裂隙淋巴细胞对百日咳的诊断价值

陈奕颖,林宏昌

广东省揭阳市人民医院检验科，广东揭阳 522000

百日咳是一种具有高度传染性的急性呼吸道疾病，人群普遍易感，以婴幼儿多见，可引起长达数月的咳嗽。百日咳疫苗的广泛应用明显降低了百日咳的发病率和病死率。近年来，儿童百日咳发病率逐年升高，严重威胁儿童生命健康[1-2]。由于本院尚未开展百日咳鲍特菌培养、百日咳聚合酶链反应(PCR)及血清学检测，百日咳的确诊需要其他检验机构的协助才能完成，这不仅延长了治疗周期，也使得本院百日咳发病率被严重低估，因此，寻求简便而有效的实验室检测方法尤为重要。本文通过对80例疑似百日咳患儿的白细胞(WBC)计数、淋巴细胞百分比(LYMPH%)、裂隙淋巴细胞的阳性率进行分析，探讨外周血涂片中裂隙淋巴细胞对百日咳的诊断价值，为基层医院快速诊治百日咳提供参考。

1 资料与方法

1.1一般资料 选择本院80例疑似百日咳患儿为研究对象，其中男39例，女41例；年龄0～2岁，中位年龄3个月。按照百日咳杆菌核酸检测结果将其分为百日咳阳性组和百日咳阴性组，每组各40例。百日咳阳性组男20例，女20例；中位年龄4个月。百日咳阴性组男19例，女21例；中位年龄2个月。所有患儿均以咳嗽为主要症状入院，百日咳阳性组的患儿均符合百日咳临床诊断标准[3]。所有入选患儿均排除自身免疫功能缺陷或伴有其他系统的严重疾病。

1.2仪器与试剂 XN-2000全自动血细胞分析仪及原装进口试剂(日本希森美康公司)；光学显微镜(日本奥林巴斯公司)；EDTA-K2抗凝管(上海澳翔医疗科技有限公司)；瑞氏染液(珠海贝索生物技术有限公司)；百日咳杆菌核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)由湖南圣湘生物科技有限公司提供。

1.3方法 所有患儿的血常规采用XN-2000全自动血细胞分析仪进行检测；由血液组专家进行外周血WBC形态学检查，所有血涂片经瑞氏染色后，在光学显微镜下观察WBC形态，并计算出裂隙淋巴细胞所占的比例；同时采集患儿的鼻咽拭子置于含采样液的无菌管中，于4 ℃保存即日送检。血常规检测和外周血WBC形态学检查均在本院完成，百日咳杆菌核酸检测由广州市金域医学检验中心完成。所有操作均严格按照标准操作规程进行。

1.4观察指标 分析两组患儿WBC计数、LYMPH%、裂隙淋巴细胞阳性率的差异，同时比较各指标对百日咳诊断的特异度和灵敏度。阳性判定标准：WBC计数≥12×109/L， LYMPH%≥50%；外周血涂片中出现裂隙淋巴细胞则判定为阳性。

1.5统计学处理 采用SPSS22.0软件进行数据处理和分析。计数资料以百分数表示，组间比较采用χ2检验。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1两组患儿WBC计数、LYMPH%、裂隙淋巴细胞阳性率的比较 百日咳阳性组WBC计数、LYMPH%、裂隙淋巴细胞阳性率明显高于百日咳阴性组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 两组患儿WBC计数、LYMPH%、裂隙淋巴细胞阳性率的比较[n(%)]

2.2血涂片 所有研究对象中有22例患儿的血涂片中见到数量不等(3%～20%)的裂隙淋巴细胞。细胞体积较小，细胞质较少，呈蓝色或浅蓝色透亮状，细胞核染色质聚集呈深紫色，核上有明显的裂隙，裂隙贯穿整个细胞，呈现双核样或不对称的双核样。见图1。

图1 光学显微镜下的裂隙淋巴细胞

2.3不同指标对百日咳诊断的特异度和灵敏度比较 WBC计数、LYMPH%、裂隙淋巴细胞诊断百日咳的特异度分别为72.5%、32.5%、97.5%，裂隙淋巴细胞的特异度最高，差异有统计学意义(P<0.05)；裂隙淋巴细胞诊断百日咳的灵敏度为52.5%，与WBC计数(87.5%)、LYMPH%的灵敏度(87.5%)比较，差异有统计学意义(P<0.05)；WBC计数和LYMPH%诊断百日咳的灵敏度差异无统计学意义(P>0.05)。

3 讨 论

百日咳是一种由百日咳杆菌感染引起的呼吸道传染性疾病。近年来，百日咳发病率有升高趋势，引起了医学界的关注[4-5]。随着百日咳疫苗的应用，百日咳患儿的临床表现并不典型[6-7]，基层医院病原学检测方法尚不完善，给百日咳的早期诊断和治疗带来困难，延误治疗会造成部分患儿出现严重并发症，给患儿家庭、经济及生活带来较大影响。

细菌培养是确诊百日咳的“金标准”，其特异度高但灵敏度低，周期长，且易受抗菌药物、免疫接种、标本采集时间等诸多因素的影响[8]。血清学检查需要收集急性期和恢复期的双份血清进行检测，对于临床表现不典型，疾病分期不明显的患儿容易造成漏诊。而PCR方法灵敏度和特异度较高[9]，但在基层医院难以开展。因此，快捷、简便的实验室检测方法是基层医院实现早期诊治百日咳的迫切需求。本研究结果显示，百日咳阳性组患儿的WBC计数、LYMPH%阳性率较高，与既往研究基本一致[7-8,10]。这与百日咳杆菌产生的百日咳毒素(PT)相关。PT是百日咳致病的主要毒力因子，具有促进WBC及淋巴细胞增殖的生物效应[11]。且重症百日咳患儿将出现严重的WBC增多症和淋巴细胞增多，出现呼吸困难或呼吸衰竭[12]。目前淋巴细胞增多仍是临床医生诊断百日咳的重要依据，但特异度低。

近年来，有学者在百日咳患儿外周血中发现细胞质缺乏、染色质凝集、有裂隙的成熟小淋巴细胞——裂隙淋巴细胞。有研究报道，外周血涂片中找到裂隙淋巴细胞可能是简单、快速诊断百日咳的方法[13-14]。笔者在22例患儿的血涂片中见到数量不等(3%～20%)的特殊细胞，该种细胞体积较小，细胞质较少，呈蓝色或浅蓝色透亮状，细胞核染色质聚集呈深紫色，核上有明显的裂隙，裂隙贯穿整个细胞，呈现双核样或不对称的双核样，这与上述研究描述的细胞形态一致，证实该细胞为裂隙淋巴细胞。北京儿科研究所的课题提示，裂隙淋巴细胞由PT诱导产生，提示裂隙细胞可能成为百日咳特异性诊断指标，但还需进一步研究明确[15]。本研究中，裂隙淋巴细胞阳性的22例患儿中有21例确诊百日咳感染，特异度为97.5%， 这再次证明裂隙淋巴细胞的出现与百日咳感染有关，说明外周血涂片中出现裂隙淋巴细胞提示百日咳感染的可能，裂隙淋巴细胞可作为诊断百日咳的特异性指标。百日咳感染和裂隙淋巴细胞的数量是否存在相关性也需进一步扩大研究。

临床上疑似百日咳患儿，可建议进行WBC形态学检查。血涂片中出现裂隙淋巴细胞提示百日咳感染，临床医生可通过完善百日咳的相关检查以明确诊断，有助于缩短诊疗周期，节约医疗成本，为基层医院百日咳的早期诊治提供依据。