.1339 mg·g-1,RSD为1.14%(n=6),表明该方法重复性较好。

2.9 加样回收率试验 取已知含量的样品(批号:WXCC1802)6份,各约0.5 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,加入50 mL含欧前胡素(1.308 μg·mL-1)对照品溶液,按“2.3”项下方法,制备供试品液,进样10 μL,测定欧前胡素含量,计算回收率,结果欧前胡素平均回收率102.42%,RSD= 1.11%。结果见表1。

表1 欧前胡素加样回收率试验结果 (n=6)

2.10 含量测定 取不同批号的样品,研细,约1 g,精密称定,按“2.3”项下方法制备供试品溶液,分别吸取供试品溶液各10 μL,依法测定峰面积,计算含量。结果显示3批伤风停胶囊中欧前胡素的含量分别为0.1339 mg·g-1、0.1607 mg·g-1和0.3809 mg·g-1。

3 讨论

3.1 测定波长的选择 采用二极管阵列检测器在波长190~400 nm对欧前胡素照品溶液进行紫外扫描,其在248 nm和300 nm附近具有最大吸收峰,参考《中华人民共和国药典》2015年版一部“白芷”项下欧前胡素的检测波长[3],故本实验选用300 nm作为检测波长。

3.2 洗脱系统的选择 依据文献方法[6-7],本实验比较了甲醇-0.1%磷酸溶液、甲醇-水溶液、乙腈-0.1%磷酸溶液作为流动相,实验结果表明,采用乙腈-0.1%磷酸溶液为流动相,欧前胡素的分离效果较好,干扰成分少,分离度达到要求。

3.3 供试品制备方法的选择 本实验比较了不同溶剂(乙醇、70%乙醇、甲醇、70%甲醇)进行超声和加热回流提取,结果显示,采用70%甲醇超声提取时,欧前胡素提取率高,且干扰少;同时考察了超声提取30、40、50、60 min,试验结果表明超声提取40 min时,欧前胡素基本提取完全,故选择超声提取40 min。

3.4 含量测定结果的分析 3批伤风停胶囊样品含量测定结果表明,该制剂中欧前胡素的含量相差约3倍,其原因可能是不同批次原药材的差异所致,因此生产厂家应予以重视。

综上所述,所建立的高效液相方法简单易行,专属性好,为提高伤风停胶囊质量控制提供科学依据。

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