宁夏产区不同品种枸杞中总酚含量分析

杨春霞，李彩虹，杨静，牛艳，王晓静，王晓菁

（宁夏农产品质量标准与检测技术研究所，宁夏 银川 750002）

枸杞是茄科枸杞属的一种落叶灌木植物，是一种名贵的中药材，被国家卫生部规定为药食同源的品种，其主要具有抗肿瘤、降血压、抗衰老、降血脂，调节神经系统等多种药理活性[1]。酚类是一类含有酚羟基的植物次生代谢产物，包括酚酸、黄酮和花色苷类，具有抗氧化[2]、抗癌、抗衰老[3]等生理作用。现代药理学研究表明：枸杞具有抑菌、抗突变、清除自由基、抗氧化等药理作用主要与其酚类成分有密切关系。随着人们的保健意识和食品安全意识增强，其药理作用和营养价值越来越被人们追捧。研究者对于其总酚、酚酸化合物成分的关注度越来越高，对其生物活性及应用的研究成为热点。枸杞主要含有多糖、黄酮、苷类、类胡萝卜素、酚酸等多类化合物。目前，对枸杞的研究多集中在多糖和黄酮[4-6]，酚酸类化合物的研究较少。王晓中等[7]以绿原酸为对照品，采用亚铁氰化钾显色，比色法对宁夏中宁、惠农、农科院、新疆精河、甘肃兰州五地的枸杞总酚酸含量测定，含量在8.33%～9.24%，以中宁种植的枸杞含量最高。张自萍等用高效液相色谱法测定了宁夏枸杞中绿原酸的含量[8-9]。谭亮等[10]对青海人工及野生的红果、黄果、黑果枸杞子中5 种酚酸化合物含量进行测定。同时，对内蒙古、甘肃、新疆、宁夏的枸杞中酚酸化合物含量进行比较。刘少静等[11]对黑果枸杞中绿原酸、咖啡酸、表儿茶素和阿魏酸的含量测定，建立了反相高效液相色谱法（rerersed-phase high performance liquid chromatography，RP-HPLC） 同时测定4种酚酸的方法。本文采用福林酚法，对宁夏4 个不同产区种植的4 个品种枸杞中总酚含量测定，确定了枸杞中总酚的提取方法。比较不同产区不同品种枸杞间总酚含量的差异性，为枸杞的质量控制提供一定参考依据。

1 材料与方法

1.1 原料及试剂

1#、5#、7#、9#4 个品种枸杞，均采集于银川园林场枸杞种植基地、贺兰百瑞源枸杞基地、中宁玺赞枸杞生态庄园、中宁长山头百瑞源枸杞基地、中宁舟塔乡枸杞种植地、固原正杞红枸杞基地。不同品种夏果和秋果枸杞，在同一条件下烘干处理，冷冻粉碎，与干燥器中保存待用。

福林酚试剂（Folin-phenol）：BR，国药集团上海试剂公司；没食子酸（纯度≥98%）：北京世纪奥科生物技术有限公司；无水乙醇、无水碳酸钠（分析纯）：国药集团化学试剂有限公司；试验用水为去离子水。

1.2 仪器

722S 风光光度计：上海精密科学仪器有限公司；KQ5200DE 数控超声波清洗器：昆山市超生仪器有限公司；LD5-2A 型高速冷冻离心机：北京医用离心机厂；Mili-Q/Element 超纯水机：美国 Millipore 公司。

1.3 试验方法

1.3.1 标准溶液配制

没食子酸标准储备液配制：精确称取12.5 mg 没食子酸标准品于25 mL 棕色容量瓶中，用甲醇定容稀释至刻度，4 ℃保存待用，即浓度为0.5 mg/mL。

没食子酸标准系列浓度配制：分别吸取没食子酸标准储备液0.0、0.125、0.25、0.375、0.50、0.625、0.75、1.50、2.00、3.00、5.00 mL 置于 25 mL 棕色容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀，待用。

1.3.2 枸杞中总酚的最佳提取条件研究

准确称取一定量的枸杞样品，采用超声波辅助提取法，。以 70%乙醇作为提取剂，料液比 1∶30（g/mL），提取时间为90 min，提取液在6 500 r/min，4 ℃下离心10 min，样液待用。

1.3.3 Folin-Ciocalteu 法测定枸杞中总酚含量

分别吸取没食子酸标系列浓度1.00 mL 于25 mL刻度试管中，加入6.00 mL 去离子水，1 mL Folin-phenol试剂，摇匀，放置6 min，再各加入1.0 mol/L 的碳酸钠溶液 3 mL，摇匀，20 ℃～25 ℃下静置 60 min，用去离子水稀释至刻度，摇匀，在760 nm 处测定吸光度。取稀释至一定倍数的样品溶液1 mL 同上法测定。

1.4 数据处理

采用Origin 软件进行数据处理。

2 结果及分析

2.1 标准曲线建立

以没食子酸的浓度（x，mg/L）为横坐标，对吸光度（y）为纵坐标绘制标准曲线，见图1。

图1 没食子酸标准曲线Fig.1 The regression equation of gallic acid

结果显示：没食子酸的吸光度与浓度呈良好的线性关系（r=0.999 7），方法具有较宽的线性范围（0～100 mg/L）。

2.2 提取条件优化

2.2.1 乙醇浓度对总酚提取量的影响

乙醇浓度对枸杞中总酚提取的影响见图2。

图2 乙醇浓度对枸杞中总酚提取的影响Fig.2 Effect of ethanol concentration on extraction of total phenols from Lycium barbarum L.

由图2 可知，随着乙醇浓度的增加，总酚提取量呈先增加后降低趋势。当乙醇浓度为70%时，提取量最大，总酚含量达到了10.6 mg/g。在乙醇浓度在70%～90%间，提取量降低。试验选择浓度为70%的乙醇作为提取剂。

2.2.2 料液比对总酚提取量的影响

在其他条件一定时，考察料液比对总酚提取率的影响，结果见图3。

图3 料液比对枸杞中总酚提取的影响Fig.3 Effect of material-liquid ratio on extraction of total phenols from Lycium barbarum L.

随着溶剂体积的增大，枸杞总酚的提取量呈上升趋势，当料液比为1∶30（g/mL）时总酚提取量达到较大，之后提取量趋于稳定。试验选择1∶30（g/mL）的料液比作为最佳的提取体积。

2.2.3 提取时间对总酚提取量的影响

提取时间对总酚提取量的影响见图4。

图4 提取时间对枸杞中总酚提取的影响Fig.4 Effect of extraction time on extraction of total phenols from Lycium barbarum L.

由图4 可知，随着提取时间的增加，总酚的提取量呈先增加后减少的趋势，提取90 min 后呈下降趋势，这可能是因为提取过程中超声温度增加，多酚发生氧化的缘故。试验确定提取时间为90 min。

2.3 枸杞中总酚含量分析

对银川、贺兰百瑞源、中宁、固原枸杞种植基地的不同品种枸杞中总酚含量分析，枸杞1#、5#、7#、9#干果中总酚含量在4.53 mg/g～16.07 mg/g，其中夏果总酚含量在4.53 mg/g～14.57 mg/g，秋果总酚含量在11.60 mg/g～16.07 mg/g，秋果中总酚含量明显高于夏果，是夏果的1.1～2.6 倍。夏果枸杞中以贺兰百瑞源枸杞种植基地的5#、银川园林场枸杞种植基地的1#和5#、固原正杞红枸杞种植基地的1#总酚含量较高，分别达到11.57、10.36、14.57、9.874 mg/g。其它各地不同品种枸杞总酚含量低于7.852 mg/g。不同品种秋果枸杞中总酚含量在11.60 mg/g 以上，各品种之间总酚含量差异不明显。固原无秋果枸杞。

2.4 同一产地、不同品种枸杞中总酚含量分析

对银川园林场、贺兰百瑞源、中宁和固原枸杞种植基地主栽的 1#、5#、7#、9# 枸杞中总酚含量比较分析。

2.4.1 贺兰百瑞源枸杞种植基地不同品种枸杞间总酚含量比较分析

贺兰百瑞源枸杞种植基地不同品种枸杞间总酚含量比较分析见图5。

图5 贺兰百瑞源不同品种枸杞（夏、秋果）中总酚含量比较图Fig.5 The picture of comparison of total phenol content in different varieties of Lycium barbarum L.（summer and autumn fruit）from Helan Bairuiyuan

由图5 可知，贺兰百瑞源枸杞种植基地主栽的1#、5#、7#、9# 枸杞中夏果总酚含量顺序依次为 5#＞9#＞7#＞1#，秋果中总酚含量高低顺序为 1#＞7#＞5#＞9#，且秋果中总酚含量显著高于夏果，最高含量可达16.07 mg/g。不同品种夏果与秋果枸杞中总酚含量存在显著差异。不同品种夏果枸杞间含量差异显著，而不同品种秋果枸杞间总酚含量差异不显著；对于秋果枸杞总酚含量高于夏果，主要是因为夏果每茬成熟期短，秋果成熟周期长，一般只采摘一茬，营养成分累积充分。

2.4.2 银川园林场枸杞种植基地不同品种枸杞间总酚含量比较分析

图6 为银川园林场枸杞种植基地主栽的1#、5#、7#、9#干枸杞中夏果和秋果总酚含量比较图。

图6 银川园林场不同品种枸杞（夏、秋果）中总酚含量比较图Fig.6 The picture of comparison of total phenol content in different varieties of Lycium barbarum L.（summer and autumn fruit）from Yinchuan Garden

由图6 可知，夏果中以5#含量最高，7#含量最低，1#和9#次之，总酚最高含量为14.57mg/g，4 个品种间含量呈显著性差异。秋果中总酚含量普遍高于夏果，且4 个品种间含量无显著性差异，以7#和9#最高，分别达到15.65 mg/g 和16.07 mg/g；以5#枸杞含量最低，达到11.60 mg/g。

2.4.3 中宁枸杞种植基地不同品种枸杞间总酚含量比较分析

图7 为中宁地区（舟塔乡潘营村、鸿盛枸杞基地、玺赞生态枸杞庄园、长山头百瑞源枸杞种植基地）主栽的1#、5#、7#、9#枸杞总酚含量比较图。

图7 中宁枸杞种植基地不同品种枸杞干果（夏、秋果）中总酚含量比较图Fig.7 The picture of comparison of total phenol content in different varieties of Lycium barbarum L.（summer and autumn fruit）from Zhongning planting base

由图7 可知，夏果枸杞中以长山头百瑞源枸杞种植基地的9#和鸿盛枸杞基地种植的5#含量高，含量分别达到7.852 mg/g 和7.070 mg/g；玺赞生态枸杞庄园种植的7#含量最低，含量为4.591 mg/g；另外，舟塔乡潘营村种植的1#和长山头百瑞源枸杞种植基地的7#次之，含量分别为4.624 mg/g 和5.472 mg/g。秋果各品种总酚含量普遍高于夏果，各品种间含量高低规律与夏果一致，含量在11.60 mg/g～16.07 mg/g 之间，是夏果的 2.5 倍～2.1 倍。

2.4.4 固原正杞红枸杞种植基地不同品种枸杞间总酚含量比较分析

对固原正杞红枸杞种植基地不同品种枸杞中总酚含量分析比较，结果见图8。

图8 固原正杞红枸杞种植基地不同品种枸杞间总酚含量比较图Fig.8 The picture of comparison of total phenol content in different varieties of Lycium barbarum L.from Guyan planting base

各品种间总酚含量差异明显，含量顺序依次为1#＞7#＞5#＞9#，含量在 4.526 mg/g～9.874 mg/g 之间。该地区气温低，降雨多，无秋果。

2.4.5 同一产地、不同品种枸杞中总酚含量比较

通过各地区、不同品种枸杞间总酚含量的比较，发现1#、5#、7#以银川地区种植的含量最高，9#以中宁长山头百瑞源枸杞基地种植的含量最高，同一品种在不同地区呈现显著差异。这与当地的土壤条件、田间管理、气候因素以及成熟期有很大的关系。

3 结论

试验优化确定了枸杞中总酚提取的最佳条件，即：70%乙醇、料液比1∶30（g/mL），提取时间为 90 min。对宁夏产区的1#、5#、7#、9#枸杞中总酚含量分析比较，枸杞中总酚含量在4.53 mg/g～16.07 mg/g 之间，秋果中总酚含量明显高于夏果，是夏果的1.1～2.6 倍。同一品种在不同地区呈现显著差异，4 个品种在不同种植区总酚含量变化规律无一致性。