基因芯片技术检测结核分枝杆菌对利福平和异烟肼耐药性的研究

赵立娜

【摘 要】目的：分析并研究基因芯片技术检测结核分枝杆菌对利福平和异烟肼的耐药性。方法：本次实验共有58例患者体液样本参与实验，所有患者体液样本均是我院2018年10月至2019年10月收治的结核病患者。对所有患者体液样本进行基因芯片检测，检测患者对利福平和异烟肼的耐药性，其中基因芯片检测包括异烟肼的KatG和inhA基因位点和利福平的rpoB基因位点。结果：通过本次实验可得，58例患者体液样本中有24（41.38%）例531位点（C-T）的突变;3（5.17%）例526位点（C-G）的突变，总突变数为27（46.55%）例;58例患者体液样本中有12（20.69%）例KatG-315（G-C）的突变;5（8.62%）例InhA-15（C-T）的突变，总突变数为17（29.31%）例。结论：基因芯片技术具有敏感的利福平和异烟肼耐药性检验效果，可以快速准确的分析利福平和异烟肼的耐药性，可以在结核分枝杆菌的耐药性检验中大力推广使用。

【关键词】基因芯片技术;结核分枝杆菌;利福平;异烟肼：耐药性

【中图分类号】R521【文献标志码】A【文章编号】1005-0019（2020）07-228-01

结核分枝杆菌是一种严重危害人们身健康的病菌，但是目前结核分枝杆菌的抗药性逐渐增强，具有耐药性后会对患者的治疗有消极影响，所以如何快速、准确的分析患者结核分枝杆菌的耐药性就显得十分重要[1]。

1 资料与方法

1.1 一般资料

本次实验共有58例患者体液样本参与实验，所有患者体液样本均是我院2018年10月至2019年10月收治的结核病患者。其中共有患者58例，男性患者30例，女性患者28例;年龄分布为15-64岁，平均年龄为（39.27±12.38）岁;所使用的患者体液分别有痰液34例，伤口分泌物5例，胸泡灌洗液19例。

1.2 实验方法

本次实验中使用的仪器有：PCR扩增仪、微阵列芯片扫描仪 Lux-Scan10K-B、ExtractorTM36核酸提取仪、Hybset基因微阵列芯片杂交盒、基因芯片、离心机和离心干燥芯片的容器[2]。使用试剂有：核酸提取液、PCR扩增试剂1、PCR扩增试剂2、PCR扩增试剂3、洗液SSC和SDS、杂交缓冲液。实验具体操作：痰液和胸泡灌洗液的处理方法：准备盛有痰液和胸泡灌洗液的无菌盒，并向其中加入适量的4%NaOH溶液，使用离心机进行离心后取沉淀物，并在沉淀物中加入磷酸缓冲液0.5-1.0ml，然后对所得物进行接种和培养[3]。伤口分泌物的处理方法：准备盛有伤口分泌物的无菌盒，并向其中加入适量的4%H2SO4溶液，对所得物静置20min后进行接种和培养。将培养的细胞做基因芯片技术检测，具体操作为：取大于等于1麦氏浊度的培养液和核算提取液置于同一试管中进行5min的震荡，同时进行5min的水浴和1min的5000r/min离心。将所得样品于3个试管中，分别加入适量PCR扩增试剂1、2、3，然后进行扩增。

1.3 统计学方法

本次实验使用统计学软件SPSS 21.0进行相关的统计学数据处理。

2 结果

2.1 利福平耐药性的检测

通过本次实验可得，58例患者体液样本中有24（41.38%）例531位点（C-T）的突变;3（5.17%）例526位点（C-G）的突变，总突变数为27（46.55%）例，详见表1。

2.2 异烟肼耐药性的检测 通过本次实验可得，58例患者体液样本中有12（20.69%）例KatG-315（G-C）的突变;5（8.62%）例InhA-15（C-T）的突变，总突变数为17（29.31%）例，详见表2。

3 讨论

经常治疗结核分枝杆菌使用的药物有利福平和异烟肼，但是结核分枝杆菌容易产生利福平和异烟肼的耐药性，所以需要检测患者体内结核分枝杆菌的药物耐药性，在之前通常使用的耐药性检测方法是使用培养法为基础的绝对浓度法或比例法，但是这两种方法通常需要进行2-3个月的培养才能够得出结果，严重延误患者的用药，对患者的生命健康具有消极意义[4]。基因芯片技术是指将大量的生物信息分析按照一定的序列固定在玻璃上，然后通过使用荧光标记的靶分子和探针进行结合，这样就可以通过检测荧光强度对杂交结果进行检测。利福平的主要耐药靶分子为rpoB位点，异烟肼的主要耐药靶分子为KatG和inhA基因位点，通过对这些位点的检验可得出是否具有耐药性[5]。

通过本次实验可得，58例患者体液样本中有24（41.38%）例531位点（C-T）的突变;3（5.17%）例526位点（C-G）的突变，总突变数为27（46.55%）例;58例患者体液样本中有12（20.69%）例KatG-315（G-C）的突变;5（8.62%）例InhA-15（C-T）的突变，总突变数为17（29.31%）例。

综上所述，基因芯片技术具有敏感的利福平和异烟肼耐药性检验效果，可以快速准确的分析利福平和异烟肼的耐药性，可以在结核分枝杆菌的耐药性检验中大力推廣使用。

参考文献

[1]何进伟， 张燕飞， 汪明星， et al. 利用基因芯片检测结核分枝杆菌及其利福平耐药性的研究[J]. 辽宁医学杂志， 2017（6）：25-27.

[2]白雪娟， 刘银萍， 张俊仙， et al. 应用基因芯片直接检测结核病患者各类标本中利福平和异烟肼耐药的价值[J]. 中国防痨杂志， 2019（2）：138-144.

[3]芮冬妹， 朱珍， 樊燕. 基因芯片技术在结核分枝杆菌对利福平敏感性检测中的临床价值[J]. 海南医学， 2017， 28（22）：3714-3716.

[4]刘晓俊， 余枫华， 余云芳， et al. 宜昌地区结核分枝杆菌基因分型与成簇特征分析[J]. 中国防痨杂志， 2019（3）：308-314.

[5]王莲芝， 张晶， 李莹莹，等. 三种分子诊断技术对儿童肺结核的诊断价值[J]. 中国防痨杂志， 2019（5）：546-551.