酱油中对羟基苯甲酸酯的快速测定方法

陈方 张惠 刘培勇 黄永勇

摘 要：本文建立了一种快速测定的方法。通过对样品前处理方法进行优化改进，并考察不同溶剂的提取效果。结果表明，酱油中3种对羟基苯甲酸酯的回收率为80.0%～98.7%，方法的平行性结果相对偏差小于10%，方法检出限低于0.001 g·kg-1，将该快速方法运用到实际酱油样品的检测工作中去，其测定结果准确可靠，是检测酱油中对羟基苯甲酸酯类的一种有效方法。

关键词：对羟基苯甲酸酯;酱油;方法

Abstract：A rapid determination method was established in this paper. The sample preparation method was optimized and improved， and the extraction effects of different solvents were investigated. The results show that this method is used to test the soy sauce in three p-hydroxy benzoic acid ester， its recovery rate can reach 80. 0%～98.7%; Methods of parallelism results relative deviation is less than 10%， method detection limit is lower than 0.001 g·kg-1; The rapid method is applied to actual soy sauce sample testing work， the determination results are accurate and reliable， it is the detection of p-hydroxy benzoic acid esters in soy sauce， a kind of effective method.

Key words：P-hydroxy benzoic acid ester; Soy sauce;Methods

中图分类号：TS264.2

对羟基苯甲酸酯类是一种防腐剂，常见的有对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯3种。对羟基苯甲酸酯类与目前常用的化学防腐剂相比，具有用量少、成本低、安全性好、抑菌范围广、在较宽的pH值（4～8）内有效等优点，还可与多种酯混合、与相应对羟基苯甲酸酯类钠盐复配，不仅可以提高溶解度，还具有较好的防腐能力[1-5]。目前，我国食品添加剂标准GB 2760-2014中[6]规定酱油中对羟基苯甲酸甲酯、乙酯及其钠盐（以对羟基苯甲酸计）≤0.25 g·kg-1。国内对羟基苯甲酸酯类的标准检测方法有气相色谱法、液相色谱法、液相串联质谱法。

GB 5009.31-2016国家标准方法是气相色谱法，其方法前处理复杂，酱油样品基质干扰大，因此建立一种快速、准确的气质法对食品安全来说具有重要的意义。本文采用气质法测定酱油中3种对羟基苯甲酸酯类的含量，优化了酱油样品前处理和分离条件，考察了不同溶剂的提取效率，提高了检测方法的灵敏度。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

材料。市售酱油;氯化钠、盐酸，为分析纯;石油醚、乙酸乙酯、乙腈、甲醇，为优级纯;C18粉;PAS粉;中性氧化铝粉;GBC粉;实验用水为超纯水;对羟基苯甲酸甲酯标准品、对羟基苯甲酸乙酯标准品、对羟基苯甲酸丙酯标准品，纯度≥99.0%。仪器。岛津GCMS-QP2010s气相色谱-质谱联用仪;DB-5MS石英毛細管柱（30 m×0.25 mm0.25 μm）;旋转蒸发仪。

1.2 试验方法

1.2.1 标准工作溶液的制备

（1）储备液配制。分别准确称取适量的各种标准物质，用乙酸乙酯配制成质量浓度为10 mg·mL-1的混合标准储备溶液。

（2）工作液配制。准确移取一定体积的混合标准储备溶液，根据仪器响应用乙酸乙酯稀释成系列质量浓度的混合标准工作溶液。

1.2.2 样品前处理

称取3.0 g（精确至0.01 g）样品于50 mL离心管中，加3.0 mL水，用盐酸-水溶液（1+1）调pH约为3.0，涡旋混合1 min，加入2 g氯化钠和10 mL乙酸乙酯涡旋提取1 min，超声提取10 min，4 000 r·min-1离心5 min，上清液转移至25 mL容量瓶中，再加10 mL乙酸乙酯重复提取一次，离心后，将上清液转移至同一容量瓶中，定容至刻度。定容后的溶液经无水硫酸钠脱水后，取5 mL加150 mg C18粉和7.5 mg GBC净化，过0.2 μm的有机滤膜后上机测定。

1.2.3 色谱条件

（1）气相条件。进样口温度250 ℃;柱温150 ℃;保持3 min后以5 ℃·min-1升温至190 ℃，保持2 min，再以15 ℃·min-1升温至250 ℃，保持5 min，外标法定量。

（2）质谱条件。质谱接口温度250 ℃;离子源：EI源，离子源温度200 ℃，采用选择离子监测SIM方式，监测离子m/z 65，93，121，138，152，166。

2 结果与分析

2.1 色谱柱的选择

本实验选择石英毛细管柱DB-5MS（30 m×0.25 mm×0.25 μm）作为分析色谱柱，其分离效果见图1。

2.2 提取溶剂优化

由图2知，分别选择石油醚、乙腈、甲醇、乙酸乙酯作为提取溶剂，提取回收率表明石油醚回收率较低，乙腈、甲醇、乙酸乙酯对3种对羟基苯甲酸酯的提取效果差异不大，但在前处理过程中甲醇不易与水分层，而乙腈毒性较大，综合考虑最终选择乙酸乙酯作提取溶剂较为理想。

图2 4种不同溶剂提取对羟基苯甲酸酯的回收率图

2.3 样品净化改进

用乙酸乙酯提取酱油中的对羟基苯甲酸酯类时，色素、脂类物质干扰较大，因此取部分提取液用C18粉、PAS粉、中性氧化铝粉、GBC粉分散固相萃取净化，PAS粉、中性氧化铝粉对目标物有较大的吸附作用，加标回收率较低，结果表明取5 mL提取液加150 mg C18粉和7.5 mg GBC净化效果最好，加标回收率较高，效果比较图见图3，图中上面图谱为未净化处理、下面图谱为净化处理的色谱图，

2.4 方法验证

2.4.1 线性范围、检测限和定量限

（1）标准曲线。分别吸取浓度为10.19、10.64、10.09 μg·mL-1混合标准中间液10、20、40 μ L和100 μ L用乙酸乙酯定容至1 mL，则混合标准工作液各物质浓度依次为对羟基苯甲酸甲酯0.101 9、0.203 8、0.407 6 μg·mL-1和1.019 0 μg·mL-1;对羟基苯甲酸乙酯0.106 4、0.212 8、0.425 6 μg·mL-1和1.064 μg·mL-1;对羟基苯甲酸丙酯0.100 9、0.201 8、0.403 6 μg·mL-1和1.009 0 μg·mL-1。浓度在0.1～1.0 μg·mL-1内，线性相关系数均>0.999。

（2）检测限。根据仪器响应，配制3倍信噪音比相当的较低浓度的标准溶液作为检测限浓度，按称样量3.0 g，定容体积25.0 mL计算，本次试验对羟基苯甲酸甲酯、乙酯、丙酯的检测限分别为0.480、0.425、0.425 mg·kg-1。该检测限优于国家标准方法GB 5009.31-2016的检测限0.6 mg·kg-1。仪器对较低浓度标准溶液的响应色谱图见图4。

2.4.2 准确度和精密度

以阴性样品中水平加标回收平行测定来考察精密度，以低、中、高3个水平加标回收率来考察准确度，其加标回收率在80.0%～98.7%，平行实验的相对偏差小于10%，其数据见表1。

2.4.3 实际样品分析

对市售一品鲜、海天、加加和金冠园4个品牌的酱油进行检测，均未检出3种对羟基苯甲酸酯类物质。

3 結论

本文建立了一种对酱油中3种对羟基苯甲酸酯检测的方法，检测效率高，成本低。通过方法学考察，加标回收率达到80.0%～98.7%，平行实验的相对偏差均小于10%，检测限优于现行国家标准检测方法GB 5009.31-2016的检测限0.6 mg·kg-1。该方法检测酱油样品准确高效，为监管提供了一种有效的技术支撑，具有较高的现实意义。

参考文献：

[1]高海军，李 勇，严飞龙，等.气相色谱法测定食品中6种对羟基苯甲酸酯及其钠盐[J].粮油食品科技，2011，19（3）：45-48.

[2]凌关庭.食品添加剂手册（第三版）[M].北京：化学工业出版社，2003.

[3]Chem S J.我国对羟基苯甲酸的现状和发展趋势[J].精细与专用化学品，2003（12）：6-7.

[4]杨寿清.新型高效低毒食品防腐剂——对羟基苯甲酸酯钠[J].饮料工业，2003（6）：17-22.

[5]陈翰锋.气相色谱法测定食品中对羟基苯甲酸酯类防腐剂含量[J].广州化工，2012，40（12）：136-138.

[6]中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会.GB 2760-2014食品安全国家标准 食品添加剂使用标准S.北京：中国标准出版社，2014.