不同类型原发性肝癌组织中干细胞的表达及其预后

张阳　聂寒秋　周显飞

[摘要]目的 探讨不同类型的原发性肝癌组织中干细胞表达及其预后。 方法 回顾性分析2015年1月～2017年1月期间在我院接受治疗的125例原发性肝癌患者的诊治资料。选取患者的手术切除肝细胞性肝癌、肝内胆管细胞癌、肝硬化结节、混合型肝癌和癌旁组织标本，每组25例。对五组标本进行免疫组织化学检测，比较上皮细胞黏附分子（EpCAM）、CD133和CD90在不同類型的组织中的表达及与临床特征和生存期的关系。 结果 肝内胆管细胞癌、肝细胞性肝癌和混合型肝癌中CD133、EpCAM、CD90的阳性率明显高于肝硬化结节、癌旁组织，差异有统计学意义（P<0.05）。在三组肝癌组织中，CD90表达阳性率明显高于EpCAM、CD133阳性率，但差异无统计学意义（P>0.05）。EpCAM、CD133和CD90阳性表达患者的肿瘤低分化比例、淋巴结转移比例和临床分期为Ⅲ/Ⅳ期的比例明显高于阴性表达者，其中位生存期短于阴性者，差异有统计学意义（P<0.05）。 结论 干细胞在原发性肝癌中高表达，但在不同类型的肝癌组织中的阳性率接近，干细胞参与了肝癌的发生和进展，是不良预后的标志之一。

[关键词] 原发性肝癌;干细胞;表达;预后

[中图分类号] R735.7          [文献标识码] A          [文章编号] 1673-9701（2020）03-0005-03

[Abstract] Objective To investigate the expression and prognosis of stem cells in different types of primary liver cancer tissues. Methods The clinical data of 125 patients with primary liver cancer who were treated in our hospital from January 2015 to January 2017 were retrospectively analyzed. The hepatocellular carcinoma， intrahepatic cholangiocarcinoma， mixed liver cancer， cirrhotic nodules and adjacent tissues of surgical resection were selected， with 25 cases in each group. Immunohistochemistry was performed on five groups of samples. The expressions of epithelial cell adhesion molecules （EpCAM）， CD133 and CD90 in different types of tissues and their relationship with clinical features and survival was compared. Results The positive rates of CD133， EpCAM and CD90 expression in the hepatocellular carcinoma， intrahepatic cholangiocarcinoma， mixed liver cancer were significantly higher than those in cirrhosis nodules and adjacent tissues. The difference between the groups was statistically significant（P<0.05）. In the three groups of liver cancer tissues， the positive rate of CD90 expression was significantly higher than that of EpCAM and CD133， but the expression of CD3 in different types of liver cancer tissues was not statistically significant（P>0.05）. The proportion of poorly differentiated tumor， lymph node metastasis and clinical stage of stage Ⅲ/Ⅳ in patients with positive expression of EpCAM， CD133 and CD90 was significantly higher than that of patients with negative expression， and the median survival time in patients with positive expression of EpCAM， CD133 and CD90 was shorter than that of negative ones. The difference was statistically significant （P<0.05）. Conclusion Stem cells are highly expressed in primary liver cancer， but the positive rates in different types of liver cancer tissues are close. Stem cells are involved in the occurrence and progression of liver cancer， which is one of the signs of poor prognosis.

[Key words] Primary liver cancer; Stem cells; Expression; Prognosis

肿瘤干细胞学说提出后，在包括肝癌组织在内的多种肿瘤组织中均有干细胞被纯化和鉴定[1]。肿瘤干细胞是一类具有长期自我更新和多向分化能力的细胞，不仅有分化功能，还可以有效促进相关治疗药物的药物不良反应，进而导致不良预后[2-3]。对肿瘤干细胞的研究已成为目前临床肝癌研究的热点之一，既往认为原发性肝癌的发生是成熟细胞去分化所致，但是近年来研究认为其可能由干细胞分化不全或分化异常引起。对肝癌组织中的干细胞研究不仅可以分析其分布特点，还可进一步探索肝癌的发病机制，并指导临床治疗。为此，本研究选取我院接诊的患者，对不同类型的原发性肝癌组织中干细胞的表达及其预后进行分析，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般資料

回顾性分析2015年1月～2017年1月期间在我院接受治疗的125例原发性肝癌患者的诊治资料。选取患者的手术切除肝癌石蜡包埋组织，并根据组织类型的不同，将标本分为肝细胞性肝癌、肝内胆管细胞癌、混合型肝癌、肝硬化结节和癌旁组织，每组均25例。

1.2 方法

对标本进行免疫组织化学检测，采用EnVision法染色[4-5]，按试剂盒说明书方法操作。标本以甲醛固定，石蜡包埋，4 μm厚切片，用已知阳性切片作阳性对照，PBS代替一抗作为阴性对照。

根据切片上阳性染色的细胞占光镜下全部肿瘤细胞的比例和显色强度进行结果判定[6-7]：阴性（-），无阳性染色细胞;弱阳性（+），阳性细胞数<10%，呈浅棕色;阳性（++），阳性细胞数占10%～50%，呈棕黄色;强阳性（+++），阳性细胞数>50%，呈深褐色。

1.3 观察指标

比较EpCAM、CD133和CD90在不同类型组织中的表达及其与临床特征和生存期的关系。

1.4 统计学方法

采用SPSS19.0统计学软件进行分析，计量资料以（x±s）表示，采用t检验;计数资料以[n（%）]表示，采用χ2检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 EpCAM、CD133和CD90在不同组织中的表达

肝内胆管细胞癌、肝细胞性肝癌和混合型肝癌中CD133、EpCAM、CD90的阳性率明显高于肝硬化结节、癌旁组织，差异有统计学意义（P<0.05）。CD90的整体阳性率明显高于CD133、EpCAM的阳性率，但差异无统计学意义（P>0.05）。见表1。

2.2 肝细胞性肝癌、肝内胆管细胞癌和混合性肝癌中EpCAM、CD133和CD90与临床特征的关系

肝细胞性肝癌、肝内胆管细胞癌和混合性肝癌中EpCAM、CD90、CD133阳性表达患者的淋巴结转移比例、肿瘤低分化比例和临床分期为Ⅲ/Ⅳ期的比例明显高于阴性表达者，提示其表达与肿瘤分化程度、淋巴结转移和临床分期有关（P<0.05），且表达阳性患者的中位生存期短于阴性者，差异有统计学意义（P<0.05）;其表达与性别、年龄、肿瘤大小等因素无关（P>0.05）。见表2。

3 讨论

肝癌是一种常见的恶性肿瘤，临床上通常采用肝脏切除术或肝脏移植治疗该病，但术后仍有一定的几率出现复发或转移，带来不良预后。对肿瘤干细胞的表达研究不仅可分析其与病理特征的关系，还有助于分析疾病的预后[8-9]。干细胞能够自我更新和产生后代分化细胞，在正常肝组织损伤时可以完成自我快速修复。干细胞具有能够产生两个子代细胞和一个干细胞的不对称分裂的能力。其在正常情况下处于长时间的静止状态，但依旧具有干细胞的相关特性，因此可以有效躲避化疗药物的攻击出现化疗耐受的情况;另一方面，干细胞具有增强活性氧防御、DNA损伤修复、自我更新等的能力，会有放疗抗拒的情况出现，这也是导致肿瘤复发与转移的主要原因。肝的干细胞主要存在于肝门管区Hering管中，有文献指出，导致肝癌发生的主要原因是调控干细胞自我更新的信号通路失调，而许多肝癌组织中存在与干细胞分化功能相似的恶性生长的特性[8-11]。肝癌干细胞和肝脏干细胞在更新和分化时能表达表面标志物，可利用这些标志物对其进行标记[12-13]。

EpCAM、CD133和CD90均是常见的肝癌干细胞的特异性标志物[14]。EpCAM通常在多数恶性上皮肿瘤细胞和少数正常上皮细胞表面表达。CD133是一种来源于人类胚胎骨髓、胎肝及外周血的细胞表面糖蛋白。CD90又称为Thy-1，是甘油磷酸肌醇锚定的糖蛋白，也是微血管内皮细胞活化的标志之一;可以有效参与新生血管的形成，还可参与肿瘤的转移[15-17]。在本研究中，肝内胆管细胞癌、肝细胞性肝癌和混合型肝癌组织的CD133、EpCAM、CD90阳性率明显高于肝硬化结节和癌旁组织，且在不同类型肝癌组织中的表达基本一致，提示干细胞与肝癌有着较为密切的关系。此外，CD90的阳性率明显高于CD133、EpCAM，说明CD90有更高的灵敏度[18]。临床相关研究发现，此类细胞可能通过Hedgehog通路、Notch通路、TGF-β通路、EpCAM通路、Wnt/-catenin通路等导致肝脏干细胞恶性转化情况的发生。另一方面，并不是全部肝癌细胞都存在转移能力，只有可在远处形成播散性肿瘤细胞，才被称为转移干细胞。

本研究显示，EpCAM、CD133和CD90的表达与性别、年龄、肿瘤大小等因素无关，但与肿瘤分化程度、淋巴结转移和临床分期有关，且表达阳性的患者的中位生存期明显短于阴性者。因此，EpCAM、CD133和CD90的表达与临床病理学特征有密切关系，且阳性表达可作为不良预后的标志，原因可能是抑制Hedgehog通路后，肝癌组织中CD44阳性肝癌干细胞与肝成纤维细胞数量减少，转移灶也相应减少[19-20]。

综上所述，干细胞在原发性肝癌中高表达，但在不同类型的肝癌组织中的阳性率接近，干细胞参与了肝癌的发生和进展，是不良预后的标志之一。

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（收稿日期：2019-02-18）