苦瓜皂苷的急性毒性及解热抗炎作用研究

王亚军，张文煊，李宇清

(1.南阳市第一人民医院，河南 南阳 473001；2.广西中医药大学，广西 南宁 530001)

苦瓜(MomordicacharantiaL.)又名凉瓜，是我国传统的药食两用植物，具有清热祛暑、明目解毒、利尿凉血、解劳清心、益气壮阳的功效[1]，可用于治疗热病烦渴、中暑发热、痢疾等症。现代研究表明苦瓜具有改善胰岛素抵抗、调节糖脂代谢[2-3]、抗菌[4]、抗癌[5]等功效。苦瓜富含多种生物活性物质如糖苷、皂苷、黄酮类、生物碱类、三萜类、蛋白及类固醇等[6]。苦瓜苷包括总皂苷、黄酮苷等，苦瓜总皂苷即为苦瓜皂苷。苦瓜皂苷是苦瓜的药理活性成分之一[7],本课题组前期研究了苦瓜总皂苷的利尿及其对肾脏的保护作用[8]，现探求苦瓜皂苷的急性毒性及解热抗炎作用，以发掘苦瓜新的药用功效。

1 实验材料

1.1 药物及试剂 苦瓜皂苷(批号：20181212，桂林实力科技有限公司，总皂苷含量≥50%)；干酵母(批号：20181002，安琪酵母股份有限公司)； 阿司匹林肠溶片(批号：180711，江苏平光制药有限公司)；地塞米松(批号：180510，浙江仙锯制药股份有限公司)；依文思兰(批号：20180305，上海慧济生物有限公司)；二甲苯(批号：T20180825，国药集团上海化学试剂有限公司)；冰醋酸(批号：T20180913，国药集团上海化学试剂有限公司)。

1.2 动物 SPF级昆明小鼠，18～22 g，SPF级SD大鼠，体重180～220 g，均购自广西医科大学实验动物中心，许可证号：SCXK2009-0002，合格证号：0006488、0006009。

1.3 仪器 DT-100型电子天平(美国双杰兄弟有限公司)；Microlife MT-1671电子体温计(华略电子有限公司)；EL-204型电子天平(梅特勒-托利多仪器上海有限公司)；UV-1800型紫外分光光度计(日本岛津公司)。

2 实验方法

2.1 苦瓜皂苷对小鼠的急性毒性实验[9]采用改良寇氏法考察苦瓜皂苷对小鼠的半数致死量(LD50)。先用一定数量动物进行预试验，确定动物0%与100%死亡率的用药范围。取昆明小鼠50只，雌雄各半，随机分成5组，10只/组，根据预试验结果，分别在20.4～29.6 g·kg-1范围内按照1∶0.91的比例设置给药剂量，动物禁食12 h后称重，分别灌胃给予苦瓜皂苷，灌胃容量为40 mL·kg-1，灌胃后连续观察动物行为状态的改变，记录各组动物的中毒和死亡情况，计算 LD50。

2.2 苦瓜皂苷对发热大鼠体温的影响[10]取雄性SD大鼠60只，随机分为模型对照组(蒸馏水)，阳性对照组(阿司匹林 10 mg·kg-1)，苦瓜苷高(0.576 g·kg-1)、中(0.288 g·kg-1)、低(0.144 g·kg-1)3个剂量组。各组动物于实验第1天起每天禁食不禁水18 h后测定肛温1次，连续4 d，作为大鼠体温基 础值。第4天测定肛温后，立即于背部皮下注射20%酵母混悬液(10 mL·kg-1)，30 min后按照分组灌胃给药1次，于注射酵母后6 h测定大鼠肛温。

2.3 苦瓜皂苷对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响[10]取18～22 g雄性小鼠50只，随机分为模型对照组(蒸馏水)、阳性对照组(地塞米松 5 mg·kg-1)、苦瓜皂苷高、中、低3个剂量组，分别给药 0.288、0.144、0.072 g·kg-1。所有动物均灌胃给药，每天1次，连续7 d。末次药后60 min后，于右耳滴0.02 mL二甲苯致炎，左耳不涂作为空白对照。15 min后脱颈椎处死，剪下左右耳，并于双耳相同位置对称打下相同大小的耳片，电子天平称重。计算肿胀度(肿胀度=右耳片重-左耳片重)，并计算抑制率。

抑制率(%)=(模型对照组平均肿胀度-给药组平均肿胀度)/模型对照组平均肿胀度×100%

2.4 苦瓜皂苷对小鼠腹腔通透性的影响[11]小鼠分组及给药方法同“2.3”项下，末次给药60 min后，尾静脉注射0.25%依文思兰，同时腹腔注射冰醋酸，15 min后，脱颈椎处死，注入6 mL生理盐水冲洗腹腔，将腹腔洗出液于2 000 rpm离心10 min，取上清液于590 nm处测定吸光值。

3 实验结果

3.1 苦瓜皂苷对小鼠的急性毒性实验 各组小鼠灌胃后自发活动、梳理毛发活动明显减少，动物多呈俯卧状态，且多数动物有腹泻现象。服用苦瓜皂苷剂量为20.4 g·kg-1组的全部动物约在用药5 h后活动能力逐渐恢复，动物服用剂量越大，活动能力恢复所需时间越长。部分动物服用苦瓜皂苷后死亡，解剖发现胃肠充盈，且死亡率随服用剂量增加而升高。服用剂量为29.6 g·kg-1的苦瓜皂苷动物死亡率为100%，服用最低剂量20.4 g·kg-1苦瓜皂苷的动物死亡率为10%，根据改良寇氏法计算所得半数致死量(LD50)为(25.02±1.41)g·kg-1。

3.2 苦瓜皂苷对发热大鼠体温的影响 实验结果见表1。各组动物注射干酵母后6 h体温均显著高于基础值(P<0.001)。阿司匹林组动物体温升高程度显著低于模型对照组，高、中剂量的苦瓜皂苷均不能降低发热动物的体温，仅低剂量苦瓜皂苷(0.144 g·kg-1)有降低大鼠发热体温的趋势。

表1 苦瓜皂苷对发热大鼠的体温影响

注：与同组基础体温比较，*P<0.001；与模型对照组比较，#P<0.05

3.3 苦瓜皂苷对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响 实验结果见表2。连续口服苦瓜皂苷7 d，3个苦瓜皂苷组动物受二甲苯刺激引发的耳肿胀均有不同程度的减轻，尤其是高剂量(0.288 g·kg-1)对耳肿胀的抑制率达到57.51%，且与模型对照组相比有显著性差异(P<0.001)。

表2 苦瓜皂苷对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响

注：与模型对照组比较，*P<0.001

3.4 苦瓜皂苷对小鼠腹腔通透性的影响 实验结果见表3。连续口服苦瓜皂苷7 d后，苦瓜皂苷高(0.288 g·kg-1)、中剂量(0.144 g·kg-1)均能显著抑制冰醋酸刺激引起的腹腔通透性增加，减少腹腔依文思兰渗出(P<0.05)，低剂量(0.072 g·kg-1)能轻度抑制腹腔依文思兰渗出，但其作用未达显著性差异。

表3 苦瓜皂苷对小鼠腹腔通透性的影响

注：与模型对照组比较 ，#P<0.05，*P<0.001

4 讨论

苦瓜皂苷的半数致死量(LD50)为(25.02 ±1.41)g·kg-1，人日用量为0.36 g/60 kg。按照相对体表面积换算，半数致死量的人等效剂量为2.085 g·kg-1，相当于苦瓜皂苷推荐人日用量的347.5倍。根据GB15193-2003急性毒性剂量分级表，苦瓜皂苷的毒性水平为实际无毒级[12]，在一定剂量内使用是安全的。单次口服苦瓜皂苷对干酵母引起的大鼠体温升高有较弱的退热效果,且连续7 d口服苦瓜皂苷可显著抑制冰醋酸诱导的腹腔通透性亢进，并对二甲苯引起的小鼠耳肿胀有一定的抑制作用，说明苦瓜皂苷能对小鼠的急性炎症反应产生抗炎效果，与肖莹等[13]研究的苦瓜对炎症因子的调节作用相吻合。

苦瓜是我国传统的药用植物，因其毒副作用较小，它的降糖降脂功效一直被广泛地应用[14]。苦瓜皂苷是苦瓜中的有效成分之一，主要以葫芦烷型四环三萜类化合物的形式存在，具有抗肿瘤、降血糖、降血脂、抗氧化等多种生物活性[15]。有研究表明，苦瓜皂苷粗制品的得率为2.37%，且苦瓜果实的不同部分(苦瓜瓤vs苦瓜果肉)含有的总皂苷得率差异显著[16]。本次探讨了苦瓜皂苷的解热抗炎作用，还没有对苦瓜皂苷生物利用度的系统研究，但是已经有研究提示，苦瓜可以改善糖耐量，缓慢降低血糖而不会诱发低血糖[17]，并且能减少糖尿病的并发症[18]。另有苦瓜皂苷的药物代谢动力学实验[19]，通过口服苦瓜皂苷绘制的血药浓度曲线表明，苦瓜皂苷能够通过肠道吸收后进入血液循环，从而发挥其药理活性。以上研究均从侧面表明，口服苦瓜皂苷具有能够支撑其发挥药理活性的生物利用度，则下一步需继续研究苦瓜皂苷的生物利用度，以期实现较高的药用价值。总之，由于苦瓜的有效成分比较多，作用靶点多样，所以苦瓜的药理作用广泛，本研究也为以后苦瓜更多药用价值的发掘提供参考。