盆炎净胶囊中忍冬藤药材马钱苷的定性与定量分析

谭翔匀 周 和 王世俊 冯 华 王 奥

1.遵义市食品药品检验所，贵州 遵义 563002；2.遵义市产品质量检验检测院，贵州 遵义 563002

盆炎净胶囊由忍冬藤、蒲公英、狗脊、赤芍、车前草等八味中药材组成[1-2]，具有清热利湿、和血通络、调经止带之功效，用于湿热下注、白带过多等症状[2]。作为中药复方制剂具有药味较多，现有标准对忍冬藤药材只做忍冬藤对照药材定性鉴别。因此，笔者对忍冬藤药材中马钱苷成分进行定性与定量分析研究，并进行方法学考察，建立质量标准，可作为盆炎净胶囊中忍冬藤药材质量内控标准。

1 仪器与材料

1.1 仪器 美国Agilent LC-1260高效液相色谱议(包括四元泵，二极管矩阵检测器，柱温箱，自动进样器，Agilent工作站和处理软件)，WatersT3 C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)柱；AB204-S型梅特勒电子天平(北京中恒日鑫科技有限公司)，KQ-500DV型数控超声波清洗机(昆山市超声仪器有限公司)。

1.2 材料 忍冬藤对照药材、马钱苷对照品(批号：111640-201808) 购于中国食品药品检定研究院，乙睛为色谱纯，水为娃娃哈纯净水，其他试剂均为分析纯，3批盆炎净胶囊(批号：170401、170402、170403)遵义华卫制药提供，阴性样品自制。

2 方法与结果

2.1 薄层鉴别[3-4]取本品粉末约2.0 g，加乙醇15 mL，超声40 min，滤过，滤液浓缩近1 mL，作为供试品溶液。另取忍冬藤对照药材1 g，同法制成对照药材溶液，再取马钱苷对照品，加乙醇制成每1 mL含0.3 mg的溶液，作为对照品溶液。按照薄层色谱法2015年版《中国药典》四部通则0502试验，吸取上述三种溶液各10 μL，分别点于同一硅胶G板上，以乙酸乙酯-冰醋酸-水(12∶3∶5)上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，加热至斑点清晰，供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。结果表明，分离度好，斑点显色清晰，而阴性无干扰。如图1所示。

2.2 含量测定

2.2.1 色谱条件[5-9]WatersT3C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)为色谱柱，乙睛-0.5%醋酸水溶液(13∶87)为流动相，流速1.0 mL/min，检测波长为235 nm，柱温25 ℃。进样量10 μL，相连两峰分离度为达4.4，理论塔板数按马钱苷计，应不低于3000。

2.2.2 对照品溶液的制备 精密称取马钱苷照品适量，加甲醇溶解制成马钱苷18.28 μg/mL对照品溶液，摇匀，用0.45 μm的微孔滤膜滤过，即得。

2.2.3 供试品溶液制备 取内容物约2.0 g(批号：170401)，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇25 mL，超声处理50 min，取出，放冷，用甲醇补足重量，滤过，取续滤液，即得。

2.2.4 阴性溶液制备 取缺忍冬藤药材处方下自制阴性样品，按“2.2.3”项下供试品溶液制备方法制备成阴性对照溶液。精密吸取10 μL注入高效液相色谱仪，按照色谱条件下测定，结果表明阴性对照的色谱图在马钱苷相应的保留时间无干扰峰，详见色谱图2、图3、图4。

2.2.5 线性关系的考察 精密吸取对照品混合溶液2、6、10、14、18 μL，注入高效液相色谱仪，测定峰面积，以马钱苷浓度(μg)为横坐标，峰面积积分值(A)为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程，回归方程为：Y=26.864X+0.9979，R=0.9998，在3.66～32.90 mg/mL范围内呈良好的线性关系。

2.2.6 精密度试验 精密吸对照品溶液10 μL，注入高效液相色谱仪中，连续测定6次，记录峰面积，结果马钱苷峰面积的RSD为0.16%，结果表明仪器精密度良好。

2.2.7 稳定性试验 分别吸取(批号：170401)同一供试品溶液于0、2、4、8、12 h精密吸(批号：170401)样品制备的供试品溶液10 μL进样，测得峰面积，RSD均值为1.10%，表明在12 h内稳定。

2.2.8 重复性试验 取同一批样品(批号：170401)6份，精密称定，按照“2.2.3”项下方法制备成供试品溶液。测定峰面积，计算马钱苷平均含量为350.27 μg/g，RSD为1.16%，结果表明重复性好。

2.2.9 加样回收试验 取已知含量(含马钱苷350.27 μg/g)的样品6份，每份约1.0 g，精密称定，精密马钱苷对照品适量，按“2.2.3”项下的方法操作，计算回收率,马钱苷平均回收率为100.08%，RSD为0.22%，详见表1。

2.2.10 含量测定 3批样品结果详见表2。

表1 加样回收试验结果

表2 盆炎净胶囊3批样品含量测定结果 (n=3)

3 讨论

通过盆炎净胶囊中忍冬藤的研究，笔者增加忍冬藤药材中马钱苷作为对照，进行定性与定量分析。在TLC中以乙酸乙酯-冰醋酸-水(12∶3∶5)上层溶液为展开剂，展开效果好，与各斑点均能有效分离，斑点显色清晰，且阴性无干扰；采用HPLC法测定处方中忍冬藤药材有效成分马钱苷，供试品色谱中，在与对照品色谱相应保留时间阴性无干扰。

对甲醇-水、甲醇-醋酸溶液、乙睛—水、乙睛-醋酸溶液4个系统的流动相考察结果表明，乙睛-0.5%醋酸溶液梯度洗脱效果最好。同时采用DAD检测器进行紫外区全波长扫描，在2235 nm、325 nm波长下有最大吸收，根据所测目标峰在235 nm波长下检测，分离好，峰面积较大，因此选择235 nm为本实验的检测波长。

综上所述，TLC法以乙酸乙酯-冰醋酸-水(12∶3∶5)上层溶液为展开剂，各斑点能有效的分离，斑点显色清晰，阴性无干扰；HPLC法测定处方中有效成分马钱苷的含量，以乙睛-0.5%醋酸溶液(13∶87)为流动相，其马钱苷分离效果好，干扰成分少，基线平稳；样品处理简单，分析速度快，数据准确，结果可靠，可作为盆炎净胶囊中忍冬藤药材质量内控提供依据。