脓毒症患者血清lncRNA IFNG⁃AS1的表达及临床意义

吴斌 梁文启 王美堂

上海长海医院急诊科（上海200082）

脓毒症是一种由感染引起的全身炎症反应综合征（systemic inflammatory response syndrome，SIRS）［1-3］。我国脓毒症的发病率高，病死率也高［4-5］。虽然抗生素、血管活性剂和肾透析在脓毒症治疗中的应用使疾病预后得到了极大改善，但脓毒症的病死率仍较高［6-7］。因此，在脓毒症中寻找新的有效的生物学标记物，对于提高诊断敏感性、监测疾病进展和改善预后是必要的。

研究表明，通过调控炎症相关基因的表达，多种lncRNA参与了对微生物感染的急性炎症反应［8］。而且，血清lncRNA ITSN1⁃2［9］、lncRNA NEAT1［10］和lncRNA ZFAS1［11］已被发现可作为生物学标志物用于脓毒症诊断及评估疾病严重程度和患者预后。XU等［12］报道循环lncRNA IFNG⁃AS1的表达与冠状动脉疾病患者疾病风险增加、疾病严重程度增加和炎症因子升高相关，然而IFNG⁃AS1在脓毒症中的作用尚不清楚。因此，本研究基于以往对IFNG⁃AS1相关研究，进一步探究IFNG⁃AS1在脓毒症患者血清中的表达，了解其表达的意义及相应的临床应用价值。

1 资料和方法

1.1 样本采集 本研究共采集了70例脓毒症患者和60例健康对照者（HC）的外周血并分离血清，样本均在患者入院后24 h内采集。本研究由本院研究伦理委员会批准，所有参与本研究的研究对象均签署了知情同意书。

1.2 血清RNA提取及qRT⁃PCR 血清IFNG⁃AS1的表达采用qRT⁃PCR实验进行检测。血清样品中的RNA使用Trizol LS试剂（Invitrogen）提取。逆转录反应和qPCR反应分别采用PrimeScript RT Reagent Kit试剂盒（Takara）和TB Green Fast qPCR Mix试剂盒（Takar）进行。引物序列，IFNG⁃AS1⁃F：5′⁃AAACGCTGGAGGAGAAGTCA⁃3′，IFNG⁃AS1⁃R：5′⁃GCCCCTCCAGGTCTAAATAA⁃3′；GAPDH为 内参，GAPDH⁃F：5′⁃GAGTCAACGGATTTGGTCGT⁃3′，GAPDH⁃R：5′⁃TTGATTTTGGAGGGATCTCG⁃3′。

1.3 炎性细胞因子检测 血清炎性细胞因子TNF⁃α、IL⁃1β、IL⁃6、IL⁃8和IL⁃10的浓度使用酶联免疫检测试剂盒（R&D公司）测定。

1.4 统计学方法 数据采用SPSS 20.0软件对统计分析，结果以均数±标准差表示。组间比较使用t检验，采用Spearman法进行相关性分析，P<0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 基线资料比较 脓毒症患者与健康对照者的性别、年龄和BMI差异无统计学意义（P>0.05）。脓毒症患者APACHEⅡ评分均值为（15.76±6.83）。见表1。

表1 脓毒症患者与健康对照者临床因素比较Tab.1 Comparison of clinical factors between sepsis patients and healthy controls M（P25，P75）

2.2 脓毒症患者血清IFNG⁃AS1的表达及作为诊断标志物的价值 qRT⁃PCR检测发现，脓毒症患者血清IFNG⁃AS1的表达明显高于健康对照者（图1A，P＜0.05）。ROC曲线结果表明IFNG⁃AS1的对于诊断脓毒症具有较高价值（图1B，P＜0.001）。AUC=0.780，约登指数最大为0.460，此处敏感度和特异性分别为74.3%和71.7%。因此，IFNG⁃AS1有作为诊断脓毒症的血清标志物的潜力。

图1 脓毒症患者和健康对照者血清IFNG⁃AS1表达及ROC曲线Fig.1 Serum IFNG⁃AS1 expression and ROC curve of sepsis patients and healthy controls

2.3 IFNG⁃AS1表达与APACHEⅡ评分、CRP和炎性细胞因子的相关性 相关性分析发现，IFNG⁃AS1的表达与APACHEⅡ评分显著正相关。同时，IFNG⁃AS1的表达与炎症标志物CRP及炎性细胞因子TNF⁃α、IL⁃1β、IL⁃6、IL⁃8呈正相关，而与IL⁃10呈负相关。见表2。

表2 IFNG⁃AS1表达与APACHEⅡ评分、CRP和炎性细胞因子的相关性分析Tab.2 Correlation analysis of IFNG⁃AS1 expression with APACHEⅡscore，CRP and inflammatory cytokines

2.4 IFNG⁃AS1表达对脓毒症患者预后的预测价值 70例脓毒症患者中，有49例患者生存，21例患者死亡。死亡患者的IFNG⁃AS1表达显著高于生存患者（图2A）。ROC曲线结果表明IFNG⁃AS1可以作为区分脓毒症生存患者和死亡患者的标志物（图2B，P＜0.001），AUC=0.763，约登指数最大为0.374，此处敏感性和特异性分别为90.5%和46.9%。

3 讨论

目前研究［13-18］表明，长非编码RNA参与脓毒症病理过程，包括NEAT1、ZNFX1、MALAT1等。本研究表明，脓毒症患者血清IFNG⁃AS1的表达高于对照者，并且ROC曲线分析显示IFNG⁃AS1对于诊断脓毒症的最高敏感度和特异性可高达74.3%和71.7%。笔者认为IFNG⁃AS1可作为一个很好的血清标志物在临床上用于脓毒症的诊断。

图2 脓毒症生存患者和死亡患者血清IFNG⁃AS1表达及ROC曲线Fig.2 Serum IFNG⁃AS1 expression and ROC curve of survival and death patients with sepsis

此外，本研究通过相关性分析发现，血清IFNG⁃AS1表达与APACHEⅡ评分和CRP、TNF⁃α、IL⁃1β、IL⁃6、IL⁃8呈正相关，而与而与IL⁃10呈负相关。APACHEⅡ评分为急性生理与慢性健康评分，是对疾病严重程度的评估［19］。CRP为感染性炎症标志物，TNF⁃α、IL⁃1β、IL⁃6、IL⁃8为促炎细胞因子，IL⁃10为抗炎细胞因子［20］。因此，血清IFNG⁃AS1水平可用于评估脓毒症的严重程度及机体的炎症反应状态。

在脓毒症患者中，死亡患者血清IFNG⁃AS1的水平明显高于生存患者，ROC分析显示IFNG⁃AS1表达能够区分死亡患者者和生存患者。此结果说明IFNG⁃AS1对于脓毒症患者的预后具有较好的预测价值。本研究的新颖之处在于发现了可作为脓毒症血清标志物的新基因——IFNG⁃AS1，且分析了其与临床因素的相关性。本研究仍有不足之处，未研究IFNG⁃AS1高表达的机制及其在疾病进程中的作用，这也是下一步的研究方向。

综上，在脓毒症患者中，血清IFNG⁃AS1表达升高，可作为诊断脓毒症的潜在生物学标志物；IFNG⁃AS1的表达水平与疾病严重程度、促炎细胞因子的表达以及疾病的预后相关。