新型冠状病毒病（COVID-19）检测加拿大安大略省公共卫生局（PHO）实验室的指导文件

刘妍，张小燕，林爱芬 编译，胡迅 审校

·新型冠状病毒专栏·

新型冠状病毒病（COVID-19）检测加拿大安大略省公共卫生局（PHO）实验室的指导文件

刘妍，张小燕，林爱芬 编译，胡迅 审校

100039 北京，解放军总医院第五医学中心临床研究管理中心（刘妍）；201210 上海，生物芯片上海国家工程研究中心（张小燕）；317000 台州，浙江省台州医院生物资源中心（林爱芬）；610041 成都，四川大学华西医院生物样本库（胡迅）

本文提供了 2019 年底中国湖北省武汉市暴发的呼吸道疾病相关的新型冠状病毒病 19（COVID-19，以前称之为2019-nCoV）检测指南。COVID-19 的病原体是 SARS-CoV-2病毒。为方便交流，PHO 统一使用术语 COVID-19 来指病毒和疾病。

谁负责检测：

PHO 实验室将接受符合卫生部规定的受检对象（person under investigation，PUI）或疑似病例的样本检测 COVID-19。

那些临床表现不符合病例定义，但被临床医生评估为存在 COVID-19 风险的个体也要接受检测。PHO 目前不建议对无症状者进行 COVID-19 的常规检查。如果临床医生想进一步讨论检测的作用，可随时通过 PHO 实验室的客服中心（416-235-6556/1-877-604-4567）或下班后的紧急值班人员（416-605-3113）电话联系 PHO 微生物专家。

检测要求必须附带提供下面 6 条数据信息：

为了加快检测，自 2020 年 2 月 10 日起，不再需要 PHO 实验室预先批准对 COVID-19 的检测，前提是在专门的 PHO COVID-19 检测申请中包括以下强制性信息：

1．个人是否符合新冠病毒检测标准（是/否）

2．旅行史（国家和日期）

3．暴露史[接触了 PUI、病例或疑似病例（是/否），以及任何暴露细节]

4．临床信息（例如发烧、咳嗽、流鼻涕、肺炎），包括症状起病日期

5．样本类型

6．患者安置情况

标本采集建议：

A）未入院的患者（包括急诊室患者）

·可接受单个上呼吸道标本进行COVID-19 检测。

上呼吸道标本包括鼻拭子（NPS）或病毒性咽拭子，收集在通用转运介质（UTM）中。首选 NPS，因为根据目前可获得的资料，对于 COVID-19 检测，NPS 比咽拭子具有更高的灵敏度。

B）住院患者

对于住院患者，建议至少从两个不同的部位采集两个样本：

·上呼吸道样本：送检 UTM 中收集的 NPS 和病毒性咽拭子。

·下呼吸道标本：尽可能送检。

·痰液：如果患者咳嗽，请收集痰液。但不要诱导。

注意：自 2020 年 3 月 2 日起，将不再对申请 COVID-19 检测的标本进行呼吸道病毒多重 PCR（MRVP）检测。只有那些符合 PHO 实验室接受标准的患者才能做 MRVP 检测（如住院暴发的流行）。有关更多详细信息和接受标准，请参考另一份《呼吸道病毒检测信息表》。

COVID-19 的血清学检测目前还无法开展。

急诊检验样本（STAT）检测要求：

PHO 的实验室致力于优先检测原则，以帮助那些医疗机构在紧急情况下迅速对患者做出医护决策（急诊检验“STAT”）。

·STAT 样本必须与常规样本分开，单独运输到安大略省多伦多市 661 University Ave. 的运输和接收码头，并做好样本交接。

·STAT 样本必须放在带有明显标记的“STAT”包装中，按照加拿大生物安全标准进行处理，并按照《危险品运输条例》进行运输。

·分开运输以免因运输等因素延误检测，延误将把本应为急诊检验的样本作为常规样品进行处理。

当地公共卫生部门通知：

所有接受 COVID-19 检测的个人信息都须在当地公共卫生部门备案。

此文件 2020.03.05 印刷日起生效

样本采集和处理

样本申请

检测申请申请内容样本类型最小体积采集试剂盒 COVID-19COVID-19 病毒检测申请上呼吸道：NPSNPS 放入至少 1.0 mlUTM 中Virus Respiratory Kit #390082 COVID-19COVID-19 病毒检测申请上呼吸道：病毒咽拭子（见送检和采集说明）咽拭子放入至少1.0 mlUTM 中Virus Culture Kit #390081 COVID-19COVID-19 病毒检测申请下呼吸道（如可能尽量提供）：痰、支气管肺泡灌洗（BAL）、支气管冲洗液、胸腔积液、肺组织（见送检和采集说明）1.0 mlTuberculosis Kit #390042

送检和采集说明：

①呼吸道样本：

A）未入院的患者（包括急诊室患者）：可接受单个上呼吸道标本进行 COVID-19 检测。

上呼吸道标本包括 NPS 或病毒性咽拭子，收集在 UTM 中。首选 NPS，因为根据目前可获得的资料，对于COVID-19 检测，NPS 比咽拭子具有更高的灵敏度。

B）住院患者：对于住院患者，建议至少从两个不同的部位采集两个样本：

·上呼吸道样本：送检 UTM 中收集的 NPS 和病毒性咽拭子。

·下呼吸道标本：尽可能送检。

·痰液：如果患者咳嗽，请收集痰液。但不要诱导。

②完成 COVID-19 检测申请的所有信息

1．个人是否符合受检对象的标准（是/否）

2．旅行史（国家和日期）

3．暴露史[接触了 PUI、确诊病例或疑似病例（是/否），以及任何暴露细节]

4．临床信息（例如发烧、咳嗽、流鼻涕、肺炎），包括症状起病日期

5．样本类型

6．患者安置情况

样本转运前的准备

样本放在生物危害标记的袋子里密封，样本采集后应储存在 2 ~ 8 ℃，冰袋转运到 PHO 实验室。如果样本需要72 小时以上才能转运到检测实验室，则应先–80 ℃冻存样本，然后干冰运输。

临床样本运送到当地 PHO 实验室的包装和转运，参照《危险品运输条例》

特殊说明：

对于呼吸道样本，参考 Virus-Respiratory Kit Instruction Sheet 指示说明。

对痰、BAL、支气管冲洗液、胸腔积液、肺组织样本，参见 Tuberculosis Kit N-0042。

对病毒咽拭子样本，使用 Virus Culture Kit N0081。

申请和试剂盒订购

检测申请：需要填写完成上面概述的用于 COVID-19 检测的 6 条信息，提交者（医师）和患者信息以及检测要求。具体见 2020.03.02 更新版本申请表格。

标本容器和用品的申请：请注意，标本容器和用品仅提供给送样者，用于 PHO 测试的样本转运。见 2017.09.28更新版本申请表格。

检测频率和周转时间（TAT）

COVID-19 的检测要在多伦多 PHO 实验室进行。注意：周转时间依地理位置和距离 PHO 实验室的远近而定。

COVID-19 的检测样本在 PHO 实验室被确认。如果需要额外检测，样本要送到加拿大温尼伯的国家微生物实验室（NML）。

当前在PHO实验室的 COVID-19 检测可在 24 小时内完成（从检测开始计算）。

结果报告

来自 PHO 实验室所有的 COVID-19 最终检测结果要报告给申请检测的医生。

作为一种有公共卫生意义的疾病，所有阳性结果将被报告给当地公共卫生部门。作为临时策略，我们也将报告所有阴性结果。

检测方法

COVID-19 的检测流程使用由 PHO 和 NML 实验室以实时 RT-PCR 方法共同验证，扩增靶基因包括 RNA依赖的 RNA 聚合酶 RdRp 基因和包膜 E 基因。

对于实时 PCR 方法只检测一个靶点或有任何靶点不确定的样本，都将用 PCR 和 Sanger 法对病毒 RdRp 基因进行进一步的测序检测。

在 PHO 实验室，满足下面两个条件可确诊为 COVID-19 阳性：

1．用实时 RT-PCR 方法至少检测到病毒基因组两个靶点。

2．实时 RT-PCR 检测到一个靶基因，抑或一个乃至两个靶基因都不确定，但经测序可检测到 COVID-19 病毒。

如果符合下面几种情况，PHO 实验室的检测结果通常被认为是不明确。

1．实时 RT-PCR 只检测单个靶基因。

2．一个或两个靶点的实时 RT-PCR 结果都不确定。

3．测序检测不到 COVID-19 病毒。

如果需要，样本可送 NML 实验室进一步检测。

关于 PHO 实验室 COVID-19 检测的实时 RT-PCR 的更多细节可参阅“Diagnostic detection of COVID-19 by real-time RT-PCR”。

关于 RdRp 基因的 PCR 和测序的其他技术信息可参阅“Assays for laboratory confirmation of novel human coronavirus (hCoV-EMC) infections”。

PHO 实验室已将该检测流程修订为专用于 COVID-19 病毒检测。

COVID-19 的血清学检测目前还无法开展。

总则

COVID-19 的 PHO 检测规则（截止到 2020.02.07）

A．COVID-19 的检测

·COVID-19 的检测采用的是 PHO 实验室和 NML 实验室确定的实时 RT-PCR 方法。检测靶基因包括 RdRp基因和 E 基因。

·实时 RT-PCR 方法检测到两个靶基因则实验室报告阳性。

·实时 RT-PCR 检测到一个靶基因，或任何一个靶基因都不确定的样本，要经 PCR 扩增并用 Sanger 法对COVID-19 的 RdRp 基因进行测序来确证。

·如果需要的话，样本要送到加拿大温尼伯的 NML做进一步检测。

B．其他呼吸道病毒的检测

·如果患者符合 PHO 实验室对此检测的接受标准（如住院暴发的流行），则可以通过 MRVP 检测其他呼吸道病毒。进一步详细信息和纳入标准，请参考《呼吸道病毒测试信息表》。

*基于内部实验室数据和可获得的序列数据信息，上述病毒不会发生与 COVID-19 的交叉反应。

·如果患者符合此检测纳入标准，则要申请禽流感病毒检测。更多详细信息，请参阅《禽流感检测信息表》。

注意：如果需要，必须在实验室申请书上申请其他呼吸道病毒和禽流感的检测。

要考虑的其他检测----社区获得性肺炎病原菌的检测

肺炎/肺实质受累的患者也应筛查社区获得性肺炎的病原菌。PHO 实验室推荐做如下检查：

I．肺炎支原体/肺炎衣原体双链 PCR

·相同的鼻拭子和咽拭子样本应该送检 COVID-19。

II．军团菌检测

·军团菌 PCR：同为下呼吸道的样本（痰、BAL、支气管冲洗液、气管吸取物、肺组织）应该送检 COVID-19。

·军团菌尿抗原检测：（最少 2 ml 尿量）

说明：如果受检对象病情不断恶化或不见好转，应该重复检测 COVID-19，即使前面其他病原检测结果是阳性。

胡迅，Email：hxxhu99@163.com

2020-03-11

10.3969/j.issn.1673-713X.2020.02.007