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胃癌组织中程序性死亡受体-1和程序性死亡-配体1表达与临床病理特征及预后的相关性

2020-04-18林华隆虞希祥

数理医药学杂志 2020年4期
关键词:缓冲液阳性率冲洗

林华隆 虞希祥

(1.温州医科大学附属第三人民医院肿瘤内科 瑞安 325200;2.温州医科大学温州市第三临床学院介入血管外科 温州 325000 )

胃癌为临床中常见消化系统恶性肿瘤之一,随着饮食和生活习惯改变、人口老龄化,发病率成显著升高趋势。胃癌发生机制较复杂,其中基因变异、免疫功能逃逸为重要发生机制,临床中通过分析免疫因子在胃癌组织中表达情况,对判定胃癌疾病严重程度、预后有重要价值[1]。PD-1在恶性肿瘤免疫逃逸中发生有重要参与作用,PD-1是T细胞介导免疫反应中的重要抑制性免疫检查点,肿瘤细胞通过表达PD-L1,与肿瘤浸润淋巴细胞的PD-1结合,诱导淋巴细胞的凋亡,从而抵抗淋巴细胞的杀伤作用,最终造成肿瘤发生免疫逃逸。为探究PD-1和PD-L1与胃癌患者病理特征和预后相关性,现报道如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料

选取2016年2月~2018年2月我院诊治实施手术治疗胃癌患者103例临床资料行回顾性分析。纳入标准:(1)患者均行手术治疗,术后取胃癌组织、胃癌旁组织行病理检查;(2)患者临床资料均收集完成;(3)患者预后均得到随访。排除标准:(1)精神疾病、认知功能障碍患者;(2)合并其他系统恶性肿瘤患者,如肺癌、肠癌;(3)合并免疫功能障碍、血液系统疾病、内分泌系统疾病患者;(4)临床资料收集不完整患者。其中男58例,女45例;年龄45~79岁,平均(61.2±6.5)岁。

1.2 方法

所有患者均实施胃癌根治术,术中取癌病灶组织和癌旁组织行病理检查,由病理科医师对组织切片,脱腊、水处理,用过氧化氢对标本进行孵育10min,用PBS缓冲液对标本冲洗3次,将标本放入柠檬酸盐缓冲溶液,采用微波加热20min,后放置自然冷却,再次用PBS缓冲液对标本冲洗3次。在标本上滴加1:200浓度鼠抗人PD-1多克隆抗体和1∶200浓度兔抗人PD-L1多克隆抗体,在4℃恒温环境中进行孵育,用PBS缓冲液对标本进行冲洗,在标本上滴加PV-6000二抗50ul,在外温室中孵育20min,用PBS缓冲液对标本进行冲洗3次,在标本上滴加DAB显示试剂,控制显示时间为4min,室温、避光条件下,由医师在显微镜下观察标本显示情况,观察完成后用蒸馏水冲洗,用苏木精染色1min,水冲洗、返蓝,用酒精对标本进行脱水,在中性树胶封片镜下进行观察。如细胞浆或细胞膜中存在棕褐色或黄色颗粒物质为PD-1和PD-L1表达阳性[2]。

1.3 观察指标

(1)比较癌组织和癌旁组织中PD-1、PD-L1表达阳性率;(2)对患者进行1~3年随访,比较死亡和存活患者癌组织中PD-1、PD-L1表达阳性率;(3)比较不同病理分期中PD-1、PD-L1表达阳性率差异。

1.4 统计学方法

此次研究获得数据用SPSS24.0统计软件包(由美国SPSS公司提供)分析;PD-1、PD-L1表达阳性率用χ2检验。检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 胃癌组织和胃癌旁组织PD-1、PD-L1表达阳性率

癌组织PD-1和PD-L1表达阳性率显著高于癌旁组织[40.78% vs.0.00%,63.11% vs.0.97%,P<0.05],见表1。

表1 胃癌组织和胃癌旁组织PD-1、PD-L1表达阳性率[n(%)]

组别nPD-1PD-L1癌组织10342(40.78)65(63.11)癌旁组织1030(0.00)1(0.97)χ2值-52.756191.3177P值-0.00000.0000

2.2 死亡和存活患者癌组织中PD-1、PD-L1表达阳性率

103例患者术后随访1~3年,平均随访(2.1±0.3)年,死亡48例,死亡率为46.60%。死亡患者癌组织中PD-1、PD-L1表达阳性率显著高于存活患者[62.50% vs.21.82%,87.50% vs.43.64%,P<0.05],见表2。

表2 死亡和存活患者癌组织中PD-1、PD-L1表达阳性率[n(%)]

组别nPD-1PD-L1死亡患者4830(62.50)42(87.50)存活患者5512(21.82)24(43.64)χ2值-17.565613.1593P值-0.00000.0003

2.3 不同病理分期中PD-1表达阳性率

不同分化程度、不同TNM分期PD-1表达阳性率无统计学意义(P>0.05),见表3。

表3 不同病理分期中PD-1表达阳性率[n(%)]

项目n阳性χ2值P值分化程度低分化2812(42.86)中分化5520(36.36)高分化2010(50.00)0.80120.6699TNM分期I~II5119(37.25)III~IV5223(44.23)0.51880.4713

2.4 不同病理分期中PD-L1表达阳性率

不同分化程度PD-L1表达阳性率无统计学意义(P>0.05);TNM分期中III~IV期患者PD-L1表达阳性率显著高于I~II期患者[78.85% vs.29.41%,P<0.05],见表4。

表4 不同病理分期中PD-L1表达阳性率[n(%)]

项目n阳性χ2值P值分化程度低分化2817(60.71)中分化5527(49.09)高分化2012(60.00)1.32760.5149TNM分期I~II5115(29.41)III~IV5241(78.85)25.36200.0000

3 讨论

本研究结果得出,在胃癌组织中PD-1和PD-L1表达阳性率显著高于癌旁组织(P<0.05),且在死亡患者中PD-1和PD-L1表达阳性率显著高于癌旁组织(P<0.05)。证实胃癌中PD-1和PD-L1表达阳性率较高,且PD-1和PD-L1表达情况和患者预后有一定相关性。本研究结果另得出,胃癌TNM分期越高患者,PD-L1表达阳性率越高(P<0.05),进一步证实PD-L1表达阳性率和肿瘤分期、分级有重要相关性,今后临床中可通过检测PD-L1表达阳性率,对胃癌患者疾病严重程度、预后辅助进行判定。有学者在胃癌患者病理组织中同样分析PD-1和PD-L1表达情况和患者预后相关性,同样证实PD-1和PD-L1表达阳性率越高,患者肿瘤恶性程度越高,预后越差[6]。

综上所述,胃癌组织中PD-1和PD-L1表达水平较高,PD-L1表达水平和病理特征有一定相关性,PD-1和PD-L1与患者预后有一定相关性。

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