猪口蹄疫O型、A型二价合成肽疫苗免疫抗体的检测评估

口蹄疫（FMD）是由口蹄疫病毒引起的一种急性、热性、高度接触性传染性疾病，由于其潜伏期短、发病急、传播迅速、宿主谱系广、危害严重，因此世界各国均倍受关注。世界动物卫生组织（OIE） 将其列为A类动物传染病之首，我国农业农村部将其列为一类动物传染病[1]。口蹄疫病毒属于小RNA病毒科、口蹄疫病毒属，已证实有O、 A、 C、 Asia1、SAT1、 SAT2和SAT3共7个血清型，而各血清型之间无交叉免疫保护。因此口蹄疫疫情的发生会造成严重的经济损失和重大的政治影响[2]。我国在2013年之前猪群中流行猪O型口蹄疫病毒，2013年2月在广东茂名报道了第一起猪的A型口蹄疫疫情[3,4]，此后根据国内猪口蹄疫的流行形势，国内口蹄疫研发机构及口蹄疫疫苗企业开始研发各类猪口蹄疫O型、A型二价疫苗。猪口蹄疫O型、A型二价合成肽疫苗（多肽2700+2800+MM13）研发成功并获得农业农村部生产批准文号后，2019年在我省开始使用。

本研究旨在观察猪口蹄疫O型、A型二价合成肽疫苗（多肽2700+2800+MM13）的注苗反应，并进一步了解疫苗首免及二免后使用不同的抗体检测试剂盒来评价产生抗体的整体水平及合格率[5-7]，以期为今后猪O型和A型口蹄疫的防控及评价提供科学的参考依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试验疫苗猪口蹄疫O型、A型二价合成肽疫苗（多肽2700+2800+MM13）：国内某口蹄疫疫苗生产企业，批号：20190102。

1.1.2 试验动物选取吉林省2个规模化猪场60日龄左右的仔猪40头（每个猪场选取20头）。

1.1.3 检测试剂盒猪口蹄疫O型VP1结构蛋白ELISA抗体检测试剂盒，郑州某生物技术有限公司（简称ZZ），批号：20191001。口蹄疫病毒O型抗体检测试剂盒，北京某科技有限公司（简称BJ），批号：107HS803。猪口蹄疫A型VP1结构蛋白ELISA抗体检测试剂盒，郑州某生物技术有限公司（简称ZZ），批号：20190101。口蹄疫病毒A型抗体检测试剂盒，北京某科技有限公司（简称BJ），批号：107HS820。

1.2 试验方法

1.2.1 免疫接种方法采用耳根后深层肌肉注射，疫苗首次免疫后间隔30d加强免疫一次，免疫剂量均为1mL/头。

1.2.3 血样采集第1次：免疫前采血，检测母源抗体，确定首免时间；第2次：首次免疫后30d采血，同时加强免疫一次；第3次：加强免疫后15d采血；第4次：加强免疫后45d采血；第5次：加强免疫后90d采血；第6次：加强免疫后120d采血。每次采集血样40份。

1.2.4 抗体检测分别采用购自郑州和北京的试剂盒进行O型、A型免疫抗体检测，结果按说明书进行判定。

2 试验结果

2.1 临床观察结果每次接种疫苗后连续观察5d，首次免疫后和加强免疫后，40头猪精神状态均良好，采食量正常，未出现免疫副反应。

2.2 抗体检测结果

2.2.1 口蹄疫O型抗体检测结果猪口蹄疫O型VP1结构蛋白ELISA抗体检测试剂盒（ZZ）的检测结果显示，首免后30d口蹄疫O型抗体合格率达到97.5%，加强免疫后至120d时抗体合格率仍维持在100%，具体检测结果见表1。

表1 不同时间O型抗体检测结果（ZZ）

表2 不同时间O型抗体检测结果（BJ）

2.2.2 口蹄疫A型抗体检测结果猪口蹄疫A型VP1结构蛋白ELISA抗体检测试剂盒（ZZ）的检测结果显示，首免后30d口蹄疫A型抗体合格率达到95%，加强免疫后至120d时抗体合格率能够达到95%以上，具体检测结果见表3。

表3 不同时间A型抗体检测结果（ZZ）

口蹄疫病毒A型抗体检测试剂盒（BJ）的检测结果显示，首免及二免后抗体合格率仅有10%～30% ，具体检测结果见表4。

表4 不同时间A型抗体检测结果（BJ）

3 分析与讨论

3.1 猪群接种口蹄疫疫苗后不良反应的大小和疫苗的生产工艺有直接的关系，疫苗中杂蛋白含量越低，副反应就越小。猪口蹄疫O型、A型二价合成肽疫苗接种后猪群精神状态均良好，采食量正常，未出现免疫副反应，这与口蹄疫合成肽疫苗的生产工艺有直接的关系[8-10]。

3.2 抗体检测结果表明，猪口蹄疫O型、A型二价合成肽疫苗免疫后产生抗体水平合格率高、免疫持续期长，二免后90d、120d抗体合格率仍可达到95%以上，能够为正常的生猪饲养周期（约180天）提供良好的保护。

3.3 从不同试剂盒检测结果的符合率来看，两种O型抗体检测试剂盒的合格率结果保持一致，而A型抗体检测试剂盒（BJ）的合格率相对较低，可能与试剂盒中包被的抗原极性和构象有关。因此，不建议使用该类试剂盒评价合成肽疫苗免疫后产生的A型抗体。

3.4 仔猪的首免日龄和母源抗体有直接的关系，母源抗体水平越高，对疫苗的拮抗作用越强[11-14]。因此此次接种前首先检测了母源抗体水平，确保疫苗免疫后不受母源抗体的干扰。