山茶籽联合乌圆口服液对去卵巢大鼠血液和骨组织的影响

黎飚 李海 黄凌凌 顾建忠 杨洁 方晓燕

(右江民族医学院组织学与胚胎学教研室,广西 百色 533000)

摘除卵巢(OVX)是老年女性骨质疏松最为经典动物造模。OVX影响骨组织，引起骨质疏松，对其相关模型动物治疗研究较多，但OVX对骨组织影响同时，是否影响到骨中造血组织，从而影响到红细胞和血红蛋白水平，这方面研究还未见报道。研究观察乌圆口服液及山茶籽联合乌圆口服液对OVX大鼠骨组织及血液影响。

1 材料和方法

1.1材料和设备 选用80只5月龄雌性SPF级大鼠，用上海那艾精密NAI3537型血细胞分类计数器,对红细胞进行计数。使用美国DS-5糖化血红蛋白分析仪对大鼠血液血红蛋白测定，用南京建成生物科技有限公司生成的血磷、钙和碱性磷酸酶试剂盒测定血清磷、钙和碱性磷酸酶。

1.2动物分组 按体重给大鼠进行编号标注，随机取出大鼠装入分4组饲养笼，同条件常规饲养，用不含豆粉饲料进行喂养。

1.3对照组 随机取出其中一组20只大鼠，常规消毒后，用戊巴比妥钠晶体配制成浓度为10 g/L注射液，按3.0 mg/kg吸取注射液注入腹腔，在大鼠进入麻醉后，从脊椎骨两侧的背部卵巢对应部位切开进入腹腔，勾出卵巢和其周围脂肪垫，深颜色是卵巢，浅颜色是脂肪垫，切除一块相当于卵巢大小脂肪垫，注意不伤及卵巢。

1.4OVX和铅中毒动物模型的建立 随机取出其中一组20只大鼠，常规消毒后，用戊巴比妥钠晶体配制成浓度为10 g/L注射液，按3.0 mg/kg吸取注射液注入腹腔，在大鼠进入麻醉后，从脊椎骨两侧的背部卵巢对应部位切开进入腹腔，勾出卵巢和其周围脂肪垫，深颜色是卵巢，浅颜色是脂肪垫，小心分离出双侧卵巢并进行切除，小心别划破卵巢动脉，缝合切除伤口后酒精消毒再涂擦三庆大注射液，避免切口感染。切下组织块要鉴定确为卵巢组织。同样方法再对其他两组大鼠OVX。

1.5用药 乌圆口服液+OVX(W+OVX)组,在去卵巢1 w后，用按6 ml/kg剂量进行灌胃，每周用药5 d，每天用药1次，连续8 w。山茶籽+乌圆口服液+OVX(H+W+OVX)组,去卵巢1 w后用3 ml/kg乌圆口服液+3 ml/kg山茶籽醇提物溶液剂量的混合液进行灌胃，每周用药5 d，每天用药1次，连续8 w，山茶籽醇提物3 ml/kg，相当于5 g生药/kg。对照组在切除脂肪垫1 w后，用按6 ml/kg剂量生理盐水进行灌胃，每周用药5 d，每天用药1次，连续8 w。

1.6检测指标 骨组织(镜下骨组织结构)；血清磷、钙和碱性磷酸酶、红细胞计数、血红蛋白和雌二醇。

1.7实验取材和测定 实验第8 w后，各实验组在麻醉大鼠后采其心血5 ml，失血致死取后双右股骨。吸取20 μl血测定血红蛋白，测定方法是美国DS-5糖化血红蛋白分析仪。2 ml用于红细胞计数，用血细胞分类计数器。其余血通过离心分离，取上层血清， -200℃条件下密封存放待测。血磷、钙和血碱性磷酸酶用南京建成试剂盒进行测定，严格按试剂盒说明书进行操作，用放射免疫化学发光方法测定雌二醇浓度。各组股骨制成骨切片染色后放大100倍观察其镜下组织形态。

1.8统计学方法 采用SPSS18.0软件进行方差分析和t检验。

2 结 果

2.1各实验组光镜下骨切片组织结构 对照组骨皮质厚，骨小梁稀疏均匀，骨细胞大小一致，整齐排列,钙盐丰富，均匀沉积。OVX组骨皮质明显薄，骨细胞大小不等，排列参差不齐紊乱。骨小梁疏密不均、断裂不全，沉积钙盐减少，颜色变浅，髓腔扩大明显，表现出骨质疏松镜下改变。W+OVX组的光镜下骨切片组织结构还是有明显骨质疏松病理特征，与OVX组有相似病理改变，病理改善不明显。H+W+OVX组光镜下骨切片组织结构表现出疏松的病变明显改善。骨皮质厚，骨小梁稀疏均匀，骨细胞大小一致，整齐排列,钙盐丰富，均匀沉积。见图1。

图1 股骨骨组织光镜结构图(HE染色，×100)

2.2各组血红蛋白、红细胞计数、血雌二醇测定比较 待结束实验时候，进入实验大鼠无一脱失，均取得相应实验结果。与对照组比较，OVX组的红细胞计数、血红蛋白和雌二醇明显降低(P<0.05)；与OVX组比较，H+OVX组和H+W+OVX组红细胞计数、血红蛋白和雌二醇明显升高(P<0.05，P<0.01)。与W+OVX组比较，H+W+OVX组红细胞计数、血红蛋白雌二醇明显升高(P<0.05)。见表1。

2.3各组血磷、钙和碱性磷酸酶比较 与对照组比较，OVX组和W+OVX组血磷、钙明显降低(P<0.05)，血碱性磷酸酶明显升高(P<0.05);与OVX组比较，H+W+OVX组血钙、磷明显升高(P<0.05)，血碱性磷酸酶明显降低(P<0.05)。见表2。

表1 各组血红蛋白、红细胞计数和雌二醇测定结果

与对照组比较:1)P<0.05；与OVX组比较:2)P<0.05,3)P<0.01；与H+OVX组比较:4)P<0.05，下表同

表2 各实验组血磷、钙和碱性磷酸酶的测定结果

3 讨 论

OVX使得机体主要雌激素来源去除，自然体内(包括血液在内)雌激素急剧下降，引起一系列雌激素缺乏的病理生理的改变，比如更年期综合征，记忆力减退，最为明显的是老年女性骨质疏松〔1，2〕。也有造血功能下降导致贫血，气喘乏力临床表现。

骨细胞在培养时发现雌激素提高成骨细胞生长分化能力，骨细胞周围基质增加明显〔3,4〕。雌激素体内水平下降引起骨质流失和生成呈负平衡，磷、钙降低。钙盐是骨的支架，也是骨坚硬所在。血钙升高对甲状旁腺分泌的激素，甲状旁腺激素(也称升钙素)有抑制作用。长时间低钙回引起甲状旁腺主细胞分泌升钙素，而升钙素促进进骨质中钙盐中的钙溶解稀出，提高游离血钙，骨磷伴随流失。随着低钙的延长，低钙所致骨质疏松日益加重。骨质疏松引起体内促进骨质合成激素增加，骨代谢显得更加活跃，而骨代谢活跃观察指标就是碱性磷酸酶，所以OVX组大鼠碱性磷酸酶升高〔5〕。临床使用雌激素类制剂和降钙素防治骨质流失，就是基于上述机制〔6,7〕。

雌激素缺少引起骨质流失同时，也会影响骨髓造血功能引起红细胞计数、血红蛋白下降。中成药乌圆口服液具有补血功能，提高骨髓造血功能，从而提高模型组的红细胞计数和血红蛋白量，但改善贫血功能没有H+W+OVX组明显，说明对于老年雌激素缺乏贫血患者，在使用补血药物同时，加用雌激素类药物，治疗贫血效果更好。乌圆口服液也不能改善骨质疏松的病理改变，而补血药加上雌激素类药物，既可以治疗老年雌激素缺乏伴有贫血〔8～10〕，又可治疗老年女性雌激素缺乏骨质疏松。因为雌激素通过提高护骨素，减少核因子-κB 受体活化因子配体(RANK)，活跃成骨细胞，压抑破骨细胞，从而增加骨质合成，抑制骨质流失。所以山茶籽联合乌圆口服液既护骨又补血双重作用。