硫酸沙丁胺醇吸入气雾剂稳定性研究

黄洁瑕，肖海文，雷春华，王明巧，廖晓凤，林文辉，2△

（1. 广东同德药业有限公司，广东 湛江 524018； 2. 国家中药现代化工程技术研究中心·药用植物油研究＜湛江＞分中心，广东 湛江524018； 3. 湛江市明德医药科技有限公司，广东 湛江524018； 4. 国家中药现代化工程技术研究中心·艾草分中心，广东 广州510632）

硫酸沙丁胺醇吸入气雾剂是葛兰素史克公司产品万托林（Ventolin）的仿制品，临床主要用于缓解哮喘或慢性阻塞性肺部疾患（可逆性气道阻塞疾病）患者的支气管痉挛，及预防急性运动诱发的哮喘或其他过敏原诱发的支气管痉挛。制剂的稳定性不仅是评价制剂质量的重要指标，还是临床用药安全的重要保证，故制剂稳定性的考察尤为重要。本研究中根据2015 年版《中国药典（四部）》（通则9001）的《原料药物与制剂稳定性试验指导原则》及硫酸沙丁胺醇吸入气雾剂质量标准[1]，以硫酸沙丁胺醇吸入气雾剂的性状、沙丁胺酮、有关物质、递送剂量均一性、微细粒子剂量、含量测定、微生物限度为指标进行考察，分别进行影响因素试验、加速试验和长期试验，通过观察各指标的变化评价制剂的稳定性[2]，以期为该制剂的生产、质量控制、储藏条件等后续研究提供参考[3]。现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器

UltiMate 3000 型高效液相色谱仪（赛默飞世尔科技＜中国＞有限公司）；DHG-9070 型鼓风干燥箱，LHH-150GSP 型药品综合稳定性试验箱，均购自上海一恒科学仪器有限公司；AUW220D 型电子天平（上海右一仪器有限公司，十万分之一）；安德森多级撞击器（ACI，Copley Controls 公司）；BCD-215KS 型冰箱（青岛海尔股份有限公司）。

1.2 试药

沙丁胺酮对照品（批号为1437-069A2，Tlcpharmchem 公司）；硫酸沙丁胺醇对照品（批号为100328-200703）、硫酸特布他林对照品（批号为100273-2001202），均购自中国食品药品检定研究院；硫酸沙丁胺醇吸入气雾剂（批号分别为20160201，20160202，20160301，广东同德药业有限公司）；无水乙醇为分析纯；异丙醇、醋酸铵、磷酸、乙腈、甲醇、庚烷磺酸钠、磷酸二氢钾、磷酸二氢钠均为色谱纯；屈臣氏蒸馏水。

2 方法与结果

2.1 考察项目

2.1.1 性状

本品药液为白色或类白色混悬液。

2.1.2 有关物质

色谱条件：固定相为用辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相为庚烷磺酸钠溶液[取庚烷磺酸钠2.87 g 与磷酸二氢钾2.5 g，加水溶解并稀释至1 000 mL，用磷酸溶液（1→2）调节pH 至3.65] -乙腈（78 ∶22，V/ V）；流速为1.0 mL/min；检测波长为220 nm；进样量为20 μL。

溶液制备：取本品1 瓶，用乙醇将表面淋洗干净，冷冻10 min，取出，在铝盖上钻1 个小孔，插入注射针头（勿与液面接触），放至室温，待抛射剂气化挥尽后，除去铝盖，加流动相分次洗涤，合并洗液至50 mL 容量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。精密量取1 mL，置100 mL 容量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。取硫酸特布他林与硫酸沙丁胺醇适量，加流动相溶解并稀释制成每1 mL 中各约含0.2 mg 的溶液，作为系统适用性溶液。

2.1.3 沙丁胺酮

色谱条件：固定相为以辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相为以异丙醇-0.1 mol/L 醋酸铵缓冲液（pH=4.5，1.5 ∶98.5，V/ V）为流动相A，异丙醇为流动相B，进行线性梯度洗脱（见表1）；流速为1.0 mL/min；检测波长为276 nm；进样量为20 μL。

表1 流动相梯度洗脱程序

溶液制备：取有关物质项下的供试品溶液作为供试品溶液。取沙丁胺酮对照品适量，精密称定，加水溶解并定量稀释成每1 mL 中约含2.0 μg 的溶液，作为对照品溶液。

2.1.4 递送剂量均一性

取本品，按2015 年版《中国药典（四部）》（通则0111）操作，照含量测定项下的方法测定。

2.1.5 微细粒子剂量

照2015 年版《中国药典（四部）》（通则0951）中吸入制剂微细粒子空气动力学特性测定法操作，照含量测定项下的方法测定。

2.1.6 含量测定

色谱条件：固定相为用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相为磷酸盐缓冲液（取0.08 mol/L 磷酸二氢钠溶液，用磷酸调节pH 至3.10±0.05）-甲醇（85∶15，V/ V）；流速为1.0 mL/min；检测波长为276 nm；进样量为20 μL。

溶液制备：取本品，充分振摇，除去帽盖，试揿5 次，用流动相淋洗套口，充分干燥后，倒置于已加入一定量流动相作为吸收液的适宜烧杯中，将套口浸入吸收液液面下（至少25 mm），揿射10 次（注意每次揿射间隔5 s并缓缓振摇），取出，用流动相淋洗套口内外，合并吸收液与洗液，定量转移至100 mL 容量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。取硫酸沙丁胺醇对照品适量，精密称定，加流动相溶解并定量稀释制成每1 mL中约含12 μg 的溶液，作为对照品溶液。

2.1.7 微生物限度

应符合非无菌产品微生物限度检查。按2015 年版《中国药典（四部）》（通则1105、通则1106、通则1107）微生物计数法和控制菌检查法项下有关的各项规定、非无菌药品微生物限度标准。1 mL 供试品中需氧菌总数不得超过102cfu，霉菌和酵母菌数不得超过10 cfu，耐胆盐革兰阴性菌、大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌不得检出。

2.2 影响因素试验[4 -7]

高温试验：取硫酸沙丁胺醇吸入气雾剂（批号为20160201），60 ℃温度下放置10 d，于第5 天和第10 天取样检验。结果见表2。

高湿试验：取硫酸沙丁胺醇吸入气雾剂（批号为20160201），置恒湿密闭容器中，在25 ℃，相对湿度（90±5）%条件下放置10 d，分别于第5 天和第10 天取样检验。结果见表2。

光照试验：取硫酸沙丁胺醇吸入气雾剂（批号为20160201），放在装有日光灯的光照箱内，于照度为（4 500±500）lx 的条件下放置10 d，于第5 天和第10 天取样检验。结果见表2。

冻融试验（热循环试验）：对易发生相分离、黏度减小、沉淀或聚集的制剂，按《化学药物（原料药和制剂）稳定性研究技术指导原则（修订）》还应考虑进行低温试验。低温试验包括3 次循环，每次循环是先于2 ～8 ℃放置2 d，再在40 ℃放置2 d，取样检测。取硫酸沙丁胺醇吸入气雾剂（批号为20160201），在4 ℃下放置2 d 和40 ℃下放置2 d 为1 个循环，共循环3 次。每完成1 个循环，取样检测。结果见表3。

2.3 加速试验[4 -7]

取硫酸沙丁胺醇吸入气雾剂3 批（批号分别为20160201，20160202，20160301），在温度（40±2）℃、相对湿度（75±5）%的条件下放置6 个月。在试验期间第1，2，3，6 个月末分别取样1 次。结果见表4。

表2 硫酸沙丁胺醇吸入气雾剂影响因素试验结果

表3 硫酸沙丁胺醇吸入气雾剂冻融试验结果

表5 硫酸沙丁胺醇吸入气雾剂长期稳定性试验结果（批号为20160201 /20160202 /20160301）

2.4 长期稳定性试验[4 -7]

硫酸沙丁胺醇吸入气雾剂3 批（批号分别为20160201，20160202，20160301），在温度（25±2）℃、相对湿度（60±10）%的条件下放置24 个月，分别于3，6，9，12，18，24 个月取样。结果见表5。

2.5 有效期确定

在确定有效期的统计分析过程中，一般选择可以定量指标进行处理，通常根据药物含量变化计算，按照长期试验测定数值，以标示量（%）对时间进行直线回归，获得回归方程，求出各时间点标示量的计算值（y′），然后计算标示量（y′）95%单侧可信限的置信区间为y′±z。

式中，tN-2为概率0.05，自由度N-2 的t单侧分布值，N为数组；X0为给定自变量；为自变量X的平均值。

式中，Q=Lyy-bLxy；Lyy为y的离差平方和，Lyy=∑y2-（∑y）2/N；Lxy为xy的离差乘积之和Lxy=∑xy-（∑x）（∑y）/N；b为直线斜率[8-9]。

按照长期试验测定数值，分别对各组估计数据（X，y′），下限（X，y′ -z），上限（X，y′ +z）作趋势线。以二次曲线进行回归，根据需要的限值代入计算。结果见表6。

表6 有效期计算结果

3 讨论

本研究结果显示，经过影响因素试验、6 个月加速试验及24 个月长期试验等稳定性考察，性状、沙丁胺酮、有关物质、递送剂量均一性、微细粒子剂量、含量测定、微生物限度，各项指标测定结果均未发生明显变化，表明本品制备工艺、包装与贮存条件能保证产品的稳定性，能为药理研究提供稳定、可靠的样品。本产品加入了微粉化工序，使药粉粒径控制在5 μm 以下，采用环保型抛射剂（药物推动剂）四氟乙烷替代非环保型抛射剂，符合我国吸入药用气雾剂抛射剂更新升级要求，且提高了药物的稳定性。同时，通过控制粒子表面电荷或利用空间结构达到粒子间相互隔阂，实现了混悬液的稳定。根据长期试验测定数值，3 批硫酸沙丁胺醇吸入气雾剂样品的预测有效期均大于60 个月，有效期暂定为24 个月。