猪病诊断和防治中PCR技术的应用研究

王庆伟 王得明

在我国牲畜饲养中，猪的饲养占据非常大的比重，猪肉也是人们生活中常见的食用肉类。但是，由于饲养方式不科学等原因，在猪的饲养中猪病的发生率越来越大，对养猪业和人们的食品安全造成了非常不利的影响。而且流行性猪病大多都是典型的、多种病毒混合感染的，从症状上看，没有明显的特征，这就给猪病的防治工作带来了很大的困难，而PCR技术的应用则为猪病的诊断和防治工作提供更多的防治措施。

1 PCR技术概述

PCR技术在猪病的诊断和防治工作中具有非常广泛的应用。PCR技术在猪病诊断和防治工作的过程中，逐渐表现出特异性较高、操作简单和扩增速度快的优势。PCR技术在猪病的诊断和防治工作中可以使目的基因在短时间内进行快速的增扩，这样能够快速的对微量基因进行检测。PCR技术在猪病诊断和防治工作的应用中，也在不断的创新和完善，根据猪病发展的现状和PCR技术的应用现状，PCR技术逐渐发展出很多新的技术，这些由PCR技术发展而来的新技术在猪病诊断和防治工作中发挥着非常重要的作用。

2 PCR技术在猪病诊断和防治中的应用

2.1 PCR技术在猪圆环病毒2型的诊断和防治中的应用

PCR技术在猪圆环病毒2型的诊断和防治工作中，通过在基因库中猪圆环病毒的基因序列ORF2进行扩增引物的设计，将猪圆环病毒2型的临床分离基因作为模板基因，再对反应的条件进行筛选，形成了一种能够有效监测猪圆环病毒2型的PCR方法。这种PCR方法具有很强的特异性，通过这种PCR方法对猪圆环病毒2型进行检测和基因扩增，发现目的基因的片段长度为559bp （碱基），而通过这种PCR方法在相同的条件下对其它猪病感染病毒进行检测发现结果为阴性。PCR技术在猪圆环病毒2型的诊断和防治中具有非常大的应用价值，能够对猪病的诊断和防治工作提供有效的措施和方法。

2.2 PCR技术在猪瘟病毒诊断和防治中的应用

猪瘟病毒是引起猪病的常见的病毒类型，猪瘟病毒引起的猪病非常严重，影响范围非常广，对我国养猪业造成了严重的经济损失。我国在猪瘟病毒的防治中采取了很多方法和措施，但是，效果不够明显，猪瘟病毒依然经常出现并迅速的传播和蔓延。当前，很多相关的专业研究人员思考从引物的设计上寻找方法，通过引物设计建立用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）技术来对猪瘟病毒进行检测。这种方法能够对猪瘟病毒进行核酸序列的扩增，这种核酸序列的扩增表现出明显的特异性，能够实现病毒区分，从而解决了人们一直以来比较困扰的问题。经过多次的实验表明这种方法特异性强、可靠性高，在猪瘟病毒的诊断上能够提供很好的方法。

2.3 PCR技术在母猪繁殖障碍与呼吸综合征诊断和防治中的应用

母猪繁殖障碍与呼吸综合征主要在母猪和幼猪中发病。通常表现为，母猪出现流产，产出木乃伊胎和弱仔，幼猪出现呼吸道症状，幼猪的死亡率很高。這种猪病的发生非常普遍，在我国这种猪病已成为二类传染病，对母猪的正常繁殖和幼猪的正常生长都有非常严重的恶劣影响，对我国养猪业造成了巨大的经济损失。在对这种猪病进行诊断时要迅速诊断，如果使用常规的诊断方法就会因为繁琐的诊断操作增加诊断的时间，从而将这种猪病与猪瘟、细小病毒等混淆，诊断结果就会出错。我国科研人员建立了利用反式聚合酶链式反应的方法来对这种猪病进行检测。在不断的探索中逐渐建立了检测这种猪病的PCR方法。同时，也探索出了一些在使用这种PCR方法进行猪病检测的注意事项。一方面，在陈旧的样品中提取的RNA很容易出现降解反应，在电泳实验中，新鲜的样品会出现3条明显的RNA，而且这3条RNA的外形也是比较完整的。另一方面，提取RNA之后，进行cDHA的反转录，在一定环境下经过一定的时间，RNA就会出现降解反应。

2.4 PCR技术在混合感染病毒诊断和防治中的应用

PCR技术在混合感染病毒诊断和防治中的应用主要是应用多重PCR技术，这种多重PCR技术能够将2种以上的病毒引物加入到统一反应体系中，将这种多重PCR技术与常规PCR技术一起应用到病毒的检测中，能够快速、准确的检测2种或者3种以上的病原菌，同时，多重PCR技术具有高敏感度的特点，这些优点在常规的PCR技术中所没有。混合感染病毒在猪病中非常普遍，如果兽医仅凭借自身的诊断经验进行诊断会出现很多的错误，从而错过最佳诊断的时间。所以，有必要在混合感染病毒的诊断中推广多重PCR技术。

猪病是对养猪业造成巨大经济损失的主要原因，当前，我国猪病的发生率越来越高，在养猪业中对猪病进行诊断和防治是十分必要的。而常规的猪病诊断和防治技术在猪病诊断和防治中效果不够明显，而PCR技术能够在猪病的诊断和防治工作中发挥重要的作用，所以，对PCR技术进行研究是十分必要的。