黑木耳中五氯硝基苯和氯氰菊酯农药残留检验结果满意的关键分析

曾永明 凌经昌 陈松武 周丽珠 罗玉芬 谷瑶

【摘 要】文章对保证农产品农药残留能力验证实验的关键要素进行分析，结果表明：提取步骤的滤心分离时间要严格控制在5 min以上，浓缩步骤的水浴温度要严格按照方法要求的温度，氮吹切记不要吹得太干，要在氮吹仪旁边实时观察，吹到潮乎乎为宜，SPE小柱的活化平衡要充分，上样时液面不能流干，上样后尽可能流干再洗脱，最后定容2 mL时要准确;检测结束后，对结果进行验证很重要，采用盲样的空白基质加标画标准曲线的办法判断结果的准确性，得出真值，上报能力验证结果，一个月后有Z值反馈，结果为满意。

【关键词】能力验证;前处理;净化;基质加标

【中图分类号】S7 【文献标识码】A 【文章编号】1674-0688（2020）12-0061-03

实验室能力验证是指认可机构为确保实验室维持较高的校准和检测水平而对其能力进行考核、监督和确认的一种活动，对于提升实验室检测能力有重要的意义，是评价实验室检测结果真实水平的有效手段，也是实验室质量管理体系持续改进和不断提高的有效措施。

本文就如何保证农产品农药残留能力验证实验结果满意的关键点进行探讨和分析。能力验证的项目多是蔬菜中农药残留的检测[1]，一般采用固相微萃取技术-气相色谱法进行检测[2-12]，为了保证黑木耳作为安全、营养、保健的食用林产品[3]，要想通过农产品黑木耳中五氯硝基苯和氯氰菊酯农药残留的能力验证，保证能力验证的结果值满意，样品前处理有几点要注意：提取步骤的滤心分离时间要严格控制在5 min以上，浓缩步骤的水浴温度要严格按照方法要求的温度，氮吹切记不要吹得太干，要在氮吹仪旁边实时观察，吹到潮乎乎为宜，SPE小柱的活化平衡要充分，上样时液面不能流干，上样后尽可能流干再洗脱，最后定容2 mL要准确。检测结束后，对结果进行验证，采用盲样的空白基质加标画标准曲线的办法，分析判断结果的准确性，得出真值，上报能力验证结果。

1 实验部分

1.1 仪器与试剂

1.1.1 仪器与设备

MS 3 basis旋涡混合器（IKA仪器有限公司），TD5A-WS离心机（湘仪离心机仪器有限公司），VM24固相萃取装置（博纳艾杰尔科技有限公司），WNV-10G氮吹仪（博纳艾杰尔科技有限公司），GC-2010Plus气相色谱仪（日本岛津公司），配备电子捕获ECD检测器，色谱柱：SH-Rtx-1（30 m×0.25 mm×0.25 μm毛细色谱柱）。

1.1.2 试剂与材料

正己烷（色谱纯）、丙酮（色谱纯）、氯化钠（分析纯）（140 ℃烘烤4 h）、无水硫酸钠（分析纯，650 ℃灼烧4 h）。净化小柱用安谱公司的CNWBOND Florisil 1 g、6 mL的弗罗里析柱。2种加标农药标准品：五氯硝基苯（Pentachloronitrobenzene）、氯氰菊酯（Cypermethrin）购于农业部环境保护科学监测研究所，浓度均为100μg/mL。

1.2 实验方法

采用丙酮和正己烷提取试样中的五氯硝基苯和氯氰菊酯农药，提取溶液经滤心、浓缩、净化、再浓缩，最后用正己烷定容，用气相色谱仪的电子捕获检测器（ECD）进行检测。用外标法进行定性和定量[1]。

1.3 混合标准工作溶液的配置

根据甲基对硫磷和水胺硫磷的标准物质证书的定值含量进行配置，先确定甲基对硫磷和水胺硫磷标准溶液线性范围，它会影响定量结果的准确性和线性系数。本实验选择4个浓度点，考核样品的浓度最好在曲线的中点，以便定量准确。具体线性范围根据检测考核样品粗筛浓度确定。

分别吸取上述农药标准溶液100μL于10 mL容量瓶中，用正己烷稀释定容，配制成浓度为1μg/mL的混合工作标准溶液，保存在4 ℃的冰箱中。检测时，通过稀释配置共4个浓度点的混合标准工作溶液，随考核样品进行气相色谱检测。

1.4 色谱条件

毛细色谱柱：SH-Rtx-1（30 m×0.25 mm×0.25 μm）;设定起始温度：180 ℃保持8 min，以15 ℃/min的速度升到220 ℃，保持1 min，再以30 ℃/min的速度升至250 ℃，保持10 min;进样体积：1μL;进样口温度：250 ℃，分流进样，分流比为1∶50;检测器温度：280 ℃;氮气流速：30 mL/min;柱流速：2 mL/min。

1.5 樣品的提取

本次能力验证的样品为已粉碎的干黑木耳样品，由能力验证组织机构加入五氯硝基苯和氯氰菊酯农药，本实验室收到1个黑木耳考核样品及1个黑木耳空白样品，样品重量各约10 g。

分别称取黑木耳考核样品和黑木耳空白样品各1.0 g于50 mL离心管中，加入9 mL蒸馏水复原至黑木耳鲜样状态，然后加入5.00 mL丙酮，涡旋1 min，加入15 mL正己烷和1～2 g氯化钠，盖上盖子，MS 3 basis旋涡混合器上涡旋3 min，将离心管放入离心机，在4 000 r/min离心5 min，吸取上层清液到另一个50 mL离心管中;再加入10 mL正己烷，用MS3basis旋涡混合器重复涡旋提取3 min，同样在4 000 r/min离心5 min，合并两次提取液，在40 ℃水浴氮吹浓缩至2 mL，待净化。

1.6 提取液的净化和定容（见表1）

向SPE小柱（1g，6mL）中填充高约2 cm的无水硫酸钠，放入VM24固相萃取装置中进行固相萃取操作。在固相萃取柱中，以1.0 mL/min流速加入正己烷+丙酮（9+1）、体积为6.0 mL润洗SPE小柱进行活化。以1.5 mL/min 流速加入待净化样品提取溶液于SEP小柱中进行净化。洗脱：以1.5 mL/min 流速，依次用2.5mL正己烷+丙酮（9+1）进行洗脱，收集洗脱液。将收集的洗脱液在水浴40 ℃下氮吹浓缩至近干，用正己烷溶解定容为2.0 mL，过0.2μm滤膜，装瓶待测。

1.7 上机检测

进行气相色谱上机检测时，设置色谱柱温为程序升温：开始温度设定为180 ℃，保持8 min，以15 ℃/min的速度升至220 ℃，保持1 min，再以30 ℃/min的速度升至250 ℃，保持10 min;进样口温度为250 ℃;检测器（ECD）温度为280 ℃;载气（高纯氮≥99.999%）流速为30 mL/min;采用分进样，分流比为1∶50;进样量为1μL。

用五氯硝基苯和氯氰菊酯配制成浓度各为50μg/L的混合标准溶液，进行色谱分析，保留时间依次为五氯硝基苯（Pentachloronitrobenzene）9.346 min、氯氰菊酯（Cypermethrin）28.055 min（如图1所示）。

2 检测结果与数据分析

2.1 检测结果

五氯硝基苯农药标准曲线如图2所示。氯氰菊酯农药标准曲线如图3所示。黑木耳考核样品分析结果见表2。

2.2 判断结果准确性

当上述结果出来后，需要验证这些结果的准确性，通常会采用加标回收率的办法，蔬菜中农药残留多有基质效应，有可能得出的数据比实际加标量要大得多，本实验采用空白基质做加标标准曲线验证。

黑木耳空白基质样约10 g，称取1.0 g样品后，还剩9 g左右，称4个1.0 g黑木耳空白基质样品，分别加入上文的标准工作溶液100、150、200、300μL，严格按照上文前处理方法重做一遍，得出空白基质加标标准曲线，再重新计算检测结果。

2.3 上报结果并通过

根据以上空白基质加标标准曲线计算检测结果，分析判断结果在合格范围内，上报能力验证结果：五氯硝基苯含量为0.10（mg/kg），氯氰菊酯含量为0.79（mg/kg）;1个月后有Z值反馈，结果为满意。

3 讨论

（1）要想通过黑木耳中农药残留的能力验证，样品前处理有几点要注意：提取步骤的滤心分离时间要严格控制在5 min以上，浓缩步骤的水浴温度要严格按照方法要求的温度，氮吹切记不要吹得太干，要在氮吹仪旁边实时观察，吹到潮乎乎为宜，SPE小柱的活化平衡要充分，上样时液面不能流干，上样后尽可能流干再洗脱，最后定容2 mL要准确。

（2）试验结束后，验证结果很重要，不同的蔬菜有不同的农药残留，基质效应都不一样，回收率也不一样，要进行粗筛，首先得出农药品的大概含量，然后选择与盲样品种一样的蔬菜里加标，这时采用盲样的空白基质加标画标准曲线是最好的办法。

（3）为防止待测液中五氯硝基苯和氯氰菊酯衰减，在前处理结束后样品需及时上机检测。上机测定顺序：先测试剂空白和样品空白，再由低浓度到高浓度依次测定标准溶液，然后加测一次试剂空白，最后测定考核样品。每个样品必须上机平行测定两次，以便降低因仪器不稳定造成的误差。结果取平均值，忌讳人为剔除平行性差的样品结果。

（4）认真分析样品检测全过程及色谱图、计算结果等，细致比较试剂空白和样品空白基质的色谱图，判别考核样品中添加浓度含量低的农药，防止出现漏判、误判，确保本次能力验证结果满意。

参 考 文 献

[1]NY/T 761—2008，蔬菜和水果中有机磷、有机氯、拟除虫菊酯和氨基甲酸酯类农药多残留的测定[S].

[2]GB/T 5009.146—2008，植物性食品中有机氯和拟除虫菊酯类农药多种残留量的测定[S].

[3]GB/T 5009.19—2008，食品中有机氯农药多组分残留量的测定[S].

[4]何继东.固相萃取-定量浓缩在蔬菜水果农药残留检测中的应用[J].安徽农学通报，2016，22（1）：75-76.

[5]陆英洲，陆德胜.固相萃取-气相色谱法检测食品中农药残留方法的研究[J].中国卫生检验杂志，2011，21（9）：2185-2186.

[6]翟碩莉，张秀丰.固相萃取-气相色谱法检测桃中多种农药残留量[J].衡水学院学报，2018，20（1）：8-12.

[7]孟玲芝，刘坤，刘荣光，等.固相萃取技术在农药残留检测中的应用[J].吉林农业，2018（12）：55.

[8]陈华凤，陈霞，刘刚，等.固相萃取技术在茶叶农药残留检测中的应用[J].四川农业科技，2018（6）：45-46.

[9]段丽村，周建于，李佳欣，等.固相萃取-气相色谱法检测血清中有机氯农药残留的研究[J].分析测试学报，2016，35（12）：1606-1610.

[10]曾永明，陈松武，周丽珠，等.固相萃取-气相色谱法测定林业灌溉水中、滴滴涕残留量[J].企业科技与发展，2019，455（9）：144-145.

[11]曾永明，秦荣秀，陈明江，等.食材型柠檬香茅6种有机磷农残检测结果分析[J].食品工业，2019，38（9）：301-303.

[12]曾永明，陈松武，罗玉芬，等.麻竹笋6种有机磷农残检测结果分析[J].企业科技与发展，2017，431（9）：54-56.

[13]梁明玉，罗先群，黄雪星.茶枝屑栽培黑木耳试验初探[J].广西林业科学，2019，48（3）：404-407.