富血小板血浆治疗糖尿病足的作用研究

(1临沂市人民医院；2山东医学高等专科学校附属医院；3山东医学高等专科学校，山东 临沂 276003)

近年来，糖尿病足的患病率呈上升趋势，因糖尿病足溃疡患者年死亡率高达11%，而截肢患者死亡率更高达22%。目前，其治疗方案包括组织T程人工皮肤替代物法、高压氧治疗法、应用负压敷料等，但疗效不佳。有研究报道，自体富血小板血浆(Platelet-rich plasma，PRP)可促进创面修复，具有减轻创面疼痛，封闭保护创面，抑制局部细菌生长等特点。为此，本文进行了相关研究，观察其效果。

1 资料和方法

1.1一般资料 选取2018年1月—2019年12月本院收治的糖尿病足患者128例，其中男77例，女51例；年龄42～75岁，中位66岁；创面溃疡面积：2.25～58.5 cm2，平均31.24 cm2。本研究入组病例均为糖尿病史10年以上的患者，且糖尿病足迁延不愈(超过30 d不愈合)。排除标准：心肺功能障碍者；出凝血系统功能障碍者；无法完成单采PRP者；贫血患者；伤口或溃疡不足1个月的患者；对抗凝剂过敏患者；血源性感染患者。将纳入患者随机分为试验组和对照组，各64例。患者均签署知情同意书，本研究得到医院伦理委员会批准。

1.2方法 对照组应用常规清创换药，每周换药1次，每月为1疗程；试验组在常规治疗的基础上，应用自体PRP凝胶覆盖创面，每周换药1次，每月为1疗程。自体PRP的制备应用单采的办法进行，所用仪器为费森尤斯卡比血细胞分离机，所用耗材为配套耗材(批号：HIT171，有效期：20210817)。本研究应用的血小板浓度为1000×109/L，单次采集PRP量50 ml，采集当日治疗1次，剩余PRP分装冻存于-80℃超低温冰箱，使用前37℃水浴箱解冻后激活使用。凝血酶冻干粉与氯化钙按10∶1比例混合作为激活剂，与PRP按1∶10的比例混合激活血小板，形成血小板凝胶，清创后覆盖创面。应用双抗体夹心ABC-ELISA法检测其中血小板衍生生长因子AB(PDGF-AB)及转化生长因子β1(TGF-β1)水平，试剂均在有效期内，所有操作按试剂盒说明书进行。

1.3指标评价 每周换药过程中测量创面面积(测量创面最大长径和短径，计算创面面积)，用每次测量减少的面积除以入组时的创面面积，计算创面缩小率。取创面少许组织液，应用双抗体夹心ABC-ELISA法检测其中PDGF-AB及TGF-β1浓度。

1.4统计学分析 计量数据以(均数±标准差)表示，两组各时间相关指标的比较采用重复测量数据的两因素方差分析处理，P≤0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1两组创面缩小率的比较 经分析发现：两组分组效应有统计学意义(F=7.26，P<0.01)，试验组创面缩小明显优于对照组；时间效应没有统计学意义(F=2.41，P=0.057)；时间及分组没有交互效应(F=3.33，P=0.062)。见表1。

2.2两组PDGF-AB浓度的比较 经分析发现：两组分组效应有统计学意义(F=125.48，P<0.01)，试验组PDGF-AB浓度明显高于对照组；时间效应没有统计学意义(F=1.43，P=0.063)；时间及分组没有交互效应(F=4.27，P=0.059)。见表2。

2.3两组TGF-β1浓度的比较 经分析发现：两组分组效应有统计学意义(F=142.65，P<0.01)，试验组TGF-β1浓度明显高于对照组；时间效应没有统计学意义(F=2.13，P=0.073)；时间及分组没有交互效应(F=3.37，P=0.064)，见表3。

表1 治疗前后两组患者创面缩小率的比较

表2 两组治疗前后PDGF-AB浓度的比较

表3 治疗前后两组TGF-β1浓度的比较

3 讨论

糖尿病足是糖尿病患者致死、致残的主要原因之一，治疗十分困难，即使截肢手术后，另一侧下肢在5年内仍有高达50%的可能性要行截肢术。有文献报道，多种生长因子与糖尿病足的愈合有关[1]；局部生长因子受抑是糖尿病足溃疡难愈合的重要因素，而改变溃疡部位细胞因子的表达能显著促进伤口的愈合[2]。

PRP是血小板浓度高于基础水平时，从自体血液中提取血小板及血浆的浓聚物，激活后可以释放大量生长因子等促进组织修复和再生的生物活性物质。有研究显示，自体PRP移植治疗四肢难治性创面、难治性窦道创面、辅助游离植皮术修复溃疡创面等，取得较好的疗效[3-5]。国外研究也显示，PRP在治疗难愈合创面方面具有独特的疗效[6-7]。但目前只有有限的临床证据支持其在足部的应用。Li等[8]的研究提示，PRP在糖尿病感染创面体外模型中具有抗菌、抗炎和促进细胞增殖的作用。Ahmed等[9]自体血小板凝胶在清洁糖尿病溃疡愈合率和预防感染方面比局部抗菌敷料更有效。关于PRP治疗糖尿病足报道不多，且均用二步离心手工法制备PRP。本研究应用单采法制备PRP，具有如下优点：血小板浓度可调、稳定，单次采集多次使用。本研究结果显示：试验组创面缩小率、PDGF-AB及TGF-β1浓度明显高于对照组，PRP应用于糖尿病足治疗效果明显优于常规治疗。

综上所述，本研究中PRP在治疗糖尿病足时，创面局部PDGF-AB及TGF-β1浓度较对照组有明显增高，提示PRP治疗糖尿病足较常规治疗有显著疗效。但本研究样本例数较少，且随访时间也较短，远期疗效需要进一步评估，且需要多中心、大样本的研究来进一步验证PRP治疗糖尿病足的疗效。