NKX2.5基因c.63 A>G多态性与先天性心脏病关联性的荟萃分析

刘倩，裴建赢，樊文娟，易彬

(甘肃省妇幼保健院 a.科研中心，b.儿科，兰州730050)

先天性心脏病(congenital heart disease，CHD)是由心脏和/或大血管的结构异常导致心功能出现障碍的出生缺陷，每年影响数百万新生儿的健康，其中，以房间隔缺损(atrial septal defect，ASD)最为常见[1]。被称为心脏特异性同源盒的NKX2.5基因是心脏发育过程中最早表达的转录因子，贯穿于心脏发育的全过程，在心脏功能和形态的发生及发育过程中起着重要作用[2]。NKX2.5基因定位于5q3511，互补脱氧核糖核酸 (cDNA)全长1 585 bp，可编码含有324个氨基酸的蛋白质，是与DNA相应的启动子区结合的必需结构[3]。大量证据表明，NKX2.5基因c.63 A>G多态性与CHD遗传易感存在相关，但多数研究结论存在差异，无法得出确定的结论。本研究采用荟萃(meta)分析及系统评价方法探讨NKX2.5基因c.63 A>G多态性与CHD的关联性，以期通过综合分析，为临床提供可靠的实验证据。

1 资料与方法

1.1文献检索纳入与排除标准 计算机检索PubMed、Web of Science、中国知网、万方等数据库，并追查检索文献的参考文献。英文检索主题词为“NKX2.5”，“NKX2-5”，“NK2homeobox 5”，“NK2 transcription factor-related,locus 5”，“congenital heart disease”，“congenital heart defects”，“atrial septal defect”，“ventricular septal defect”,“genetic polymorphism”，“gene polymorphism”。中文检索词为“NKX2.5基因”，“先天性心脏病”，“室间隔缺损”，“房间隔缺损”，“基因多态性”;收集国内外公开发表的NKX2.5基因c.63 A>G多态性与CHD相关的文章，检索时间截止2019年5月31日。纳入标准：(1)已经公开发表的中文和英文文章；(2)评估NKX2.5基因c.63 A>G多态性与CHD发病的关联性；(3)直接或间接报告了等位基因频率和基因型分布的数据，可计算OR值和95%CI；(4)病例-对照研究，包括回顾性/巢式实验对照研究；(5)研究样本量不限制。排除标准：(1)数据缺少或不全；(2)会议摘要和综述；(3)重复发表的文献；(4)非以中文或英文刊出的文献。

1.2资料提取 制定原始信息提取表，收集内容如下：(1)第一作者；(2)发表年份；(3)研究人群的国别；(4)病例组/对照组样本量；(5)CHD具体分型；(6)GG、GA、AA基因型及等位基因频率；(7)进行Hardy-Weinberg平衡(HWE)检验结果；(8)纳入文献质量评分。

1.3文献质量评价 纳入文献的质量评价参考Newcastle-Ottawa Scale(NOS)评分标准[4]。该量表的评分范围为0～9分，当评分≥7分认为是高质量研究。筛选文献、提取数据、质量评价工作由两人独立完成，出现意见不统一时共同讨论解决或由第三人协商直至达成一致。

1.4统计学分析NKX2.5基因c.63 A>G多态性与CHD的关系以各研究合并后的OR值及其95%CI为效应指标，并对此OR值进行Z检验，判断其是否具有统计学意义。异质性检验用Q检验和I2值表示，当I2>50%或P≤0.1时结果存在异质性，使用随机效应模型；反之，使用固定效应模型分析。根据人群国别和CHD分型进行亚组分析寻找异质性来源，采用漏斗图和Egger′s检验对发表偏倚进行识别。敏感性分析采取依次排除单个文献后重新进行meta分析，估计效应大小。所有统计分析均由Stata 12.0软件完成，检验水准α=0.05。

2 结果

2.1纳入文献及特征 共检索相关文献186篇，通过阅读题目和摘要后排除重复的且与NKX2.5基因多态性及CHD无关的文献，并经仔细阅读全文最终纳入18篇文献[5-22]。纳入文献的基本特征见表1。所纳入中文文献8篇[14-21]，英文文献10篇[5-13,22]，2篇印度人群[6-7]，1篇埃及人群[22]，15篇中国人群[5,8-21]，未检索到欧洲人群相关研究。其中，关于研究NKX2.5基因c.63 A>G多态性与CHD室间隔缺损(ventricular septal defect，VSD)和房间隔缺损(ASD)相关性的文献分别有7篇[5,9,16,18,20-22]和6篇[5,15,18,20-22]。

2.2Meta分析结果 异质性检验结果(表2)表明，该meta分析中GG vs AA基因模型存在异质性(I2=57.4%，P=0.003)，同时GA vs AA基因模型(I2=63.3%，P<0.001)以及G vs A等位基因模型也存在异质性(I2=81%，P<0.001)，均使用随机效应模型进行合并分析。

进一步对纳入的所有研究进行meta分析结果(表2)表明，NKX2.5基因c.63 A>G多态性与CHD发病风险无关联(GG vs AA：OR=1.13，95%CI：0.79～1.61，POR=0.494；GA vs AA：OR=1.05，95%CI：0.75～1.49，POR=0.77；G vs A：OR=1.09，95%CI：0.88～1.35，POR=0.415)。按照国别进行亚组分析结果显示，NKX2.5基因c.63 A>G多态性与CHD易感性与中国人群(GG vs AA：OR=1.14，95%CI：0.82～1.58，POR=0.432；GA vs AA：OR=0.99，95%CI：0.71～1.37，POR=0.929；G vs A：OR=1.07，95%CI：0.90～1.29，POR=0.444)及非中国人群(GG vs AA：OR=1.28，95%CI：0.06～25.45，POR=0.873；GA vs AA：OR=1.26，95%CI：0.23～6.91，POR=0.787；G vs A：OR=1.44，95%CI：0.35～5.83，POR=0.611)均无相关性；按照先心病具体类型进行亚组分析结果显示，NKX2.5基因c.63 A>G多态性与VSD发病风险无关联(GG vs AA：OR=1.10，95%CI：0.71～1.69，POR=0.669；GA vs AA：OR=0.95，95%CI：0.73～1.23，POR=0.692；G vs A：OR=1.07，95%CI：0.79～1.46，POR=0.654)；携带有GA(GA vs AA：OR=0.41，95%CI：0.19～0.89，POR=0.024)基因型的人群ASD发病风险低于AA基因型。

注：ASD，房间隔缺损；VSD，室间隔缺损；HWE，哈迪-温伯格平衡；Y，符合哈迪-温伯格平衡；NA，文章未具体说明。

表2 NKX2.5基因c.63 A>G单核苷酸多态性与CHD相关性的分析结果

注：ASD，房间隔缺损；VSD，室间隔缺损；PQ，异质性检验中Q检验的P值；POR，OR进行Z检验的P值。

2.3发表偏倚及敏感性分析 用漏斗图(图1)和Egger′s检验来评价文献发表偏倚，3种遗传模式下的漏斗图对称性较好，Egger′s检验也证实各研究结果之间没有明显的发表偏倚(GG vs AA：t=-0.75，P=0.250；GA vs AA：t=-1.66，P=0.129；G vs A：t=-1.36，P=0.095)。敏感性分析结果表明，依次单独剔除1篇文献后，各遗传模型合并效应量无明显改变，异质性未发生改变，结果与剔除前总体趋势一致，meta分析结果稳定可靠。

注：A,GG/AA与CHD;B,GA/AA与CHD;C,G/A与CHD。

3 讨论

本研究从循证医学的角度入手，利用meta分析对研究目的、内容、类型相同但结果又存在争议的18项研究进行综合分析，结果显示NKX2.5基因c.63 A>G多态性与CHD发病风险无关联。这与以往研究结果不一致[8，18,21]。按照国别进行亚组分析显示，NKX2.5基因c.63 A>G多态性与CHD易感性与中国及非中国人群均无相关性，这与Wang等[23]的meta分析结论不同，考虑到本研究纳入的样本量大于上述文献，且纳入的中国人群研究更多，可能本研究结果更有说服力。本研究进一步按照CHD疾病分型进行亚组分析结果显示NKX2.5基因c.63 A>G多态性与ASD的发病风险相关，这与赵晓波[20]的研究结论一致，结果均显示携带有GA基因型的人群ASD发病风险低于AA基因型。

本研究发现NKX2.5基因c.63 A>G单核苷酸多态性与CHD之间无明显相关性，但与先天性房间隔缺损遗传可能存在相关性。本研究利用漏斗图和Egger′s检验显示不存在明显的发表偏倚，但是由于本研究纳入的文献仅限于中文和英文，且纳入的部分文章研究的样本量较少，可能会造成某些偏倚。不同的地域、生活环境以及膳食结构会导致基因多态性的分布频率存在差异，进而表现出遗传易感性差异，同时，缺乏环境对基因以及基因相互作用的有关数据，限制了交互作用的分析。因此，有必要在多中心、更大样本的高质量病例-对照研究中得出更可信的结论。