滴通鼻炎喷涂凝胶剂质量标准的研究

吕敏王云王玉霞孙静莹王婷周霞万军

（西南交通大学生命科学与工程学院，四川 成都610031）

滴通鼻炎喷涂凝胶剂由蒲公英、细辛、黄芩、麻黄、苍耳子、石菖蒲、白芷、辛夷8 味药组成，是在滴通鼻炎水基础上改剂型而成，主要治疗伤风鼻塞、鼻窒、鼻鼽、鼻渊等症［1］。 原剂型收载于《部颁药品标准》中，其质量标准薄层鉴别项只有白芷，尚无含量测定项。 为了更好控制滴通鼻炎喷涂凝胶剂质量标准，本研究增加了蒲公英、黄芩、麻黄、石菖蒲的薄层鉴别方法；采用HPLC 法测定盐酸麻黄碱与黄芩苷的质量分数，对制剂进行质量控制。

1 仪器与试药

安捷伦1260 液相色谱仪（美国安捷伦有限公司）；PWC-124 电子分析天平分析天平（艾德姆衡器武汉有限公司，d＝0.000 1 g）；KH19A 离心机（湖南凯达离心机厂）；SB-25-12D 超声波清洗机（宁波新芝生物科技有限公司）。

蒲公英对照药材（批号：121195-201503）、黄芩对照药材（批号：120955-201309）、麻黄对照药材（批号：121051-201606）、 石 菖 蒲 对 照 药 材（批 号：121098-201105）、白芷对照药材（批号：120945-201309）均购自中国食品药品检定研究院；咖啡酸对照品（批号：MUST-17032010，质量分数99.48%）、黄芩苷对照品（批号：MUST-18010410，质量分数98.58%）、盐酸麻黄碱对照品（批号： 171241-201508，质量分数99.7%）、欧前胡素对照品（批号：MUST-17030311，质量分数99.27%）、异欧前胡素对照品（批号：MUST-17030420，质量分数99.93%）均购自成都曼斯特生物科技有限公司。

硅胶G（青岛海浪硅胶干燥剂有限公司）；甲醇、乙腈为色谱纯（成都科龙化学试剂有限公司）；其他试剂均为分析纯。

滴通鼻炎喷涂凝胶剂为自制（批号：180309、180310、180311）。 制备方法：分别取蒲公英、黄芩、白芷、苍耳子、细辛、石菖蒲、辛夷、麻黄各120、60、25、50、5、60、25、50 g，加10 倍量水，水蒸气蒸馏，收集馏出液约200 mL，备用。 药渣与蒲公英、黄芩加20 倍量水煎煮2 次，每次1.5 h。 合并煎液，滤过，滤液浓缩至稠膏状（密度1.10 ～1.35 g／mL），加乙醇4倍量，搅匀，静置过夜。 取上清液回收乙醇，加入白芷等蒸馏液，加入200 g 泊洛沙姆407、30 g 泊洛沙姆188、50 mL 甘油，2 g 苯甲酸钠，pH 调至5.5～6.5，加水至1 000 mL，分装，即得。

2 方法与结果

2.1 薄层色谱鉴别

2.1.1 蒲公英的薄层鉴别取咖啡酸对照品适量，用甲醇制成0.5 mg／mL 的对照品溶液。 取滴通鼻炎喷涂凝胶剂10 mL，加5%（体积分数，下同）甲酸-甲醇溶液20 mL，超声20 min，滤过，蒸干。 残渣加水10 mL溶解，乙酸乙酯萃取2 次，每次20 mL，合并乙酸乙酯萃取液，蒸干。 残渣加1 mL 甲醇溶解，即为供试品溶液［2］。 取蒲公英对照药材1 g 和不含蒲公英药材的阴性样品10 mL，同法制成对照药材溶液和阴性对照溶液。 吸取上述溶液各10 μL，分别点于同一硅胶G 薄层板上，展开剂为乙酸丁酯-甲酸-水（体积比7 ∶2.5 ∶2.5）的上层溶液。 展开、取出、晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视［2］。 供试品溶液在与对照品、对照药材相应的位置上显相同颜色的荧光斑点，阴性无干扰，见图1。

图1 蒲公英鉴定的TLC 色谱图Figure 1 TLC Chromatogram of Dandelion

2.1.2 黄芩的薄层鉴别取黄芩苷对照品适量，加甲醇制成1 mg／mL 的对照品溶液。 取滴通鼻炎喷涂凝胶剂10 mL，加入乙酸乙酯-甲醇（体积比3 ∶1）溶液30 mL，加热回流30 min，冷却，过滤，蒸干。残渣加甲醇1 mL 溶解，即为供试品溶液。分别取黄芩对照药材2 g 和不含黄芩的阴性样品10 mL，分别同法制成对照药材溶液和阴性对照溶液。吸取上述溶液各10 μL，分别点于同一硅胶G 薄层板上，展开剂为乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水（体积比5 ∶3 ∶1 ∶1）。展开、取出、晾干，喷以1%FeCl3乙醇溶液［3］。供试品溶液在与对照品、对照药材相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性无干扰，见图2。

图2 黄芩鉴定的TLC 色谱图Figure 2 TLC Chromatogram of Scute-llaria baicalensis

2.1.3 麻黄的薄层鉴别取盐酸麻黄碱对照品适量，加甲醇制成1 mg／mL 的对照品溶液。取滴通鼻炎喷涂凝胶剂10 mL，加入浓氨试液1 mL，加三氯甲烷30 mL，加热回流1 h，过滤，蒸干。残渣加入甲醇1 mL溶解，即为供试品溶液。取麻黄对照药材1 g 和缺麻黄阴性样品10 mL，分别同法制备对照药材溶液和阴性对照溶液。吸取上述溶液各10 μL，分别点于同一硅胶G 薄层板上，展开剂为三氯甲烷-甲醇-浓氨试液（体积比20 ∶5 ∶0.5）。 展开、取出、晾干，喷以茚三酮试液，在105 ℃下加热至斑点显色清晰［4］。 供试品溶液在与对照品、对照药材相应的位置上显相同颜色的荧光斑点，阴性无干扰，见图3。

图3 麻黄鉴定的TLC 色谱图Figure 3 TLC Chromatogram of Ephedra

2.1.4 石菖蒲的薄层鉴别取滴通鼻炎喷涂凝胶剂溶液10 mL，加石油醚（60 ～90 ℃）30 mL，加热回流1 h，放冷，分取石油醚液，蒸干。 残渣加石油醚1 mL溶解，即为供试品溶液。 取石菖蒲对照药材0.2 g和不含石菖蒲的阴性样品，同法制备对照药材溶液和阴性对照溶液。 吸取上述溶液各10 μL，分别点于同一硅胶G 薄层板上，展开剂为石油醚（60～90 ℃）-乙酸乙酯（体积比4 ∶1）。 展开、取出、晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视。 供试品溶液在与对照药材相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性无干扰，见图4。

2.1.5 白芷的薄层鉴别分别取欧前胡素对照品、异欧前胡素对照品适量，加乙酸乙酯制成欧前胡素对照品、异欧前胡素质量浓度分别为1 mg／mL 的混合对照品溶液。 取滴通鼻炎喷涂凝胶剂10 mL，加乙醚30 mL，浸泡1 h，时时振摇，过滤，蒸干。 残渣加乙酸乙酯l mL 溶解，即为供试品溶液。 取白芷对照药材0.5 g 和缺白芷的阴性样品10 mL，同法制备对照药材溶液和阴性对照溶液。 吸取上述溶液各10 μL，分别点于同一硅胶G 薄层板上，展开剂为石油醚（30～60 ℃）-乙醚（体积比3 ∶2）。 展开、取出、晾干，置紫外灯（365 nm）下检视［5］。 供试品溶液在与对照品、对照药材相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性无干扰，见图5。

图4 石菖蒲鉴定的TLC 色谱图Figure 4 TLC Chromatogram of Acorus tatarinowii

图5 白芷鉴定的TLC 色谱图Figure 5 TLC Chromatogram of Angelica dahurica

2.2 黄芩苷质量浓度的测定

2.2.1 对照品溶液的制备取黄芩苷对照品20.0 mg，精密称定。 加甲醇制成每1 mL 含黄芩苷64 μg 的溶液，即得。

2.2.2 供试品溶液的制备精密量取滴通鼻炎喷涂凝胶剂5.0 mL，至50 mL 容量瓶中，加入甲醇30 mL，超声提取30 min，冷却，定容，即得。

2.2.3 阴性对照溶液的制备取缺黄芩的阴性样品5.0 mL，按“2.2.2”项下方法制备，即得。

2.2.4 色谱条件与专属性试验色谱柱：AlltimaTMC18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm），流动相：甲醇-1%乙酸（体积比50 ∶50），柱温：30 ℃，检测波长：278 nm，进样量：10 μL，流速：1 mL／min。 分别精密吸取黄芩苷对照品、供试品、黄芩阴性对照溶液10 μL，依法测定，理论板数按黄芩苷峰计算应不低于3 000；阴性对照无干扰。 见图6。

图6 黄芩专属性试验的HPLC 色谱图Figure 6 HPLC Chromatograms of scutellaria specific test

2.2.5 方法学考察

2.2.5.1 线性范围考察取质量浓度为65.28 μg／mL

的黄芩苷对照品溶液，分别精密吸取1、2、4、8、16 μL进样。 按“2.2.4”项下色谱条件进行分析，测定峰面积，以黄芩苷进样量X1对峰面积Y1进行线性回归，得回归方程Y1＝3．175 1×103X1＋7．762 5（r1＝1），黄芩苷在0.065 28 ～1.044 48 μg 呈良好的线性关系。

2.2.5.2 精密度试验精密吸取质量浓度65.28 μg／mL 的黄芩苷对照品溶液，按“2.2.4”项下色谱条件连续进样6 次，测定峰面积，经计算其RSD 为1.55%，表明该仪器精密度良好。

2.2.5.3 稳定性试验取滴通鼻炎喷涂凝胶剂（批号：180310）供试品溶液，按“2.2.4”项下色谱条件分别于0、2、4、8、16 h 进样，测定峰面积。 计算得黄芩苷的RSD 值为1.20%，表明供试品溶液在16 h 内测定稳定性良好。

2.2.5.4 重复性试验精密量取滴通鼻炎喷涂凝胶剂（批号：180310）6 份，每份5.0 mL，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.2.4”项下色谱条件测定，测得黄芩苷平均质量分数为0.199 02 mg／mL，RSD 值为1.61%，表明方法重复性良好。

2.2.5.5 加样回收率试验取滴通鼻炎喷涂凝胶（批号为180310，黄芩苷质量浓度为198.6 μg／mL）6份，各2.5 mL，分别置于6 个50 mL 容量瓶中，分别加入质量浓度65.28 μg／mL 的对照品溶液7.6 mL，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.2.4”项下色谱条件测定峰面积，按回归方程计算得平均回收率为101.13%，RSD 值为2.06%，表明本方法加样回收率良好，见表1。

表1 滴通鼻炎喷涂凝胶剂中黄芩苷加样回收率试验结果Table 1 Results of recoveries of baicalin in Ditong Biyan spray gel （n＝6）

2.2.6 样品质量浓度的测定分别取3 批滴通鼻炎喷涂凝胶剂适量，精密称定，分别按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液。 分别精密吸取对照品、供试品溶液各10 μL，按“2.2.4”项下色谱条件进样，测定峰面积，以外标法计算其质量分数。 测得3 批样品中黄芩苷平均质量浓度分别为197.4、198.6、198.7 μg／mL（n＝2）。

2.3 盐酸麻黄碱质量浓度的测定

2.3.1 对照品溶液的制备取盐酸麻黄碱对照品20.0 mg，精密称定。 加甲醇制成每1 mL 含盐酸麻黄碱40 μg 的溶液，即得。

2.3.2 供试品溶液的制备精密量取滴通鼻炎喷涂凝胶剂5.0 mL，至50 mL 容量瓶中，加入甲醇30 mL，超声15 min，冷却，定容，即得。

2.3.3 阴性对照溶液的制备取缺麻黄的阴性样品5.0 mL，按“2.3.2”项下方法制备，即得。

2.3.4 色谱条件与专属性试验色谱柱：AlltimaTMC18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm），流动相：乙腈-0.1%H3PO4（体积比5 ∶95），柱温：35 ℃，检测波长：210 nm，进样量：10 μL，流速：1 mL／min。 分别精密吸取盐酸麻黄碱对照品、供试品、麻黄阴性样品溶液10 μL，依法测定，理论板数按黄芩苷峰计算应不低于3 000；阴性对照无干扰。 见图7。

2.3.5 方法学考察

2.3.5.1 线性范围考察取质量浓度42.2 μg／mL的盐酸麻黄碱对照品溶液，分别精密吸取1、2、4、8、16 μL 进样，按“2.2.4”项下色谱条件进行分析，测定峰面积。 以盐酸麻黄碱进样量（X2）对峰面积（Y2）进行线性回归，得回归方程Y2＝1．612 7×103X2＋1．262 5，r2＝0.999 9，盐酸麻黄碱在0.042 2～0.675 2 μg呈良好的线性关系。

图7 麻黄专属性试验的HPLC 色谱图Figure 7 HPLC chromatograms of Ephedra specific test

1.盐酸麻黄碱； A.对照品溶液； B.供试品溶液； C.麻黄阴性对照溶液。

2.3.5.2 精密度试验精密吸取质量浓度42.2 μg／mL的盐酸麻黄碱对照品溶液，按“2.2.4”项下色谱条件连续进样6 次测定峰面积，经计算其RSD 为1.15%，表明该仪器精密度良好。

2.3.5.3 稳定性试验取滴通鼻炎喷涂凝胶剂（批号：180310）供试品溶液，按“2.2.4”项下色谱条件分别于0、2、4、8、16 h 进样，测定峰面积。 计算得盐酸麻黄碱的RSD 值为1.98%，表明供试品溶液在16 h内测定稳定性良好。

2.3.5.4 重复性试验精密量取滴通鼻炎喷涂凝胶剂（批号：180310）6 份，每份5.0 mL，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.2.4”项下色谱条件测定，测得盐酸麻黄碱平均质量浓度为0.112 5 mg／mL，RSD 值为2.44%，表明方法重复性良好。

2.3.5.5 加样回收率试验取滴通鼻炎喷涂凝胶（批号为180310，盐酸麻黄碱质量浓度为113.4 μg／mL）6 份，各2.5 mL，分别置于6 个50 mL 容量瓶中，分别加入盐酸麻黄碱质量浓度为42.2 μg／mL 的对照品溶液6.6 mL，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.2.4”项下色谱条件测定盐酸麻黄碱峰面积。 根据回归方程计算得平均回收率为97.74%，RSD值为2.85%，表明本方法加样回收率良好，见表2。

表2 滴通鼻炎喷涂凝胶剂中盐酸麻黄碱加样回收率试验结果Table 2 Results of recoveries of ephedrine hydrochloride in Ditong Biyan spray gel

2.3.6 样品质量浓度的测定分别取3 批滴通鼻炎凝胶适量，精密称定，分别按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液。 分别精密吸取对照品、供试品溶液各10 μL，按“2.2.4”项下色谱条件进样，测定峰面积，以外标法计算其质量分数。 测得3 批样品中盐酸麻黄碱平均质量浓度分别为113.5、113.4、114.4 μg／mL（n＝2）。

3 讨论

3.1 剂型选择

原剂型滴通鼻炎水给药次数多、滞留时间短，为了提高药物利用度，在此基础上改为滴通鼻炎喷涂凝胶剂。 喷涂凝胶剂为温敏凝胶，在非生理条件下为液体，使用方便快捷，给药后在给药部位形成凝胶，增加药物在鼻腔滞留时间，降低给药次数，延长给药时间间隔，从而提高生物利用度。

3.2 薄层鉴别

原剂型在部颁标准的质量控制中只是用薄层色谱法做了白芷的定性鉴别，尚无质量分数测定的控制方法，为更好控制产品质量，保证疗效，本研究建立了滴通鼻炎喷涂凝胶处方中蒲公英、黄芩、麻黄、石菖蒲和白芷5 味药的薄层色谱鉴别方法，结果阴性无干扰，拟纳入质量标准，苍耳子的薄层色谱鉴别，斑点不清晰，故未列入质量标准。

3.3 质量分数测定指标成分的选择

方中蒲公英清热解毒、散结消肿［6］；细辛祛风邪、通鼻窍、止痛［7］；苍耳子散风、通窍止痛［8］；辛夷宜肺通窍；黄芩清热燥湿、泻火解毒［9］；麻黄宜肺通窍；白芷通窍排脓；石菖蒲化湿通窍。 诸药合用，共奏祛风清热，宜肺通窍之功［10-11］。 蒲公英主要成分为咖啡酸，HPLC 法测定咖啡酸质量分数时，3 批样品中咖啡酸的平均质量分数为18.3 μg／mL，考虑咖啡酸质量分数较低，故未将其测定列入质量标准；麻黄中的盐酸麻黄碱具有抗感染、抗过敏、收缩血管的作用［12］；黄芩中黄芩苷有抗氧化、抗过敏作用［13］；其他药物处方量少，难以检测。 综上，选择盐酸麻黄碱、黄芩苷作为质量分数测定的指标，方法学考察表明黄芩苷和盐酸麻黄碱的专属性、线性、重复性、稳定性、回收率均符合要求，适合滴通鼻炎喷涂凝胶剂的质量标准控制。