乙型肝炎病毒DNA复制水平与HBeAg、HBsAg的相关性研究

何龙芳，龙云升，张海业

（广东省信宜市人民医院 传染科，广东 信宜525300）

乙型肝炎 （简称乙肝）是乙肝病毒 （HBV）感染引起的传染性疾病。WHO统计数据显示，全球HBV感染者约20亿，其中慢性HBV携带者逾3.5亿，每年死于HBV感染相关疾病患者达75万 ～100万［1］。我国是HBV感染高流行地区，人群HBsAg阳性检出率接近10%［2］，虽然近年乙肝疫苗的预防使用有效降低了乙肝人群感染率，但乙肝仍是目前临床研究的重点课题之一。血清学检测是临床诊断乙肝的重要方法，特别是HBV DNA检测，不仅可用于明确患者有无HBV感染，亦能通过定量检测明确病毒DNA复制水平，评估传染性，为乙肝临床治疗及传染防治提供依据［3］。本研究探讨HBV DNA与乙肝血清标志物HBeAg、HBsAg的关系，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料选取2015年1月至2016年12月我院门诊和住院部收治的150例乙肝患者为研究对象，均符合中华医学会《慢性乙型肝炎防治指南》［4］相关诊断标准，排除合并其他传染性疾病、免疫性疾病、血液性疾病及恶性肿瘤患者。其中，男93例，女57例；年龄26～84岁，平均 （41.5±13.6）岁。

1.2 方法清晨空腹抽取患者静脉血液4 mL送检实验室，取上清液，采用雅培ARCHTECT i2000SR全自动免疫分析仪及配套试剂，通过化学发光微粒子免疫法测定乙肝病毒e抗原（HBeAg）与乙肝病毒表面抗原 （HBsAg）。以实时荧光定量PCR测定乙肝病毒DNA水平，采用仪器DA7600PCR扩增仪、伯乐BIO-RAD 680酶标仪等，试剂为乙肝病毒核酸扩增（PCR）荧光定量检测试剂盒 （S20040036），购自河南华美生物工程，检测下限40 IU／mL。检测方法：取100 μL血清，加等量DNA浓缩液，充分振荡混匀后上机离心10 min，离心速率为3 000 r／min，取沉淀物加入20 μL DNA提取液，振荡混匀后离心数秒，80℃温育10 min，同法上机离心5 min，备用；取PCR反应管，加入预处理样品上清液及质控品、参考品，放入仪器样品槽，经循环变温处理后，电脑自动读取荧光值，得出定量结果。

1.3 观察指标与评价标准统计患者的HBeAg、HBsAg阳性率。指标阳性 （＋） 标准： HBeAg＞1.0 S／CO； HBsAg＞0.05 U／mL，反之为阴性 （-）。比较 HBeAg、HBsAg阴性与阳性患者的HBV DNA阳性率与平均拷贝数。HBV DNA≥1.0×103copies／mL为阳性，指标值越大，HBV复制越活跃，传染性越强。

1.4 统计学方法采用SPSS 21.0软件统计分析，计量资料以±s表示，采用t检验，计数资料以率 （%）表示，采用χ2检验，多组比较行Krualal-Walis秩和检验，相关性分析采用Pearson相关分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 HBV DNA水平与HBeAg的关系HBeAg阳性患者HBV DNA阳性率与平均拷贝数均高于HBeAg阴性患者 （P＜0.05）；HBeAg 阳性与 HBV DNA 水平呈正相关 （r＝ 1.024，P＜0.05）。见表1。

表1 HBV DNA水平与HBeAg关系 ［n （%），±s］

表1 HBV DNA水平与HBeAg关系 ［n （%），±s］

组别 n H B V D N A （＋） 拷贝数 （c o p i e s／m L）H B e A g （＋） 9 9 8 5 （8 5.8 6） （3.0 5±0.7 2） ×1 0 7 H B e A g （-） 5 1 3 2 （6 2.7 5） （5.1 4±0.6 3） ×1 0 3 χ 2／t 1 1.5 5 8 1 8.1 9 2 P＜0.0 5 ＜0.0 5

2.2 HBV DNA水平与HBsAg的关系HBsAg阳性患者的HBV DNA阳性率与HBsAg阴性患者相当 （P＞0.05），但平均拷贝数高于HBsAg阴性患者 （P＜0.05）； HBsAg阳性与 HBV DNA水平呈正相关 （r＝ 1.331，P＜0.05）。 见表 2。

表2 HBV DNA水平与HBsAg的关系 ［n （%），±s］

表2 HBV DNA水平与HBsAg的关系 ［n （%），±s］

组别 n H B V D N A （＋） 拷贝数 （c o p i e s／m L）H B s A g （＋） 1 4 1 1 1 0 （7 8.0 1） （7.5 2±0.6 0） ×1 0 4 H B s A g （-） 9 7 （7 7.7 8） （4.8 9±0.6 7） ×1 0 3 χ 2 ／t 0.0 0 0 2 2.5 3 1 P＞0.0 5 ＜0.0 5

2.3 不同 HBeAg、HBsAg模式与 HBV DNA的关系HBeAg和HBsAg均阳性患者HBV DNA阳性率与平均拷贝数均高于HBeAg、 HBsAg 单一阳性患者 （P＜0.05）。 HBeAg 阳性患者HBV DNA阳性率与平均拷贝数高于HBsAg阳性患者 （P＜0.05）。 见表 3。

表3 不同HBeAg、HBsAg模式与HBV DNA的关系 ［n （%），±s］

表3 不同HBeAg、HBsAg模式与HBV DNA的关系 ［n （%），±s］

组别 n H B V D N A （＋） 拷贝数 （c o p i e s／m L）H B e A g （＋）、 H B s A g （＋） 9 0 8 6 （9 5.5 6） （3.6 2±0.5 4） ×1 0 7 H B e A g （＋）、 H B s A g （-） 9 9 （6 6.6 7） （6.9 3±0.7 1） ×1 0 4 H B e A g （-）、 H B s A g （＋） 5 1 2 5 （4 9.0 2） （5.8 1±0.6 3） ×1 0 3 χ 2 ／t 7.1 7 5 1 2.3 1 6 P＜0.0 5 ＜0.0 5

3 讨论

乙肝血清标志物能够反映HBV免疫反应与病程转化，是临床诊断乙肝及疗效评估最常用指标，临床检测操作简单，准确性理想，基本可以满足临床诊断需要［5］。但乙肝血清标志物不能反映乙肝发生与进展的过程，亦不能提示HBV复制情况，特别是对于需要准确评估有无HBV感染及传染程度的患者，常规乙肝血清标志物检测临床应用价值不大［6］，对此，深入分析HBV DNA与血清标志物之间的关系十分必要。

HBV DNA与HBeAg阳性均为HBV传染性及复制程度较高的指标。本研究结果显示，HBeAg阳性患者HBV DNA阳性率与平均拷贝数高于HBeAg阴性患者，特别是合并HBsAg阳性的患者，HBV DNA阳性率与平均拷贝数更高，HBeAg阳性与HBV DNA水平呈正相关 （P＜0.05），HBeAg阳性患者病毒传染性更强，应引起重视。但亦有关于HBeAg阳性而HBV DNA呈阴性的报道［7］，可能为之前表达的HBeAg尚未完全降解，导致病毒DNA复制低水平时，HBeAg测定值仍较高［8］。HBsAg是已感染HBV的标志，急性期诊断敏感度高，但在抗病毒治疗期间无法以此单独评估HBV DNA情况。本研究结果显示，HBsAg阳性患者HBV DNA阳性率与HBsAg阴性患者相当，但平均DNA拷贝数高于HBsAg阴性患者，HBsAg阳性与HBV DNA水平呈正相关 （P＜0.05）。本研究中，亦有 6例HBsAg阴性患者HBV DNA呈阳性，可能为S基因变异造成抗原位点改变而引起HBsAg阴性的隐匿性乙肝［9］，尚有待进一步证实，不过对于此类患者，联合检测HBV DNA的意义重大。

综上所述，HBeAg与HBsAg能在一定程度上反映HBV DNA复制水平，特别是高水平HBeAg，与HBV DNA密切相关，联合检测对疾病诊断、传染预防及预后评估有重要价值。