干化学法和湿化学法对24h尿蛋白定量检测的比较及样本保存条件研究

孙京花，陈 昊，邸 平，徐 菡，何 赏，马骏龙，王成彬

(解放军总医院临床检验科，北京 100853)

尿蛋白是肾脏疾病诊断的重要指标，增高常见于肾小管重吸收能力降低、肾小球滤过膜通透性亢进以及尿道蛋白代谢异常[1]。目前临床尿蛋白有定性分析和定量分析，定性分析用于初步筛查，发现蛋白尿需要进一步做定量分析。本检验室罗氏Cobas 501和Hipee M1生化分析仪均可对24h尿蛋白进行定量分析，罗氏Cobas 501采用湿化学技术，自动化程度高，Hipee M1基于干化学技术，携带方便、操作简单。为评估两台尿检仪检测参数的一致性，减小不同仪器使用对临床结果判读产生的影响，本研究对罗氏Cobas 501和天津果实科技Hipee M1各项参数进行了比较，从而了解不同仪器检测结果的相关性和检测结果的一致性[2]。同时24h尿蛋白检测过程中，样本的采集和保存对检测结果影响较大。尿液样本留取过程中，为防止细菌滋生对测试结果的影响，通常会使用冷藏或添加防腐剂的方式。本研究比较样本不同的保存方式对24h尿蛋白定量检测的影响，探讨尿液样本保存的最佳方法。

1 材料与方法

1.1 实验样本 收集中国人民解放军总医院(301医院)住院和门诊患者新鲜尿液标本119例，尿液样本留取标准参考《临床检验操作规程》第4版，样本采集后2h内完成检测[3]。

1.2 试剂与仪器 罗氏Cobas 6000模块化生化免疫分析系统(Cobas 501模块),九强生物脑脊液/尿液总蛋白测定试剂盒(焦酚红法，18-0314)及配套校准品和质控品,天津果实科技有限公司Hipee M1及配套试纸(焦酚红法，批号180509)。

1.3 方法 罗氏Cobas 501生化分析仪以及Hipee M1生化分析仪检测24h尿蛋白，试剂参数按照相应的尿总蛋白测定试剂盒说明书进行检测。

检测前分别对罗氏Cobas 6000和Hipee M1两台生化分析仪进行清洗，并进行高、低两个水平室内质量控制，确定在控后，按实验室标准操作规程进行平行检测。所收集的119例尿液充分混匀后，分别在两台生化分析仪上平行测定，2h内完成检测。

1.4 统计学分析 采用SPSS 17.0统计软件，检测结果进行t检验、相关性、变异分析。

2 结果

2.1 两种生化分析仪的稳定性评价 见表1。连续30天用配套的定值质控品在Cobas 501和Hipee M1两台生化分析仪上进行尿液总蛋白定量检测，两台仪器检测结果的变异系数经统计学分析，两种型号的尿蛋白检测日间精密度均符合仪器的要求。

2.2 两种生化分析仪检测结果一致性评价 使用119例尿液样本同时在Cobas 501和Hipee M1上进行检测，以Cobas 501测定结果作为参考方法的测定值X，Hipee M1测定结果作为比对方法的测定值Y进行回归分析，计算线性回归方程为：Y=0.997 6X- 0.040 2，r=0.991(r2= 0.982)。回归方程及相关系数见图1。同时对两台仪器的检测结果进行统计学分析，两台仪器检测结果经配对t检验，差异无统计学意义(F值为0.126，Fcrit值3.88，F值0.05)。

表1 Cobas 501和Hipee M1日间质控分析

图1 九强生物脑脊液/尿液总蛋白测定试剂盒和Hipee M1检测尿蛋白结果相关性分析

2.3 尿液样本保存方法对尿蛋白定量检测结果的影响 见表2。将收集到的尿液混合样本共计12L，通过Cobas 501定量检测，浓度为0.76g/L。将样本分成6等份，一份置于2～8℃冷藏保存，一份置于常温保存，其它四份分别加入防腐剂甲醛、二甲苯、苯甲酸钠及硼酸，置于常温保存。检测时，从每份样本中选取样本重复检测5次。

2～8℃冷藏保存无防腐剂与使用防腐剂二甲苯和硼酸在常温保存24h尿蛋白含量在不同时间点的检测结果，差异均无统计学意义(P>0.05)。常温未加入防腐剂的样本、加入防腐剂甲醛和苯甲酸钠的样本不同时间点检测结果比较，差异均具有统计学意义(P<0.05)。

3 讨论

慢性肾脏病在全球具有较高的发病率，美国、挪威等国家患病率高达10.2%～13.0%[4]，我国慢性肾脏病患者已达1.2亿[5]。慢性肾脏病进入终末端肾病阶段，需要通过透析或肾移植治疗维持生命，同时慢性肾脏病与心血管、高血压等慢性疾病存在复杂的交互作用[6]。尿蛋白尤其是24h尿蛋白定量分析可反映患者每天尿蛋白的排泄量，有助于诊断肾脏病变、评估治疗及预后效果。

表2样本保存方法对尿蛋白定量检测结果影响分析

本实验对Cobas 501和Hipee M1生化分析仪的24h尿蛋白定量检测进行比对分析，从而确定两台仪器的误差在临床可接受范围内，保证了检验报告的一致性。两台生化分析仪检测结果具有很好的重复性和一致性。两台检测仪所用的尿蛋白检测配套试剂均为焦酚红法，因此精密度、灵敏度、特异度等具有较高的一致性。

尿蛋白的理化性质具有不稳定性，在24h尿蛋白定量分析中，需要选择适合的保存方法。患者尿液在2～8℃保存操作困难，而室温下使用硼酸作为防腐剂对检测结果没有影响，同时硼酸比较容易获得，因此可以使用硼酸作为防腐剂。

综上所述，24h尿蛋白定量分析是肾脏疾病的有效评估手段，Cobas 501和Hipee M1比对结果显示多数检测结果两台仪器之间无明显差异，并且均具有较高的稳定性，能够满足肾脏疾病的临床诊断、疗效和预后观察的需要。24h尿液样本保存对检测结果影响较大，需要选择适合的防腐剂进行样本保存。同时Hipee M1便携式生化分析仪具有操作简单、快速和不受场所限制等优点，可广泛用于临床和社区流行病学研究。