蒲公英提取物对猪致病菌的体外抑菌作用

王 留，郭全海，王向国，夏 晴

（商丘职业技术学院，河南 商丘 476100）

蒲公英是中兽医临床常用的一种清热解毒类中药，具有抗菌消炎、清热解毒、利尿消肿等多种生物学活性，其主要的抗菌活性物质为绿原酸和咖啡酸。据报道，蒲公英对金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌、肺炎双球菌、绿脓杆菌、变形杆菌、卡他球菌、结核杆菌、流感病毒及多种皮肤真菌均有抑制作用[1]，临床上治疗奶牛乳腺炎效果良好[2-3]。本试验采用滤纸片法和分光光度法研究蒲公英提取物对常见猪致病菌的抗菌效果和最小抑菌浓度，为蒲公英提取物在养猪生产及猪病临床上的应用提供参考。试验于2019年10月在商丘职业技术学院动物疫病诊断实验室进行。

1 材料与方法

1.1 蒲公英提取物

蒲公英水提物，商丘职业技术学院动物药理实验室制备，详见参考文献[4]。临用时配制成3 g/L、6 g/L、9 g/L、12 g/L、15 g/L、18 g/L 的系列浓度应用。

1.2 试验菌株

实验用标准菌株购于中国兽医药品检查所，分别为猪链球菌3928株、猪胸膜肺炎放线杆菌268株以及多杀性巴氏杆菌388株。

1.3 培养基

胰蛋白胨大豆琼脂培养基（TSA）、胰蛋白胨大豆肉汤培养基（TSB）、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD）购于上海哈灵生物科技有限公司，按说明书配置。胎牛血清购于杭州四季青生物工程材料有限公司。

1.4 抑菌效果的测定

应用纸片扩散法测定蒲公英提取物的抑菌效果。用生理盐水将蒲公英提取物配制成3 g/L、6 g/L、9 g/L、12 g/L、15 g/L、18 g/L 系列浓度的溶液， 分别取10 mL置于灭菌培养皿中，将直径6 mm的灭菌定性滤纸片放入培养皿中浸泡过夜，取出滤纸片30℃风干备用。分别取活化培养的猪链球菌、猪胸膜肺炎放线杆菌、多杀性巴氏杆菌悬液0.1 mL均匀涂布于TSA琼脂培养基上，将药敏纸片等距放入含菌培养基表面，37℃培养24 h，用卡尺测定抑菌圈直径。以生理盐水为对照，每种细菌重复3次。抑菌效果判定标准[5]：抑菌圈直径＞20 mm为极敏、15～20 mm之间为高敏、10～14 mm之间为中敏、＜10 mm为低敏、无抑菌圈为耐药。

1.5 最低抑菌浓度的测定

应用分光光度法测定蒲公英提取物的最小抑菌浓度。将蒲公英提取物添加在TSB肉汤培养基中，分别配制成蒲公英提取物终浓度为3 g/L、6 g/L、9 g/L、12 g/L、15 g/L、18 g/L的系列TSB肉汤培养基，猪链球菌、猪胸膜肺炎放线杆菌、多杀性巴氏杆菌每种细菌分别接种一个系列的培养基，37℃培养24 h后，用分光光度计测定各试管培养物的吸光度，以添加蒲公英提取物的各种细菌接种管与空白对照试管吸光度完全相同的最低添加浓度作为蒲公英提取物对该菌的最低抑菌浓度。每种细菌设5个重复，同时设空白对照（培养基）、阳性对照（培养基+菌液）、阴性对照（培养基+蒲公英提取物）各1支试管。

2 结果与分析

2.1 蒲公英提取物的抑菌效果

蒲公英提取物对各种猪致病菌的抑菌圈直径见表1，试验结果显示，蒲公英提取物对猪链球菌、猪胸膜肺炎放线杆菌、多杀性巴氏杆菌均有较好的抑制效果，其抑制作用有浓度依赖性，随药物浓度的增加抑菌圈的直径也随之增大，抑制效果越好。蒲公英提取物对猪链球菌的抑制效果最好，浓度12 g/L时即可达到中敏效果，浓度18 g/L时可达到高敏效果。

表1 蒲公英水提物对猪致病菌的体外抑菌效果

2.2 蒲公英提取物的最小抑菌浓度

蒲公英提取物对各种猪致病菌的最小抑菌浓度见表2，试验结果显示，蒲公英提取物对猪链球菌的抑制效果最好，最小抑菌浓度为9.3 g/L；蒲公英提取物对猪胸膜肺炎放线杆菌的抑制效果最差，最小抑菌浓度为14.6 g/L。

表2 蒲公英水提物对猪致病菌的最小抑菌浓度 g/L

3 讨论与结论

猪链球菌、猪胸膜肺炎放线杆菌、多杀性巴氏杆菌是养猪生产中常见的致病菌。猪链球菌感染能够引起猪急性败血症、脑膜脑炎及慢性的关节炎、化脓性淋巴结炎，猪胸膜肺炎放线杆菌感染猪发生以肺炎和胸膜炎为特征的接触传染性胸膜肺炎，多杀性巴氏杆菌能够使猪发生以纤维素性肺炎为特征的猪肺疫。目前，防治猪链球菌、猪胸膜肺炎放线杆菌、多杀性巴氏杆菌等致病菌感染的主要措施仍然是以饲料中添加抗生素为主，抗生素的长期应用不仅导致病原菌耐药性的出现，而且抗生素残留危及人类健康和造成环境污染。中草药作为一种绿色、环保、无公害的抗菌药物，替代抗生素应用于动物生产具有很好的应用前景。

李莉等[6]试验研究了16种中药提取物对副猪嗜血杆菌的体外抗菌活性，结果显示，黄连、黄柏、蒲公英、连翘对副猪嗜血杆菌具有较好的的抗菌效果。王定发等[7]试验发现，广西华山蒟、广西山蒟、毛脉树胡椒、海南假蒟、夏威夷假蒟等植物提取物对猪大肠杆菌和猪金黄色葡萄球菌均有较好的抑制作用。王春华等[8]研究表明，肥育猪饲料中添加蒲公英中草药合剂能够防治猪链球菌病的发生和降低猪群的发病率。邬苏晓等[9]通过体内外抗菌试验证实蒲公英对猪链球菌具有较强的体外抑菌活性，体内预防作用比治疗作用效果好。本试验通过体外研究表明，蒲公英提取物对猪链球菌、猪胸膜肺炎放线杆菌、多杀性巴氏杆菌均有较好的抑制作用，其抑菌效果有浓度依赖性，最小抑菌浓度分别为9.3 g/L、14.6 g/L、11.7 g/L。