中药皮肤洗剂不同配伍对临床耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的影响

马媛　仝景晨　王媛媛

【摘要】目的：研究皮肤洗剂中常用的黄柏、苦参、黄连、黄芩等两种配伍对临床耐甲氧西林金黄色葡萄球菌和不耐药的金黄色葡萄球菌的体外抑菌作用。方法：微量二倍稀释法测最小抑菌浓度（MIC），用平板涂布法测最小杀菌浓度（MBC）。结果：皮肤抗感染1号方剂饮片合煎剂及其颗粒剂对不耐药的金黄色葡萄球菌和临床耐甲氧西林金黄色葡萄球菌均有抑制作用;皮肤抗感染2号方剂水煎剂对不耐药的金黄色葡萄球菌和临床耐甲氧西林葡萄球菌均有抑制作用，对不耐药的金黄色葡萄球菌效果更为显著。结论：中药不同配伍对不耐药的金黄色葡萄球菌和临床耐甲氧西林金黄色葡萄球菌均存在体外抑菌作用，但对耐药性细菌和不耐性细菌影响是不一样的。

【關键词】金黄色葡萄球菌标准菌株（ATCC29213）;临床耐甲氧西林葡萄球菌;中药配伍;抑菌

金黄色葡萄球菌是常见的革兰氏阳性致病菌，它经常引起临床上的化脓性感染，也是引起医源性感染的常见病原体菌。随社会发展和人类疾病谱的改变，由创伤引起的皮肤感染和溃疡当中的一些细菌对阿莫西林的耐药率高达100%，耐药率从高到低依次为青霉素.链霉素等抗生素。检测新生儿皮肤上的金黄色葡萄球菌发现其对头孢唑林、阿莫西林等具有较好的抗菌性。然而，在我国源远流长的中药史中，发现中草药对临床上的一些细菌性疾病有比较好的治疗作用，同时中药配方也可减慢细菌耐药性产生，这对治疗细菌性疾病有重要的意义。经查阅文献并访问临床大夫发现黄柏、苦参、公英、地丁、野菊花配伍在临床外用治疗临床耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的引起的皮肤感染效果较强，黄连、黄芩、苦参、板蓝根配伍不耐药的金黄色葡萄球菌和效果不一样。

1实验材料

1.1菌株：普通不带耐药性的金黄色葡萄球菌菌株ATCC 29213（简称金葡），临床耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（简称金临），陕西中医药大学第一附属医院检验科，通过分离培养按照《全国临床检验操作规程》第四版进行，选用法国梅里埃公司VITEK～2 Compact全自动微生物分析系统进行菌种鉴定。

1.2皮肤抗感染1号方剂：黄柏，苦参，公英，地丁，野菊花。

皮肤抗感染2号方剂：黄连，黄芩，苦参，板蓝根。

1.3培养基：营养肉汤培养基，MH培养基。

1.4器材：生物安全柜：BBS-SDC型，济南鑫贝西生物技术有限公司、摇床：TS-100C型，上海天呈实验仪器制造有限公司、酶标仪：RT～2100C型，深圳市电子有限公司、分光光度计：723型，上海光谱仪器有限公司、恒温培养箱：LRH-250A，广东省医疗器械厂、超净工作台、无菌96孔聚乙烯U形微量板、KDC-40低速离心机，科大创新股份有限公司中佳分公司、手提式压力蒸汽灭菌器：YX～型，江阴滨江医疗设备有限公司、移液枪及枪头、培养皿、接种环、酒精灯、电药锅、量筒、烧杯、玻璃棒、锥形瓶、试管等。

2实验方法

2.1中药制备 ①制备皮肤抗感染1号方剂饮片：水煎后浓缩至药液浓度为1.85g/ml。②制备皮肤抗感染2号方剂：水煎后浓缩至药液浓度为0.83g/ml。③分别制备皮肤抗感染1号方剂和皮肤抗感染2号方剂的颗粒剂：将颗粒剂与水混匀，得皮肤抗感染2号方剂颗粒剂的浓度为0.33g/ml，皮肤抗感染2号方剂颗粒剂的浓度为0.59g/ml。将皮肤抗感染1号方剂饮片记为饮1号，颗粒剂记为颗粒1号;将皮肤抗感染2号方剂饮片标记为饮2号，颗粒剂记为颗粒2号。

2.2培养基的制备 按说明配制营养肉汤培养基和固体琼脂培养基并灭菌备用

2.3接种并培养细菌 用接种环在超净工作台上挑取单个菌株，将其移入相应锥形瓶的培养液中，置于摇床上运行2h，使溶液变浑浊，吸取部分溶液放入分光光度计测量，测量结果将控制在OD值为0.100±0.005范围内。

2.4采用二倍稀释法制作96孔板，并进行分组（1）纯药对照组;（2）纯菌对照组;（3）纯培养基对照组;（4）实验组：①饮1号+金临;②饮1号+金葡;③饮2号+金临;④饮2号+金葡;⑤颗粒1号+金临;⑥颗粒1号+金葡;⑦颗粒2号+金临;⑧颗粒2号+金葡。（ 每种方剂对应的细菌做三次平行实验）

2.5 MBC的测定分别选取，1/2，1/4，1/8孔内的相应菌液，吸取50μl滴入MH培养基内，并用玻璃刮铲涂布均匀，置于37℃恒温培养箱内培养24h，观察菌株生长情况。（ 每种方剂对应的细菌做三次平行实验）

3实验结果

由图可得：

①颗粒1号和颗粒2号分别作用于金临时，颗粒1号较颗粒2号抑制效果更加;饮1号和饮2号分别作用于金临时，饮1号的作用效果更显著。

②颗粒1号和颗粒2号分别作用于金葡时，颗粒1号效果更好;饮1号和饮2号分别作用于金葡时，饮1号的效果较饮2号明显。

③颗粒1号分别对金临和金葡作用时，颗粒1号对金葡的抑制效果强于金临;饮1号分别作用于金临和金葡时，饮1号对金葡的效果更好。

④颗粒2号分别对金临和金葡作用，发现对金葡抑制效果更好;饮2号对金临和金葡的作用时，饮2号对金葡的抑制效果强于金临。在以上的对比中，颗粒1号和饮1号均对金临有抑制作用，也对金葡有抑制作用，但对金葡的效果较佳。颗粒2号仅对金葡有较好的抑制作用，但在较高浓度下才对金临表现为抑制作用。综上，中药对耐药性金黄色葡萄球菌和标准金黄色葡萄球菌均存在抑制作用。

4讨论

黄柏具有广谱抗菌作用，发现黄柏对化脓性球菌具有明显的抗菌作用，尤其对金黄色葡萄球菌抑制效果较强。紫花地丁的提取物具有抗菌、抗炎等作用}。黄芩的提取物黄芩素能抑制金黄色葡萄球菌生物被膜的形成。黄连有广谱的抗菌、抗病毒作用，对金葡、霍乱弧菌、乙型链球菌作用较强。然而，近年的研究表明，随着抗生素应用，细菌的耐药性逐渐增强，本实验研究不同浓度和不同种类的药物对不同菌种的作用，通过观察所测细菌前后OD值的变化，从而得出结论，为临床诊治提供理论依据和参考。

黄连、黄芩、苦参、板蓝根采取“群药共煎”的方法发现其产生沉淀，而有研究证明沉淀主要是由黄连和黄芩产生的，有学者提出黄连和黄芩共煎时小檗碱和黄芩苷的含量增加，由此猜测是由于在水煎时通过某种作用使其理化性质发生了变化，因此提高药性。

现代医学表明，苦参外用能有效的抑制金葡菌以及耐药菌生物被膜的形成，从而达到良好的抗菌效果，且经过配伍后的苦参抗菌效果会更好。中药里面含有的化学物质很可能通过破坏细菌细胞膜或蛋白质的合成来抑制或杀死细菌。如：醛类物质、酸性物质或碱性物质可以通过使蛋白质烷基化、变性或破坏蛋白质结构，导致细菌生长受到抑制甚至死亡。

中药可能在改善菌群关系中也扮演了重要的角色，分别用中药作用于金葡和金临，发现中药浓度较大时，细菌基本不生长，而浓度小的时候细菌生长较快，则推测中药浓度在较高稀释倍数的条件下呈中性，导致金葡菌快速增长。

金葡菌是自然界中一种常见的病原菌，常感染免疫力低下的人群，且易产生耐药性，在临床上不易有效去除，在人体皮肤表面以及呼吸道各个地方容易造成感染，对医院环境造成污染。本实验主要研究中药的抑菌作用，为临床上对症下药提供理论依据。中药学是我国的传统医学，同样也是我们的传统文化，因此，传统中药应结合现代医学，更好的开拓中药的发展。