皮炎洗剂提取液的药效学研究

顾玉英��

摘要：目的确定皮炎洗剂提取液的抗炎、止痒、抑菌作用。方法观察皮炎洗剂提取液对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的作用；对大鼠蛋清性足跖肿胀的作用；对大鼠止痒作用的影响；以及采用试管连续稀释法对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、绿脓杆菌、白色念珠菌和枯草杆菌进行皮炎洗剂提取液的体外抑菌试验。结果皮炎洗剂提取液对对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀和大鼠蛋清性足跖肿胀具有显著抑制作用；对大鼠瘙痒模型具有显著止痒作用；皮炎洗剂提取液对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、绿脓杆菌、白色念珠菌和枯草杆菌具有不同程度的抑菌，杀菌作用。结论皮炎洗剂提取液具有抗炎、止痒、抑菌作用。

关键词：皮炎洗剂；抗炎；止痒；抑菌

中图分类号：R2855文献标志码：A文章编号：1007-2349（2017）05-0075-03

随着环境污染与生活方式的改变，皮肤病发病率越来越高，严重影响着人类的生活质量。作为有效的治疗药物，激素制剂虽有强大的抗炎、免疫抑制和抗增生作用，但其副作用所引发的皮肤损害急剧增加。传统中药制剂皮炎洗剂是昆山市中医医院自制制剂，经过多年临床实践证明安全有效。皮炎洗剂由大黄、黄芩、黄连和苦参四味药等量组成，具有燥湿止痒的功效，临床上主要用于治疗夏季皮炎、急性湿疹、湿热、黄水症等[1]。本实验通过药理学实验，研究皮炎洗剂提取液的抗炎止痒抑菌作用，为皮炎洗剂的剂型改造奠定基礎。

1材料

11动物小鼠（体重20～24 g），SD大鼠（清洁级，体重180～200 g，许可证号：SCX2012-0001），均由浙江省医学科学院动物中心提供。[HJ2.5mm]

12药物与试剂皮炎洗剂提取液：用8倍量浓度为70%乙醇回流提取2次，每次2 h，然后浓缩制备皮炎洗剂提取液高剂量（浓度为02 g/mL），中剂量（01 g/mL），低剂量（005 g/mL）；妇肤康喷雾剂（100 mL，每揿01-015 mL，贵州荣发制药有限公司，批号20120201）；100%二甲苯（购自杭州华东医药公司，批号20090301）；10%新鲜蛋清（卵白蛋白，Worhtington产品，批号：P2c5516）；磷酸组织胺（上海丽珠东风生物技术有限公司，批号：0006058）；标准菌株金黄色葡萄球菌ATCC25923、大肠埃希菌ATCC25922、绿脓杆菌ATCC27853、白色念珠菌、枯草杆菌均由昆山市中医医院检验科提供；培养基：普通肉汤培养基用前分装于试管中，每管2 mL，115℃灭菌30 min，营养琼脂培养基、沙氏琼脂培养基，用前于115℃灭菌30 min。

2实验方法

21对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的作用[2，3]取小鼠50只，随机分为5组，每组10只。设模型对照组，妇肤康喷雾剂阳性对照组，皮炎洗剂提取液高（浓度为02 g/mL）、中（浓度为01 g/mL）、低（浓度为005 g/mL）3个剂量组。实验当日各组动物双侧耳廓涂药1次，每次1 mL，空白对照组涂以蒸馏水005 mL/20 g，1 h后各组以蒸馏水洗去药液，用棉球擦净；给小鼠右耳涂二甲苯005 mL/只，左耳作对照。15 min后断颈处死动物，在每鼠的左右两耳相同部位分别用打孔器取一耳片进行称重，计算肿胀度，并求出肿胀抑制率（%）。

22对大鼠蛋清性足跖肿胀的作用[2，4]取SD大鼠50只，随机分为5组，每组10只。设空白模型对照组，妇肤康喷雾剂阳性对照组，皮炎洗剂提取液高（浓度为02 g/mL）、中（浓度为01 g/mL）、低（浓度为005 g/mL）3个剂量组，每次1 mL。实验当日首先用自制容积测定装置测定各组大鼠右后足正常体积，然后给各组涂药，对照组涂等量蒸馏水。1 h后，各组右后足皮下注射10%新鲜蛋清005 mL/只。测定注射蛋清后1、2、4、6 h的右后足体积。致炎前后右后足体积的变化值为肿胀度，比较各组肿胀度的差异。

23对大鼠止痒作用的影响[5，6]取SD大鼠50只，随机分为5组，每组10只。设模型对照组，妇肤康喷雾剂阳性对照组，皮炎洗剂提取液高（浓度为02 g/mL）、中（浓度为01 g/mL）、低（浓度为005 g/mL）3个剂量组，每次1 mL。实验前24 h，给各组大鼠右后足背剃毛，涂药1次，空白对照组涂以蒸馏水。实验当日，用粗砂纸擦伤右后足剃毛处，面积1 cm2。局部再涂药1次，10 min后开始在创面处滴001%磷酸组织胺005 mL/只，此后每隔3 min依002%，003%……递增浓度，每次均为005 mL/只。直至大鼠回头舔右后足时所给予的磷酸组织胺总量（μg）为致痒阈。记录并比较各组的致痒阈。

24试管连续稀释法体外抑菌试验[7]金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、枯草杆菌、大肠杆菌均于实验前从保存菌种斜面上沾取少量菌苔接种于10 mL营养肉汤培养基中，于37℃培养24 h，取出作原菌液，再用无菌生理盐水稀释，经比浊仪判定菌量，配制成1×106 CFU/mL菌液。白色念珠菌于实验前从保存菌种斜面上沾取少量菌苔接种于10 mL真菌培养基中，于25℃培养72 h，取出作原菌液，再用无菌生理盐水稀释，经比浊仪判定菌量，配制成1×105 CFU/ml菌液。

取装有2 mL普通肉汤培养基12管，排列于试管架上，编号。然后以无菌操作法在第1管中加入皮炎洗剂提取液高剂量（浓度为02 g/mL）溶液2 mL，摇匀，吸取2 mL加入第2管中，摇匀，同法稀释至第10支试管，弃去2 mL；以上各管均加入备妥的1×106 CFU/ml菌液或1×105 CFU/mL白色念珠菌液01 mL。第11管中只加入01 mL菌液作阳性生长对照管；第12管加入2 mL供试液后混匀，弃去2 mL不加菌液作阴性对照管。将加入金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、大肠杆菌、枯草杆菌的各管置于37℃培养24 h，将加入白色念珠菌的各管置于25℃培养48 h，观察结果，确定最低抑菌浓度（MIC）。经培养后无菌生长的各管，用灭菌接种环沾取少许抹于营养琼脂或沙氏琼脂平板上，37℃培养24 h（金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、大肠杆菌、枯草杆菌）或25℃培养72 h（白色念珠菌），观察结果，确定最低杀菌浓度（MBC）。

25数据处理药理实验数据用（x[TX-*3/8]±s）表示，采用Students t-test进行统计学处理。*P<005表示实验结果具有显著性差异，*[KG-*3]*P<001，表示实验结果具有极显著性差异。

3实验结果

31对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的作用结果见表1。实验结果表明不同剂量的皮炎洗剂提取液对二甲苯致小鼠耳肿胀均有显著抑制作用，且随皮炎洗剂浓度的增加抑制作用也增大（P<005）。

32对大鼠蛋清性足跖肿胀的作用结果见表2。实验结果表明在不同时间段里皮炎洗剂提取液高、中剂量均能有效减轻蛋清所致大鼠足趾肿，以药后6 h左右作用最强（P<005）。

33对大鼠止痒作用的影响结果见表3。实验结果表明不同剂量的皮炎洗剂提取液对瘙痒模型均有显著止痒作用（P<001）。

34試管连续稀释法体外抑菌试验结果见表4。实验结果表明皮炎洗剂提取液对金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、大肠杆菌、枯草杆菌、白色念珠菌具有抑杀作用。

4讨论

炎症是机体组织对局部损伤的反应，是人类赖以生存的防御性和保护性反应。在炎症的早期，炎症介质刺激血管，使血管扩张，血管内皮间隙扩大，血管壁通透性增加，血浆内的液体、蛋白质和白细胞等渗出到组织间隙，随着渗出的增加，造成组织肿胀[3]。二甲苯致小鼠耳廓肿胀试验和蛋清致大鼠足跖肿胀试验是研究药物抗炎作用的常用试验方法。不同剂量的皮炎洗剂提取液对二甲苯致小鼠耳肿胀均有显著抑制作用（P<005）；不同时间段里高、中剂量皮炎洗剂提取液均能有效减轻蛋清所致大鼠足趾肿胀，给药后6 h左右作用最强（P<005），表明皮炎洗剂提取液对炎症早期血管通透性增高和水肿有明显的抑制作用，为临床应用皮炎洗剂提供了试验依据。但其抗炎机制还需进一步研究。

瘙痒是皮肤病中最常见和最痛苦的症状之一，组织胺是一种可以引起皮肤瘙痒的最常见介质[8]。本研究用外源性组织胺诱导释放内源性组织胺建立动物瘙痒模型。高、中、低剂量组的皮炎洗剂提取液对瘙痒模型均有显著止痒作用（P<001），表明皮炎洗剂提取液有显著的抗组织胺作用，为皮炎洗剂临床治疗皮肤病提供了理论基础。

金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、绿脓杆菌、白色念珠菌和枯草杆菌是目前常见的4种病原菌。体外抑菌实验结果表明皮炎洗剂提取液对这4种病原菌均有较强的抑杀作用，特别是对大肠埃希菌，在较低浓度即有抑杀作用。结果说明皮炎洗剂提取液对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性、真菌均有抑杀作用，表示皮炎洗剂提取液具有广谱抗菌作用，可以减少损伤皮肤的感染几率。

参考文献：

[1]许芳皮炎洗剂临床应用[J].四川中医，2007，25（10）：99

[2]徐叔云，卞如廉，陈修药理实验方法学[M].北京：人民卫生出版社2002

[3]刘志坚，方仲家，徐建伟白英水提取物对耳廓肿胀小鼠的影响[J].浙江中医杂志，2011，46（6）：455

[4]郭强，李孟全，张小轲，等咳尔康口服液对蛋清所致大鼠足趾肿胀的影响[J].牡丹江医学院学报2009，30（5）：14-15

[5]雷勇，李刚，谭正怀，等止痒霜治疗湿疹的药效学研究[J].中药药理与临 床，2007，23（3）：72-73

[6]盛廷淇，何忠平地黄双花颗粒抗炎止痒镇痛作用的药效学[J].中国医院药学杂志，2008，28（9）：727-728

[7]付金柏，朱育凤，朱萱萱，等清咽袋泡剂的体外抗菌试验时珍国医国药，2003，14（9）：520-521

[8]冯芹，商庆节，孙敬霞，等盐酸左西替利嗪搽剂的止痒抗过敏作用与局部皮肤组织分布特点研究[J].中国药理学通报，2011，27（8）：1179-1180